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1、 肠道菌群变化与炎症性肠病相关性研究 陈杨芳邹珂摘要 目的 探討炎症性肠病（IBD）患者的肠道菌群变化及肠道菌群与炎症性肠病的相关性。 方法 选取2017年9月2018年9月入院接受诊疗的120例成人炎症性肠病活动期患者作为本次研究对象，其中溃疡性结肠炎（UC）患者75例，克罗恩病（CD）45例，另选择50例健康查体者作为对照组。采集各组新鲜粪便，使用梯度稀释法定量培养肠道菌群;采用全自动血液分析仪检验血液标本的C反应蛋白和白细胞计数。 结果 UC组和CD组粪便样本中大肠杆菌、肠球菌、拟杆菌数量均高于对照组（P0.05），UC组和CD组粪便样本中双歧杆菌、乳酸杆菌、柔嫩梭菌数量均低于对照组（P
2、0.05），UC组粪便样本中的柔嫩梭菌数量高于CD组（P0.05），UC组粪便样本中的拟杆菌数量低于CD组（P0.05），具有可比性。纳入标准：（1）UC组和CD组的研究对象均符合国内现行炎症性肠病的诊断标准3：（2）所有患者及其家属均对本研究知情并签署知情同意书，且本研究已获我院伦理委员会批准。排除标准：排除具有传染病、消化道炎症性疾病、自身免疫性疾病、寄生虫感染等疾病者。1.2 方法对UC组、CD组和对照组的肠道菌群数量和炎性指标进行监测分析。1.2.1 肠道菌群的检测 取所有研究对象自然排出的新鲜粪便约0.5 g，迅速置入厌氧罐内，用稀释液将其稀释至10倍，取10 L进行预备接种。将肠球
3、菌（Enterococcus，EC）、大肠杆菌（Escherichia coli，EMB）、双歧杆菌（Bifidobacterium，BL）、乳杆菌（Lactobacillus，LC）、梭状芽孢杆菌、拟杆菌（Bacteroides，BD）、柔嫩梭菌（Clostridium，CL）群列为肠道菌群代表并选择相应的培养基。肠球菌、大肠杆菌用氧培养基培养，双歧杆菌和乳酸杆菌用厌氧培养基进行培养。在日本光冈知足法的基础上，利用细菌三级鉴定法将细菌鉴定到属的水平，以标准滴管（47滴/mL）按由高到低的稀释度滴种，滴管尖端离培养基表面5 cm，按不同菌种的正常值，每个平板分为3个稀释度。37培养48 h 后
4、，计数菌落数。检测下限是2102 CUF/g湿便，且所有菌落结果数据需取其对数LgN（CFU/g）后再记录。1.2.2 炎症指标检验 检验前禁止饮食12 h，在第2日清晨抽取2 mL空腹静脉血，采用全自动血液分析仪检验血液标本的C反应蛋白和白细胞计数，做好相关数据记录。1.3 观察指标（1）肠道菌群：观察统计各组粪便样本中肠球菌（EC）、大肠杆菌（EMB）、双歧杆菌（BL）、乳杆菌（LC）、拟杆菌（BD）、柔嫩梭菌（CL）的数量。（2）对各组血常规检查结果进行对照分析。（3）菌群数目和炎症指标之间的相关系数0.4时，认为存在关联性4。1.4 统计学处理采用SPSS19.0统计学软件进行数据处理
5、，计数资料以n（%）表示，组间比较采用2检验，正态分布计量资料以（xs）表示，组间比较采用t检验;炎症指标和菌群数量间的相关性用双变量相关分析法进行处理，P0.05为差异有统计学意义。2 结果2.1 UC组、CD组、对照组肠道菌群数量的变化及比较UC组和CD组粪便样本中大肠杆菌、肠球菌、拟杆菌数量均高于对照组（P0.05），UC组和CD组粪便样本中双歧杆菌、乳酸杆菌、柔嫩梭菌数量均低于对照组（P0.05），UC组粪便样本中的柔嫩梭菌数量高于CD组（P0.05），UC组粪便样本中的拟杆菌数量低于CD组（P0.05），见表1。2.2各组炎症指标的比较UC组和CD组C反应蛋白和白细胞计数均高于对照组
6、（P0.05），见表2。2.3 UC组和CD组炎症指标和菌群数目间的相关性UC组白细胞数目与肠球菌（r=-0.751）呈负相关，C反应蛋白与肠球菌（r=-0.587）、大肠杆菌（r=-0.742）、双歧杆菌（r=-0.801）呈负相关，见表3;CD组与本次检测的菌群均无相关性，见表4。3 讨论IBD是一类病变部位连续性分布于结肠黏膜和黏膜下层，不易治愈的肠道慢性非特异性炎性疾病，包括UC和CD。据流行病调查显示，目前我国炎症性肠病的发病率逐年上升5。但IBD的病因和发病机制尚未完全明确，有研究认为IBD是一種由变异或致病性肠道菌群在基因易感人群中引起的炎性疾病6-7，是遗传、微生态环境及黏膜的
7、免疫应答共同作用的结果，但尚未发现特定的病原体8。因此，明确IBD的发病机制，准确判断疾病分型，从而制定相应的治疗策略是目前临床相关研究应侧重的方向。从菌群数量可见，大肠杆菌、肠球菌、拟杆菌此类有害菌在IBD患者肠道类的数量均高于健康人群，肠道有益菌如乳酸杆菌、双歧杆菌和柔嫩梭菌的数量均低于健康人群9，其中CD组的拟杆菌数量大于UC 组，CD组的柔嫩梭菌数量小于UC 组。IBD患者肠道菌群结构相比健康人群发生较大变化，肠道有害菌群增加、有益菌群相对减少、菌群的生物多样性减少，导致肠道菌群失调，这可能与炎症性肠病的发病机制密切相关10-11。除了与健康人群的肠道菌群分布有差异外，不同IBD患者之间也存在差异12。在本次研究中，CD组的拟杆菌数量大于UC组，而柔嫩梭菌的数量则小于UC组。在临床疾病诊断和疾病分型上，可以考虑利用菌群所表现出的不同失衡特点来辅助诊断疾病13，缓解IBD患者因肠道镜检带来的痛苦。根据本次
