实验室管理小结doc

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1、第三章 方法学选择与评价1.什么是方法学评价？一般包括？ 答：方法学评价是通过实验室途径测定分析方法的技术性能，并评价其是否可接受，其目的在于明确该是否具有足够的方法性能来说明检测系统的可靠性及可以满足临床需求。一般包括 ：准确度、精确度、检测限、生物参考区间、可报告范围等。 2.实验方法的分级？3个方法各自的定义？用途？ 答：决定性方法：是准确度最高系统误差最小、经过研究证明尚未发现其不准确度或不精密度的方法，其测量结果与“真值最为接近，因此具有权威性。这类方法主要用于评价参考方法和对一级标准品进行定值，而不直接用于鉴定常规方法。 参考方法：是准确度和精确度已经充分证实，干扰因素少，系统误差

2、与重复测定的随机误差相比可以忽略不计，有适当的灵敏度、特异性及较宽的分析范围。这类方法主要用于鉴定常规方法，也用于二级参考物和质控血清定值，或用于商品试剂盒的质量评价等。 常规方法：指性能指标符合临床需求，有足够的精密度、准确度、特异性和适当的分析范围，经济实用的临床常规检验方法。3.什么是参考物？分类？各自的用途？ 答：参考物也称标准品或标准物质，它的一种或几种物理或化学成分已经充分确定，可用于校准仪器、评价测定方法或给其他物质定值的物质。 分类：一级参考物：是含量确定的稳定而均一的物质，它的数值已由决定性方法或由高度准确的假设干方法确定。用于矫正决定性方法，评价及校正参考方法以及为“二级参

3、考物定值，一级参考物均有证书。 二级参考物：是纯溶液水或有机溶剂或某种特殊基质的纯溶液。这类参考物可有实验室自己配置或为商品，其物质的量有参考方法定值或用一级参考物比较而确定。主要用于常规方法的标化或为控制物定值。 校准物：有冻干品或溶液，可以用一级或二级参考物以参考方法定值。用于对常规方法和仪器的校准。控制物：即质控品，具有与检测过程相适应的特征，其成分及基质与检测的样本相同或相似，且均一、稳定。用于常规质量监控。4.方法选择的原那么？ 答：实用性：一般应具备样本用量少、分析速度快或可同时进行多项目和多样本的分析；方法操作简便、试剂种类少、易于实现自动化、操作人员无需特殊培训等；安全可靠、试

4、剂无毒、无需特殊防护措施；试剂价格低廉，无需昂贵的试剂和设备。 可靠性：应具有较高的精密度和准确度，以及较宽的检测范围。精密度即变异系数CV%一般应小于5%。准确度是指测定值与“真值的符合程度，一般偏差系数CB应小于5%。特异性是指与待测物质起化学反应，不与其他结构类似的化合物发生反应。检测能力用检测限度或“检出限衡量。检测限通常是指能与适当的“空白读数相区别的，检测系统可以检出的待测物的最小量。5.方法选择与评价的基本步骤？ 答：提出要求：为了满足临床建立新的检测方法or对原来的实验方法进行改造。 收集资料：查阅文献，参考资料，要求相关公司提供资料。 确定候选方法：检测方法的原理、原始参考资

5、料以及仪器试剂供应保障。试剂和参考物质的成分、包装量、开瓶前后的保存条件、稳定性eg有效期等。是否符合生物安全的要求，可能产生的危害，安全防范措施及应急预案。样本的要求、采样条件、样本量、抗凝剂、防腐剂和必要的保存条件等。准确度、精密度、灵敏度、特异性和参考区间等的初步评价。建立试验方法的标准化操作规程，即SOP文件。试验所用的设备、设施等要求，以及方法的局限性。可以获得的服务与技术支持。候选方法的初步评价：标准曲线的线性范围及重复性。质控血清和新鲜标本的重复性试验，以初步考查方法的精确度。分析不同浓度的标本，并与公认的参考方法比对，以初步考查方法的准确度。仪器和商品化试剂符合国家有关规定的证

6、明。6.定性实验的方法学评价有哪些？ 答：重复性研究和方法学比较。7.定性实验重复性研究具体步骤？ 答：确定方法的临界值：同一份样本，在多次重复实验中各有50%的几率获得阳性或阴性结果时该分析物的浓度。在临界值基础上准备出20%的浓度样本。对以上样本分别测定20次，记录阳性和阴性结果数。当实验结果说明“临界值样本的阴性结果和阳性结果不是各占50%时，原因可能是：被评估的临界值浓度不准确、结果数据不充分、方法学剂量反应曲线在临界值处是非线性的。当实验结果说明+20%浓度的样本产生阳性结果数95%，同时，-20%浓度的样本产生阴性结果数95%，说明临界值20%浓度范围等于或超出临界值的95%区间。

7、对于被测物质浓度在临界值20%浓度范围以外的样本，实验方法将给出稳定的结果。当阳性和或阴性结果95%时，应另外准备不同浓度的实验样本，重新进行评价。8.定性实验方法学比较的实验过程，数据分析性能指标有哪些、如何计算？ 答：定性实验性能评价指标通常有灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值和符合率。阳性阴性总数阳性A真阳性B假阳性A+B阴性C假阴性D真阴性C+D总数A+CB+DNA+B+C+D 灵敏度=A/A+C*100% 实际患者正确诊断为阳性的百分率 特异性=B/B+D*100% 实际无病正确诊断为阴性的百分率 阳性预测值=A/A+B*100% 实际结果为阳性的标本中确实患病的百分比 阴性预测

8、值=D/C+ D*100% 实际结果为阴性的标本中确实无病的百分比9.实验室最易实现的量值溯源的长期评估方法？ 答：室间质量评价EQA是最易实现的量值溯源的长期评估方法。10.系统误差和随机误差的区别？ 答：系统误差SE是指在对同一被测量的多次测试中，它保持不变或按某种规律而变化，又称方法误差、固定误差。一般有恒定的因素引起，并在一定条件下多次测量中重复出现。系统误差可以被认识并校正。 随机误差RE是指在对同一被测量的多次测试中，它受偶然因素影响影响而以不可预知的方式变化，又称偶然误差。误差无一定的大小和方向，数据呈正态分布。随机误差无法控制，是无法校正的。11.如何理解测量的不确定度？ 答：

9、不确定度是指在统计控制状态下赋予被测量之值的分散性。任何测量结果都有不确定性，不确定度反映的是对测量结果的怀疑程度，代表测量结果的质量。12.准确度与误差的区别？ 答：准确度是指测量值与真值的接近程度，一般用偏差和偏差系数表示，即反映不确定度。 误差是指测量结果与被测量值的真值或约定真值之差。13.准确度的评价方法有哪些？ 答：准确度的常用评价方法有回收试验、干扰试验、方法比对试验等。14.回收试验的要求与步骤？ 答：回收试验用于评估实验方法的正确测定在常规样本中加入的纯分析物的能力，结果用回收率表示，对试验方法的准确度进行评价。 回收率%=回收浓度/加入浓度*100% 加入浓度=标准液浓度*

10、标准液体积/基础样本体积+标准液体积 回收浓度=样本最终测定浓度-基础样本浓度 基本步骤：制备样本：在常规检测样本中分别加入一定量的待测标准物和同样量的溶剂以制作回收样本和基础样本。回收样本可是多组不同浓度，求平均回收率计算加入的待测物A的浓度。用实验方法测定样本中待测物A的浓度计算回收率。考前须知：使用常规样品基质。尽可能减少在被测物在样本中的体积比10%吸量准确加入的待测物浓度：在保证总总浓度在方法分析测量范围内，最好使加入标准液后的样本中被测物浓度达到医学决定水平。标准液浓度：加标准液体积占总体积的10%以内，即被稀释约10倍，配制的标准液浓度应为回收浓度的10倍。重复测定：每个样本通常

11、重复测定23次,减少随机误差的干扰；一般应作高、中、低不同浓度的回收试验，计算各浓度的平均回收率。计算比例系统误差：比例系统误差=100%-平均回收率可接受性判断：将比例系统误差的大小与CLIA88规定的TEa标准进行比较，小于Tea即可接受。 15.干扰试验的要求与步骤？ 答：基本原理：将阳性干扰物加入临床标本的混合液干扰测定样本中，与不加干扰物的同一混合液干扰对照样本组比较有无偏倚，称为“配对差异。混合液的干扰物浓度应具有临床决定水平。一般最有效的方法是在较高浓度下对系列可能的干扰物做初步筛选。如果不具有临床显著意义，那么该物质不是干扰物，没必要进一步做实验。试验步骤：制备样本：将可能引起

12、干扰的物质配成一定浓度的溶液，加到病人样本中成为干扰分析样本；原病人样本中加入相同量的无干扰物质的溶剂作为基础样本。干扰测定样本-干扰物+病人样本；干扰对照样本-无干扰的溶剂+病人样本。检测：对次两种同时测定，两者之差即表示该干扰物质产生的干扰所引起的误差，即干扰值。 计算：干扰值=干扰样本测得值-基础样本测得值考前须知：试验标本：患者样本来源方便。吸量准确：吸量的准确度要尽可能高，以保证干扰样本和基础样本的体积一致。加入干扰物的浓度、体积：浓度尽可能达到病理标本的最高浓度值，体积要尽可能小，以减少稀释。干扰物的选择：根据方法的反应原理、厂家的建议和文献提示选择可能的干扰物。测定次数：每个样本

13、重复测定23次。可接受性判断：将干扰引起系统误差的大小与CLIA88规定的总允许误差标准差进行比较，小于总允许误差标准差即可接受。 方法学评价：人为加入干扰物方法的局限性：在临床标本中的真实干扰物可能不是原来的药物而是代谢产物；实验标本基质并不代表典型的有问题的临床标本；加入的物质与临床标本中的干扰物不相同。16.方法比对试验的要求与步骤？ 答：方法比对试验是指把试验方法待评价或带验证的方法与比对方法参考方法或准确已经知道的方法进行比较，从而测定结果间的差异了解待测评价方法的检测结果的偏倚。方法比对试验通常是对新鲜患者标本进行检测，最少在5个工作日对最少40分适当选择的患者标本进行检测。基本方

14、法：“使用患者样本的方法比对和偏倚评估进行，用试验方法和比对方法同时测定同一组患者新鲜样本，分析两个检测系统测定结果的差异，得到恒定或比例系统误差的数据。实验方法-新方法；比对方法-旧方法or参考方法试验要点：样本要求：新鲜样本为试验标本。标本数量至少40例。其浓度要尽可能覆盖整个可报告范围，尽可能使得试验标本分析物的含量在参考区间外、可报告范围内。比较方法：选择准确度高的参考方法作为比较方法，可把方法间的任何分析误差都归于试验方法。原那么上，比较方法具有良好的精密度，无已经知道干扰物，分析范围至少与试验方法相同。标本测定：应在2h内检测完毕。每天8个标本在不同的分析批测定，将标本按12345

15、678顺序先测一遍，然后87654321做双份第二次测定。连续测定5天，共40个标本。结果分析：作图分析：最基本的分析技术。可绘制散点图和偏差图。作图可初步了解线性关系、有无明显离群是否呈恒定变异等情况。离群点的检查：依次求出Y1和X1的差值，Y2和X2的差值等，并计算出所有标本的平均差值，以4倍平均差值为判断限值。所有差值都不应超出限值。有一个离群点，剔除，补做。一个以上检查原因。标本内分析物含量的统计分析检验：相关系数r。r20.95认为取值范围恰当；r20.95应扩大标本的浓度范围在评估。线性回归统计：回归方程：Y=a+bX 系统误差SESE=(b-1)Xc+a 临床可接受性能判断：SE1/2总允许误差TEa。 17.精密度是什么？ 答：精密度是指测量程序在相同条件下，对同一样本进行连续多次测量所得结果之间的一致性，是表示测定结果中随机误差大小程度的指标。 用标注差