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1、异硫氟酸荧光素及氢离子响应关系探究摘要：通过异硫氤酸荧光素在酸性溶液中激发光谱、发射 光谱的扫描，确定了其最大激发、发射波长分别为440nm、 520miio在激发波长440 nm、发射波长520nm处，测定不同浓 度盐酸溶液的相对荧光强度，研究结果表明：在 0. 10mol光谱；响应关系目前荧光法1已经广泛应用于化学、化工、生物、医 药、卫生、农业、轻工、冶金、地质以及环境保护等各个领 域，可以根据荧光法鉴别和测定的有机物、无机物、生物物 质、医药物质、污染毒物等的数量与日俱增，它已经成为分 析化学及相关学科领域重要的分析方法和测试手段之一。荧 光光谱法的优点是灵敏度高、选择性好、分析方法简
2、单快速、 试样量少等。选取异硫氤酸荧光素(FITC)做荧光示踪剂，扫 描其在酸中的吸收光谱、激发光谱、发射光谱，确定它的最 大激发和发射波长;探究FITC的荧光强度和氢离子浓度之间 的相关性，寻找F(荧光强度)与c (H+)的最佳响应区间。1实验部分1. 1实验仪器LS-50型荧光分光光度计；电子天平；恒温干燥箱；容量 瓶；塑料烧杯;移液管;碱式滴定管等。1.2实验试剂异硫氧酸荧光素（优级纯 美国Amresco）:盐酸（分析纯）; 无水乙醇（分析纯）;二次蒸馆水等。1.3发射光谱的扫描用lcm3移液管准确移取1. 00cm3 3. 59X 10-6mol dm-3FITC溶液于10cm3容量瓶
3、，用不同浓度的盐酸溶液稀释 到刻度线，用LS-50荧光分光光度计扫描其激发光谱和发射 光谱，狭缝宽度为15nm,扫描速度为500nm min-l。1.4 FITC荧光强度与氢离子浓度的响应关系固定激发波长，用LS-50型荧光分光光度计扫描样品和 对应参比溶液的发射光谱记录荧光强度。其中样品溶液为 3. 59X10-7mol dm-3 FITC对应的一系列盐酸溶液，其中盐 酸的浓度从0. lOmol dm-3到3. OOmol dm-3;参比为1. 00cm3乙醇和9. 00cm3相应浓度盐酸的混合溶液。2实验结果与讨论2. 1光谱波长的确定用LS-50荧光分光光度计扫描FITC（3. 59X1
4、0-7mol 血-3）对应不同浓度盐酸的激发光谱和发射光谱，结果发现： 在强酸性溶液中FITC激发峰和发射峰分别位于440nm.520nm 左右，其光谱见图1、2o2.2 FITC与氢离子的响应关系将激发波长固定在440nm,发射波长固定在520nm,用荧 光分光光度计(fctr=l)扫描FITC(3. 59X10-7moldm-3)的 荧光光谱，其中盐酸的浓度为0. lOmol dm-33. OOmol dm-3,将测得相对荧光值(F)列于表中。以表相对荧光强度为纵坐标，溶液中的氢离子浓度为横 坐标，绘制相对Fc(HCl)的关系曲线，见图3。由图3可以看出：氢离子浓度在0. lOmol dm
5、-3 0. 70mol - dm-3范围内.FITC的相对荧光强度与氢离子浓度 有好的线性关系，线性回归方程和相关系数R2分别 为:F=97. 457-107c(H+),R2=0. 9867。3结论(1) 在强酸性溶液中，异硫氧酸荧光素的最大激发和发 射波长分别为440nm、520nm,在此波长下，以异硫氧酸荧光素 为示踪剂进行荧光分析时，可得到最大的测定灵敏度；(2) 氢离子浓度在0. 100. 70moldm-3范围内，FITC的 相对荧光强度与氢离子浓度有很好的线性关系，可利用这一 好的线性关系建立一种测定酸液氢离子浓度的方法。参考文献：11陈国珍，黄贤智，郑朱梓，等荧光分析法第二版. 北京：科学出版社,1990： 146-1472 Li Ying Ma, Huai You Wang, Hui Xie , et al. A long lifetime chemical sensor：:study on fluorescenee property of fluorescein isothiocyanate and preparation of pH chemical sensor Spectrochimica Acta Part A： Molecular and Biomolecular Spectroscopy, 2004； 60(8-9):1865-1872
