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1、44文件编号：LABOPMY020第 页，共 页 版本：A/0生效日期：2008-02-01XXXXXX 医院检验科免疫室分析项目作业指导书 Cobas E 601/E 411CC-肽(C-Peptide)1. 分析原理采用双抗体夹心法原理，整个过程18分钟完成。 第1步：20l标本、生物素化的抗C-肽单克隆抗体和钌（Ru）标记的抗C-肽单克隆抗体混匀，形成夹心复合物。 第2步：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。 第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行
2、测定。检测结果由机器自动从标准曲线上查出。此曲线由仪器通过2点定标校正，由从试剂条形码扫入仪器的原版标准曲线而得。2. 标本要求血清：按标准常规方法采集。血浆：肝素锂或EDTA-K3抗凝。24h尿：检测前使用Elecsys 多项目稀释液（Diluent MultiAssay）进行1：10稀释。标本在15-25度可稳定4小时，在28度可稳定24小时，-20可稳定30天。标本只可冻融1次。有沉淀的标本使用前需离心。不可使用加热灭活的标本。标本和质控品禁用叠氮钠防腐。标本、定标液和质控品在测定前应预温到室温；放入仪器后应在2小时内测定以避免蒸发的影响。3. 试剂、校准品、质控品和其他所需材料采用罗氏
3、原装配套试剂。试剂：M： 链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1瓶，6.5ml。粒子浓度0.72mg/ml，生物素结合能力： 470ng生物素/mg粒子。含防腐剂。R1：生物素化的抗C-肽单克隆抗体（灰盖），1瓶，9ml，浓度1mg/l，磷酸缓冲液50mmol/l，pH6.0含防腐剂。R2：Ru(bpy)32+标记的抗C-肽单克隆抗体（黑盖），1瓶，9ml。浓度0.4mg/l，磷酸缓冲液50mmol/l，pH 6.0含防腐剂。校准品（货号03184919190）：Cal 1 阴性定标液（白盖），2瓶，1.0ml/瓶，C-肽浓度约为0.5 ng/ml,人血清，含防腐剂Cal 2 阳性定标液（黑盖）
4、，2瓶，1.0ml/瓶，C-肽浓度约为20 ng/ml,人血清，含防腐剂质控品：Elecsys Precicontrol MultiAnalyte质控品1和2，货号03609979190其他所需材料：Elecsys 多项目稀释液（Diluent MultiAssay），货号 Cobas E 601或 E411分析仪 E411分析仪需要： Elecsys 系统缓冲液（ProCell）货号11662988 Elecsys测量池清洗液（CleanCell）货号11662970 Elecsys 添加剂液（SysWash）货号11930346 Elecsys 系统清洗液（SysClean）货号11298
5、500 E601分析仪需要： Elecsys 系统缓冲液（ProCell）货号12135019 Elecsys测量池清洗液（CleanCell）货号12135027 Elecsys 系统清洗液（SysClean）货号112985004. 仪器和校准使用仪器：瑞士罗氏诊断公司生产E 601/E 411全自动电化学发光免疫自动分析仪仪器校准：每批C-Peptide试剂盒必须用新鲜试剂和C-Peptide Cal 1,Cal 2定标一次。另外，以下情况需要再次定标：E601/E 411： 一个月（同一批号试剂） 7天（放置仪器上的同一试剂盒）各种分析仪均适用的情况：根据要求进行定标：如质控结果超出范
6、围时；根据规定进行定标。5. 操作步骤（以Cobas E 601为例）5.1 校准操作步骤：在编缉各项目的参数时，已经在ApplicationCalib菜单中定义好了定标类型和几点定标。因此在对各项目进行定标时，只需在定标菜单Calibration中进行即可。3.2进入CalibrationStatus菜单，用鼠标选择需定标的项目，再根据需要点单点定标（BLANK键）或两点定标（TWO POINT键）、跨距定标（SPAN键）、多点定标（FULL键），再选择其它项目进行相应选择，最后点SAVE，将定标物放入在CalibrationCalibrator中定义好的位置，点Start，再点Start，
7、仪器开始定标。 在CalibrationStatus菜单中看定标结果，点Calibration Result键看定标结果，点Reaction Monitor键看每个定标物的反应曲线。5.2 样本检测程序： 单个样本输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection，在Sequence No栏输入标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目，点SAVE键，样本号自动累加。批量常规标本的输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection，在Sequence No栏输入起始标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目，点REPEAT，输入该批标本的最后一个标本
8、号，点OK即可。进样分析，将标本按在Workplace菜单中输入的标本号顺序在样本架上排好，放入进样盘内,按START键，输入该批上机标本的起始标本号，再点START键，仪器自动开始推架检测标本。6. 质量控制用Elecsys Precicontrol MultiAnalyte质控品1和2。质控品1和质控品2至少每24小时或每一次定标后测定一次。质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应采取校正措施。7. 计算方法 分析仪自动计算得出每份标本的测定浓度，单位可为ng/ml或ug/l。8. 参考范围血清和血浆：健康空腹人群C-肽浓度：0.78-1
9、.89ng/ml或0.25-0.6nmol/l尿C-肽浓度：7426ug/l(ng/ml)9. 分析性能测定范围：血清和血浆：0.01-40ng/ml或0.003-13.3nmol/l。C-肽的浓度低于检测最低限则报告为0.01ng/ml(0.003nmol/l),而高于最高检测上限则报告为40ng/ml(13.3nmol/l),如果10倍稀释标本则为400ng/ml(133nmol/l)尿液：0.1-400ng/ml或0.03-133nmol/l（尿液采用Elecsys Diluent MultiAssay以1：10稀释），C-肽的浓度低于检测最低限则报告为0.1ng/ml(0.03nmol
10、/l),而高于最高检测上限则报告为400ng/ml(133nmol/l)10. 干扰因素该方法不受黄疸（胆红素855umol/l或50mg/dl）、溶血（血红蛋白0.186mmol/l或1.8g/dl）、脂血（脂质2000mg/dl）和生物素（205nmol/l或5mg/天）治疗的病人，至少要等最后一次摄入生物素8小时后才能采血。不受类风湿因子干扰（1200U/ml）。当C-肽浓度达180ng/ml(60nmol/l)未出现钩状效应。体外对17种血清常用药物和13总尿液常用药物进行试验未发现药物对本测定有影响。由于本试剂盒使用单克隆鼠抗体，所以因治疗或诊断需要而接受单克隆鼠抗体的患者，其标本检
11、测结果可能有误。极少数标本中可出现大量抗链酶亲和素抗体和抗钌抗体而影响测定结果。所以，在诊断中必须结合病人病史、各项实验室检查以及其它临床资料来综合评估测定结果。11. 临床意义C-肽是一条含有31个氨基酸（AA3363）的单链，连接（C）多肽，分子量约为3021道尔顿。在胰岛素生物合成过程中，C-肽作为副产物通过胰岛素原分子蛋白水解作用与胰岛素一起生成，储存在胰腺细胞高尔基体分泌颗粒中。前胰岛素原分裂形成胰岛素原。C-肽具有非常重要的功能，连接胰岛素两条链（A-和B-链）和形成胰岛素原分子间双硫键连接结构。胰岛素和C-肽以同等量被分泌，并通过肝门静脉释放入体液循环。与有一半胰岛素在肝内降解不
12、同，几乎没有C-肽在肝内降解，C-肽比胰岛素有更长的半衰期（大约35分钟）；并且外周循环中C-肽浓度较胰岛素高5-10倍，浓度波动也较小。肝脏不降解C-肽，其主要由肾脏循环降解除去，一部分通过尿液直接排泄。尿液中C-肽浓度大约是血清中的20-50倍。因此，有肾脏疾病的患者其C-肽浓度升高。在过去C-肽被认为是无生物活性作用的。但是，最近的研究证实C-肽具有分子和生理上的作用，提示C-肽实际上是一种生物活性肽。有证据表明C-肽替代剂和胰岛素一起服用可以阻止I型糖尿病进一步发展或减缓其长期并发症发生。C-肽、胰岛素和葡萄糖测定被用于辅助鉴别诊断低血糖症（假性低血糖症和高胰岛素血症引起的低血糖症），
13、以确保给予患者合适的处理和治疗。为量化内源性胰岛素分泌，C-肽测定是基础，包括禁食后、刺激后和抑制后试验。因为内源性胰岛素抗体较多，C-肽浓度较胰岛素本身浓度在用胰岛素治疗糖尿病时反映内源性胰腺胰岛素分泌情况更可靠，因此，C-肽测定可以辅助评估I型糖尿病早期残留细胞的功能，以及鉴别诊断潜在的成人自身免疫糖尿病（LADA）和2-型糖尿病。C-肽测定也用于评定胰岛移植是否成功和胰腺切除术后检测。当需要持续评定细胞功能，或者不能获得多次血标本（如儿童）时，就需要测定尿液C-肽浓度。尿中C-肽排泄量将用于评估妊娠期糖尿病和胰岛素依赖性糖尿病（IDDM）血糖控制不稳定患者的胰腺功能。尽管常规糖尿病监测时不要求测定C-肽，但它是决定个体化治疗的有效手段，个体化治疗在理想长期新陈代谢控制方面非常必要。C-肽浓度增加可能是高胰岛素血症的细胞活性增强造成，也可能是肾功能不全和肥胖导致。C-肽浓度升高与高脂蛋白血症以及高血压有关。C-肽浓度降低见于下列情况：饥饿，假性低血糖症，低胰岛素血症，（NIDDM、IDDM），阿狄森氏病和胰腺切除根治术后。12参考文献编写： 审核： 批准：批准日期： 年 月 日
