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1、生物制药工艺学生物制药：是利用生物体、生物组织、细胞或其成分，综合应用生物学与医学、生物化学与分子生物学、微生物学与免疫学、物理化学与工程学和药学的原理与方法加工制造而成的一类用于预防、诊断、治疗和康复保健的制品。生物制品：是应用普通的或以基因工程、细胞工程、蛋白质工程、发酵工程等生物技术获得的微生物、细胞及各种动物和人源的组织和液体等生物材料制备的，用于人类疾病预防、诊断、治疗的药品。生物制药工艺学：是从事各种生物药物的研究、生产和制剂的综合应用的科学。DNA重组技术：指将DNA片段按人们的设计方案定向地与载体相连，并转入到特定的受体细胞，构建成工程菌或细胞，实现遗传物质的重新组合，并使目的
2、基因在工程菌内进行复制和表达的技术。包涵体：是指由于表达部位的低电势及外源蛋白分子的特殊结构，使外源蛋白与其周围的杂蛋白、核酸等形成的不溶性聚合体。盐析法:是利用各种生物分子在浓盐溶液中溶解度的差异，通过向溶液中引入一定数量的中性盐，使目的物或杂质蛋白以沉淀的形式析出，从而达到纯化目的的方法。吸附法：指吸附作用，将样品中的生物活性物质或杂质吸附于适当的吸附剂上，利用吸附剂对活性物质和杂质间吸附能力的差异，是目的物和其他物质分离，达到浓缩和提纯目的的方法。离子交换法：是利用溶液中各种带点粒子与离子交换剂之间结合力的差异进行物质分离的操作方法。亲和层析：是利用生物体中多数大分子物质具有与某些相应的
3、分子专一性可逆结合的特性而建立的分离纯化技术。接臂：由于酶的活性中心常是埋藏在其结构内部，他们与介质的空间障碍影响其与亲和配基的结合作用，为了改变这一情况，可在载体与配基间插入一个“手臂”以消除空间障碍，这种方法称之。沉降速度法：根据物质颗粒在离心力力场中移动速度来测定其沉降系数或分子量的方法。沉降平衡：经适当时间离心后，同时向两个方向运动的分子数处于相等状态，此时离心池中各位点的溶质浓度不再随时间变化，称为沉降平衡。沉降平衡法：用沉降平衡过程测定大分子生物药物与其他大分子物质的沉降系数和分子量的技术称之。沉降系数：在单位离心力场中，颗粒的沉降速度氨基酸输液：多种结晶L-氨基酸依特定比例混合制
4、成的静脉内输注液尿激酶是一种碱性蛋白水解酶，血纤维蛋白溶酶原是他唯一的天然蛋白质底物，他作用于精氨酸-颉氨酸键使纤溶酶原转为纤溶酶，防止血栓梗塞。 离心的方法：差分离心法，速度区带离心法，等密度区带离心法过饱和溶液的形成方法：1蒸发法；2温度诱导法；3盐析结晶法；4透析结晶法；5有机溶剂结晶法；6等电点法；7微量扩散法；8化学反应结晶法；9共沸蒸馏结晶。蛋白质分离纯化的方法（原理）：1根据蛋白质等电点的不同来纯化蛋白质；2分子形状和大小；3溶解度；4电离性质；5功能专一性。保持目的物生物活性的方法：1.采用缓冲系统；2.添加保护剂；3.抑制水解酶的作用；4.其他保护措施。 生物活性物质的浓缩方
5、法：1.盐析浓缩；2.有机溶剂沉淀浓缩；3.用葡聚糖凝胶浓缩；4.用聚乙二醇浓缩；5.超滤浓缩；6.真空减压浓缩与薄膜浓缩。氨基酸类药物的制造方法：1水解法；2发酵法；3酶转化法；4化学合成法。脂类药物的制备方法：直接提取法、水解法、化学合成或半合成法、生物转化法。氨基酸的制造方法：水解法、酶转化法、发酵法、化学合成法。胰岛素的等电点为5.305.35多肽与蛋白类药物的制造方法：提取分离纯化法、化学合成法、基因工程法。细胞破碎的方法：1.机械法；2.物理法；3.化学法；4.生物法物理法包括干燥法、反复冻融法、渗透压冲击法。盐析的方法：1分级盐析法；2重复盐析法；3反抽提法偶极离子排斥作用的概念
6、及如何消除许多生化物质都是两性物质，当他们离子静电荷为零时，正点中心和负电中心并不重叠，形成偶极。被吸附氨基酸的羧基所带的负电荷与树脂磺酸基的负电荷产生排斥力，这就是所谓的偶极离子排斥作用。 这种偶极离子排斥力随氨基酸R基碳链的加长而减弱；适当增加溶液中离子强度的时候，可使这种排斥力减弱。浓差极化现象的概念及如何消除超滤过程中，外源压力迫使分子量较小的溶质通过薄膜，而大分子被截留于膜表面，并逐渐形成浓度梯度，这种现象称之。 克服极化的主要措施有振动、搅拌、错流、切流等技术，但应注意过于激烈的措施易使蛋白质等生物大分子变性失活。黏多糖的概念及结构特点Meyer提出把动物来源的含有氨基己糖的多糖统
7、称为黏多糖，研究发现，黏多糖分子中除氨基己糖外含有糖醛基和硫酸化的糖残基，因此也称酸性黏多糖。结构特点：由重复双糖单位构成，此单位中，包含一个N-乙酰氨基己糖。黏多糖的组成结构单位中有两种糖醛酸：D-葡萄糖醛酸和L-艾杜糖醛酸；两种氨基己糖：氨基-D-葡萄糖和氨基-D-半乳糖。另外，还有其他单糖作为附加成分，包括半乳糖、甘露糖、岩藻糖和木糖等。DNA重组药物制造的操作过程：1获得目的基因；2将目的基因和载体连接，构建DNA重组体；3将DNA重组体转入宿主菌构建工程菌；4工程菌的发酵；5外源基因表达产物的分离纯化；6产品的检验和制剂制备等。生物药物的药理学特性：1.药理活性高；2.治疗针对性强，
8、治疗的生理、生化机制合理，疗效可靠；3.毒副作用少，营养价值高；4.生理副作用常有发生。生物药物的理化性质：1.生物材料中的有效物质含量低，杂质种类多且含量相对较高；2.生物活性物质组成结构复杂、稳定性差；3.生物材料易染菌，腐败；4.生物药物制剂的特殊要求。分离纯化的主要原理：1.根据分子形状和大小不同进行分离；2.根据分子电离性质的差异进行分离；3.根据分子极性大小及溶解度不同进行分离；4.根据物质吸附性的不同进行分离；5.根据配体特异性进行分离亲和层析法。影响沉淀的温度因素：1整个过程需要高度冷却，一般先将蛋白自溶液冷却到0；2把有机溶剂预冷到更低温度（一般为-10一下）；3在充分搅拌下
9、加入冷的有机溶剂 大孔网状聚合物吸附剂的制法：在合成时，加入一种惰性组分，它不参与聚合反应，但能和单体互溶，称为致孔剂，待网络骨架固化和链结构单元形成后，用溶剂萃取或水洗蒸馏的方法去掉致孔剂，就留下了不受外界条件影响的永久孔隙。大孔网状聚合物的洗脱条件：1，最常用的是以低级醇、酮或其水溶液解吸；2，对弱酸性物质可用碱来解吸；3，对弱碱性物质可用酸来解吸；4，如吸附在高浓度盐类溶液中进行时，一般仅用水洗就能解吸下来。亲和层析的原理与技术要点：亲和层析是利用生物体中多数大分子物质具有与某些相应的分子专一性可逆结合的特性而建立的分离纯化技术。技术特点：1寻找可与底物（S）专一性可逆结合的配基（L）；
10、2将L通过共价键偶联到基质，并要求偶联后L与S的亲和力不变；3L与S吸附并与杂质分离，将杂质洗出；4洗脱目标物，即分离纯化。影响吸附剂亲和力的因素：1配基浓度对亲和力的影响；2空间障碍的影响；3配基与载体的结合位点的影响；4载体孔径；5微环境凝胶层析的特点：1凝胶层析操作简单，所需设备简单；2分离效果较好，重复性高；3分离条件缓和；4应用广泛；5分辨率不高，分离操作较慢。离子交换树脂的构成：1惰性的不溶性的高分子固定骨架，又称载体；2与载体以共价键联结的不能移动的活性基团，又称功能基团；3与功能基团以离子键联结的可移动的活性离子，又称平衡离子。大型离子交换树脂的特征：1载体骨架交联度高，有较好
11、的化学和物理稳定性及机械强度；2孔径大，不受环境条件影响；3表面积大，表面吸附能力强，对大分子物质的交换容量大；4孔隙率大，比重小，对小离子的体积交换量比凝胶型树脂小。透析膜的高聚物应具有的特点：1在使用的溶剂介质中能形成具有一定孔径的分子筛样薄膜；2在化学上呈惰性；3有良好的物理性能。超滤膜的构造：膜质分为两层：功能层具有一定孔径的多孔“皮肤层”；另一层是孔隙大得多的海绵层，称支持层。胸腺激素生产工艺路线：胸腺【绞碎】胸腺碎块【捣碎、提取】生理盐水提取液（组分1）【加热去杂蛋白】80，15min上清液（组分2）【沉淀】丙酮 -10丙酮粉（组分3）（pH7.0磷酸盐缓冲液、硫酸铵）饱和度0.2
12、5上清液（组分4）硫酸铵，饱和度0.50 pH4.0盐析物【超滤】10mmol/LTris-HCl缓冲液pH8.0超滤液【脱盐、干燥】Sephadex-G25胸腺素（组分5）发酵法生产肌苷酸（IMP）技术要点：第一步是用诱变育种的方法筛选缺乏SAMP合成酶的腺嘌呤缺陷型菌株；第二步是选育Mn不敏感性变异株。生化材料的选择原则：1.有效成分含量高，原料新鲜、无污染；2.来源丰富、易得；3.原料产地较近，价格低廉；4.原料中杂质含量少，便于分离纯化。干燥的目的：1.提高药物或药剂的稳定性，以利保存与运输；2.使药物或制剂有一定的规格标准；3.便于进一步处理。亲和层析的洗脱：1非专一性洗脱；2特殊洗
13、脱；3专一性洗脱双水相萃取法的要点是可以直接从细胞破碎的匀浆中萃取蛋白质，无需分离细胞碎片。对大多数不耐热生物活性物质不宜采用煎煮法，一般在010C。提取用的溶剂系统原则上应避免过酸或过碱，pH一般应控制在49范围内。为了增加目的物的溶解度，往往要避免在目的物的等电点附近进行提取。生物分离技术包括：生化分离分析和生活制备。亲和层析法具有从复杂生物组成中专一“钓出”特异生化成分的特点。分离纯化早期，不宜选择分辨能力较高的纯化方法。早期分离纯化用萃取、沉淀、吸附等一些分辨力低的方法较为有利。早期分离方法的选择原子是从低分辨能力，而且负荷量较大者为合适。均一性是指所获得的制备物只具有一种完全相同的成
14、分。机械法的原理是基于液相或固相剪切力来破碎细胞。渗透压冲击法对革兰阳性菌不适用。利用组织中自身酶的作用改变、破坏细胞结构，释放出目的物称为组织自溶。晶体质量判断：晶体大小、形状、纯度影响吸附的因素：1，吸附剂的特性；2，吸附物的性质；3，吸附条件；4，吸附物溶度和吸附剂用量。亲和层析的洗脱：1非专一性洗脱 改变pH以影响电性基团的解离程度而洗脱。或改变极性2特殊洗脱3专一性洗脱：竞争性效应、非竞争性效应、反竞争性效应超离心设备中转子有：角度、水平、区带、垂直管、连续离心、细胞洗脱离心方法：1差分离心法；2速度区带离心法；3等密度区带离心法微孔滤膜的孔径检测方法：1气泡压力法；2水流量法；3细菌过滤法微孔滤膜的性质包括：1孔径；2孔隙率及水萃取率；3厚度和重量；4阻力和流速；5其他理化性质
