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1、目录第一部分标本处理与细菌学检验1 血液、骨髓标本的细菌检验42 尿液标本细菌检验 73 粪便标本的细菌检验 104 痰及上呼吸道标本的细菌检验145 脑脊髓液标本的细菌检验 196 胆汁标本的细菌检验237 穿刺液标本的细菌检验168 生殖系统标本的细菌检验299 脓液标本的细菌检验3210 K-B纸片琼脂扩散法 3711临床微生物实验室常规药敏试验的抗菌药物分组 4012药敏试剂的质控标准操作程序 4213细菌常用试剂及培养基的配制 4414肥达氏反应49第二部分仪器1 离心机的维护与保养512 显微镜的维护与保养533生物安全柜使用操作程序及注意事项 54第一部分标本处理与细菌学检验1血
2、液、骨髓标本的细菌检验标准操作程序（SOP）【目的】：确保血液、骨髓标本细菌检验结果的准确性。【适用范围】：临床微生物检验【支持性文件】：全国临床检验操作规程【操作步骤】：-、增菌培养基：培养基：使用自制血培养增菌培养瓶二、标本的采集：1、采血时机：在患者发热期间越早越好，以正在发冷发热吋或发冷 发热前半小时为宜;抗生素治疗前;或在下一次抗生素治疗前立即采集 标本。2. 采血量:成人一般为10ml,新生儿与婴幼儿为l2ml,儿童3-5ml。三、标本的处理、鉴定与报告：1、按无菌程序釆集血液接种相应培养瓶内立即送往细菌室。2、收到已接种标本的血培养瓶后，将血培养瓶放入孵育箱相应的位 置进行孵育。
3、3每天观察培养瓶生长情况，有浑浊出现应接种平板4取出血培养阳性瓶，无菌抽取培养液转种血琼脂平板和巧克力平板 置系统外35C孵育。并作涂片、革兰染色镜检和药敏试验。将镜检 结果报告临床医生，作为第一级报告。7、小时将将初步的药敏结果报告临床医生，作为第二级报告。8、当转种的血琼脂平板或巧克力平板上出现单个菌落时，立即取单 个菌落进一步作鉴定和药敏试验。将最终确定的结果报告临床医生， 作为第三级报告。如果血琼脂平板或巧克力平板上出现两种细菌时， 应分别进行鉴定和药敏实验。儒氧、汇外革兰染色镜一检平需氧无生长初步印象一天氧培养XX菌生长輕培养厌氧：35C48-72h平厌氧生长生化鉴定 药敏试验一厌氧
4、生长需氧平板丿需氧生长厌氧平板按兼性厌氧菌鉴定报告1、在预置5天培养吋间内无细菌生长的培养瓶，应作盲目传种1次, 无细菌生长方可报告阴性。【参考文献】：中华人民共和国全国医政司编.全国临床检验操作规程（第二版）南京：东南大学出版 社 1997.454刘运德编：微生物检验（第二版）北京：人民卫生出版社2002.122编写审核人批准人起效日期吴茂彬2005.92尿液标本的细菌检验标准操作程序(SOP)【目的】：确保尿液标木细菌检验结果的准确性。【适用范围】：临床微生物检验【支持性文件】：全国临床检验操作规程【操作步骤】：标本的采集要求：由护士或医生指导患者留取标本1. 清洁中段尿：女性患者以肥皂水
5、或I： 1000高猛酸钾溶液冲洗外 阴及尿道口；男性患者应翻转包皮冲洗，用肥皂水冲洗尿道口，然后 排尿弃去前段尿，留取中段尿10ml左右于无菌容器内，立即加盖送 检。2肾盂尿：有外科医生采集3. 膀胱穿刺尿：有外科医生采集4. 应在用药前米集标本。5. 通常取晨起第一次尿液6. 应用灭菌的容器盛标本。7. 尿中不能含有防腐剂或消毒剂8. 标本采集后lh内送检。各种培养目的操作步骤1. 一般细菌培养：采用定量培养法各取1环尿液分别接种血琼脂平 板，置35C孵箱培养18-24小时观察结果，如果有细菌生长，取菌 落涂片革兰染色，根据菌落特征和菌体形态、染色性质，根据全国检 验操作规程进行鉴定和药敏试
6、验。2. 厌氧菌培养：取膀胱穿刺尿离心，用尿沉渣直接接种血平板和厌氧 血平板分别作需氧和厌氧培养2-4天观察结果，如果需氧培养无细菌 生长，厌氧培养有菌生长，可进一步按厌氧菌鉴定方法进行鉴定。3. 淋病奈瑟菌培养：接到标本后立即离心，取沉淀物接种已预温35C 的GC巧克力琼脂平板上，置35C5-10%C02环境中培养24小时，若无 细菌生长则培养至48小吋，若有可疑菌落，按淋病奈瑟菌进行鉴定。4. 假丝酵母菌培养：采用定量培养法取尿液接种沙保罗琼脂平板、， 置35C孵箱培养(深部致病真菌一般都适于35C培养)每天观察结 果1次，如果有菌生长，取菌落涂片革兰染色，按真菌鉴定方法进行 鉴定。5丄菌
7、培养：先将标本通过045uin滤膜滤菌处理后，取滤液1. 5-2ml 接种于高渗增菌液内，35C孵箱培养，逐日观察有无细菌生长，有菌 生长时，用棉拭子沾取菌液点种于L平板上，然后以接种环做放射状 划线，35C孵箱培养1-7天，逐口观察菌落生长情况。【结果报告】：1 培养48小吋无细菌生长，报告“无细菌生长二2. 细菌数104CFU/ml报告菌名，与临床医生联系后决定是否做药敏 试验。3查见有意义的细菌，完成鉴定并报告菌名及其菌落计数(cfu/ml) 及药敏结果。【临床意义】：1诊断泌尿系统感染的细菌学标准：革兰阳性菌、真菌菌落计数21万cfu/ml,革兰阴性菌菌落计数210万cfu/ml2.
8、膀胱穿刺尿任何数目，所有的细菌均有意义需做鉴定和药敏试验。3、同一患者两次以上培养出同一种细菌，尽管菌数不多，也应考虑 为病原菌，应与临丿木医生联系。【质量控制】：1 培养基：一周内新鲜配制的，无菌试验阴性，性能实验合格，外观 无裂痕。2用美兰指示剂检查厌氧状态，无色为合格。【参考文献】：中华人民共和国全国医政司编.全国临床检验操作规程（第二版）南京：东南大学出版社1997.454张秀珍主编，当代细菌检验与临床，北京：人民卫生出版社1999： 111-117编写审核人批准人起效日期吴茂彬2005.93粪便标本的细菌检验标准操作程序（SOP）【目的】：确保粪便标本细菌检验结果的准确性。【适用范围
9、】：临床微生物检验【支持性文件】：全国临床检验操作规程【操作步骤】：标本的采集：1、自然排便法自然排便后，挑取有脓血，粘液部位的粪便23g, 液状粪便取絮状物盛于无菌的容器内或置于保存液或增菌液中送检。2、直肠拭子法:一般用于排便困难的患者及儿童。3、粪便标木采集后应立即送检，不能立即送检的应放入Cary-Blair运送培养基或磷酸盐甘油保护液中送检或保存。二、检验程序：粪便及肛拭子标本普通致病菌培养特殊细菌培养HE、SS选择适当培养基挑选可疑菌落挑选可疑菌落KIA分离鉴定生化反应、血清学试验、药敏试验最终报告最终报告1、标本的接种：普通致病菌培养接种HE和SS置35C培养。若怀 疑弧菌感染，
10、则加种一个弧菌分离培养基，同时接种于碱性蛋白豚水 中增菌。若怀疑真菌感染，则加种一个沙氏琼脂。2、主要致病菌鉴定志贺菌：菌落特点:在HE琼脂上呈兰绿色半透明中等或较小的边缘整齐的菌 落。但宋内志贺菌边缘不整齐，因迟缓发酵乳糖，在HE48h后许 多菌落呈黄绿色。生化鉴定要点：氧化酶阴性，24小吋不分解乳糖的革兰阴性杆菌，发 酵葡萄糖产酸不产气、无动力、不产H2S,尿素酶阴性。血清学试验：取菌落先直接与志贺菌四种多价血清作玻片凝集，出现 凝集再分别用4种因子血清作凝集试验.菌种的最后确定：生化方应结果符合志贺菌，与相应特界诊断血清凝 集。沙门菌：菌落特点：在HE琼脂上呈中心黑色边缘绿色，SS琼脂上
11、呈无色透 明或半透明中心黑色边缘整齐的菌落。有的菌落不产黑色。生化鉴定要点：氧化酶阴性不分解乳糖的革兰阴性杆菌。发酵葡萄糖 产酸产气、有动力、产H2S,尿素酶阴性。血清学试验：先用AF多价血清凝集，再用0因子血清确定所属群, 最后用H因子血清确定血清型。（必要吋还要用Vi血清检查）。菌种的最后确定：生化反应结果符合沙门菌并与相应特异诊断血清凝 集可报告检drxx沙门菌二（3）致泻性大肠埃希菌菌落特点：HE呈分解乳糖的黄色菌落。（EIEC多呈不分解乳糖的 菌落）。鉴定要点：生化符合大肠埃希菌的特征EIEC特征：赖氨酸阴性,无动力，与相应的EIEC诊断血清凝集。EHEC特征：24小时内不发酵山梨醇
12、，与EHEC诊断血清凝集EPEC:（婴幼儿腹泻病原菌）与相应的EPEC血清凝集菌种的最后确定：符合大肠埃希菌生化反应；与相应特异诊断血清凝 集。霍乱弧菌 直接分离培养：取粪便直接接种强选择性培养基4号平板，35C孵育6h取4号培养基上的菌胎，进行霍乱弧菌血清凝集试验，如出现凝 集即发出初步报告。有单个菌落时即进行生化试验证实。沁曾菌培养：在直接分离培养的同时，将粪便接种碱性腺水进行增菌, 于35C培养6-8h时，取表面菌膜分离4号蛋白陈水以提高检出率。鉴定要点：革兰阴性弧菌或杆菌，湿片上运动活泼呈穿梭状运动。制 动试验阳性。氧化酶阳性发酵菌，6%NaCL生长,甘露醇阳性，无盐 月东水生长，蔗糖
13、阳性。菌种的最后确定:符合霍乱弧菌的生化反应，与01群或0139霍乱弧 菌诊断血清凝集。【结果报告】：报告方式应以分离目的菌种的结果而决定。查出肠道 致病菌，报告菌名和药敏结果。常规仅选用HE （S.S）和麦康凯（中 国兰或伊红美兰）时，观察48小时若只有止常菌而无致病菌存在时, 报“未检出沙门菌及志贺菌【质量控制】：1、培养基：一周内新鲜配制的，无菌试验阴性，性能实验合格，外 观无裂痕。2、因子血清：在有效期内，外观清无浑浊。生理盐水对照试验阴性。【参考文献】：中华人民共和国全国医政司编.全国临床检验操作规程（第二版）南京：东南人学出版 社 1997.454张秀珍主编，当代细菌检验与临床，北
14、京：人民卫生出版社1999： 96-104注意事项1、虽然粪便含有多种杂菌，但应尽量采用无菌容器。2、为提高检出率，要采集新鲜粪便作培养。腹泻病人应尽量在急性期釆集（3天），以提高阳性率。标本最好在用药前米集C编写审核人批准人起效日期吴茂彬2005.94痰及下呼吸道标本的细菌检验标准操作程序(SOP)【目的】：确保痰及下呼吸道标本细菌检验结果的准确性。【适用范围】：临床微生物检验【支持性文件】：全国临床检验操作规程【操作步骤】：一、标本采集1、标本采集时间痰以晨痰为好。多数病人晨痰较多，即使对痰量少的患者，也以清 晨采集最为容易。对支气管扩张症或与支气管相通的空洞患者， 清晨起床后进体位引流，
15、可釆集大量痰液。最好在应用抗菌药物之前采集标本。2、采集方法(1) 自然咳痰法：患者清晨起床后，用清水反复漱口后用力自气管咳 出第一口痰于灭菌容器内，立即送检验。对于痰量少或无痰的 患者可采用雾化吸入加温至45C的10%NaCl水溶液,使痰液 易于排出。对咳痰量少的幼儿，可轻轻压迫胸骨上部的气管， 使其咳嗽，将痰收集于灭菌容器中送检。(2) 支气管镜采集法：由医生用支气管镜在肺内病灶附近用导管吸引或用支气管刷直接取得标本。(3) 小儿取痰法：由医生用弯压舌板向后压舌，用棉拭子伸入咽部，小儿经压舌刺激咳嗽时，可喷出肺部或气管分泌物粘在拭子上, 送检。二、标本的处理：痰的洗净：由于痰含有正常菌群，影响病原菌检出，采取以下方 法减少正常菌群。将痰加入1020mi无菌生理盐水
