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1、长沙医学院毕业设计(论文)课 题 名 称 血细胞染色方法的探讨 学 生 姓 名 张济真 学 号 院(系)、年级专业 医学检验系13级检验一班 指 导 教 师 黄秋炬 位松华 职 称 助教 主任技师 2017年 04 月 30 日 目录中文摘要I英文摘要II前言11材料与方法21.1 实验材料2 主要仪器2 试剂及药品2主要试剂的配制22 实验方法32.1 血涂片的制作32.2 Giemsa 染色32.3 Wright 染色42.4 Giemsa-Wright 染色42.5 注意事项43 结 果53.1 Giemsa 染色5 Wright 染色53.3 Giemsa-Wright 染色54探究不
2、同条件下三种染色方法的效果54.1 不同染色条件下Giemsa的染色效果64.2 不同条件下 Wright染液的染色效果64.3 不同条件下Giemsa-Wright混合染液染色效果65讨 论75.1 Giemsa 氏染色法75.2 Wright 氏染色法75.3 Wright-Giemsa 混合法8结论11参考文献13致谢15I 摘要目的：本论文用不同的染色方法对血涂片进行染色，观察血细胞的形态，比较对血细胞的不同辨别结果。方法：我们分布通过Giemsa染色法、Wright染色法和 Giemsa-Wright混合液染色3种染色方法对血涂片进行染色并对血细胞的形态学进行观察。结果：在染色时间上
3、Giemsa 染液染色时间最长、Wright 染液染色时间最短、Giemsa-Wright 混合液染色时间介于两者之间，Giemsa 染液的细胞核染色效果明显，细胞质界限清晰，但细胞质中的颗粒染色效果较差；Wright 染液染对细胞核和细胞质中的颗粒染色效果较好，细胞质的界限不清楚；Giemsa-Wright 混合染色结果结合了前两种方法的优点，细胞核和细胞质中的颗粒染色效果明显并且细胞界限清晰。结论：Giemsa染色法、Wright染色法和 Giemsa-Wright 混合染色三种染色方法均能有效的协助甄别血细胞，Giemsa-Wright 混合染色方法相较于前两种方法染色效果更为明显，值得
4、广泛应用。关键词：血细胞；血涂片；Giemsa染色法；Wright染色法；Giemsa-Wright 混合染色法；细胞形态学I ABSTRACTObjective: In this paper, different staining methods were used to stain the blood smears, observe the morphology of blood cells, and compare the different results of blood cells. Methods: The blood smears were stained by Giemsa
5、staining, Wright staining and Giemsa-Wright staining. The morphological changes were observed. Results:The Giemsa-Wright mixture had the shortest staining time, the Giemsa-Wright mixture had the shortest dyeing time, the Giemsa-Wright mixture had the same staining time, and the cytoplasmic boundarie
6、s were clear, but the cytoplasm was clear The staining effect of Wright dye on the nucleus and cytoplasm was better, and the cytoplasmic boundaries were not clear. Giemsa-Wright mixed staining had better staining effect on the nuclei and cytoplasm, and the cell boundaries were clear . Conclusion: Gi
7、emsa staining method, Wright staining method and Giemsa-Wright hybrid staining method can effectively help to identify blood cells. Giemsa-Wright mixed staining method is more obvious than the first two methods, and it is worthy to be widely used.Key Words: blood cells; blood smear; Giemsa staining;
8、 Wright staining; Giemsa-Wright mixed staining; cell morphology前言血细胞存在于血液中,随着血液的流动遍及全身。以哺乳动物为例，扮演了主要的免疫角色的是血细胞中的白细胞【1】。在病菌入侵到人体内时白细胞能迅速的穿过毛细血管壁，聚集到病菌入侵部位，将病菌包围并吞噬。要从根本上解决疾病对动物的危害，我们需要对不同种类生物的免疫机制进行深入研究，因此在生物免疫的科研探究中，血细胞的研究起着非常重要的作用，但目前对很多类生物的血细胞的分类及其功能研究仍然不是很充分，不同研究者之间尚未达成共识，这对地球上生物免疫学的研究造成了很大的障碍【2-
9、4】。几个世界以来，国内外的研究人员运用了不同的方法进行研究，分别应用组织化学、光镜、电镜、物理染色、免疫学单克隆抗体等技术，对血细胞形态、结构进行观察分类，观察细胞内各种组分的分子组成及功能。血细胞染色法操作简单有效，在动物的生理和病理研究中意义非凡,特别是在鉴定血液及细胞免疫相关的疾病的时候意义重大，最基本的诊断手段至今仍是血细胞染色观察。 因此在细胞的形态观察和分类时，血细胞涂片染色效果是否明显突出在细胞的形态观察和分类中占有决定性的意义【5-7】。目前为止，在解决人类和其他生物的疾病方面，我们主要通过对血细胞染色方法进行研究，从而进一步分析免疫反应在血细胞中的体现。 本文主要探讨了三种
10、血细胞染色方法，用显微镜观察三种方法下血细胞各自的不同染色效果，进而了解它们对细胞分类影响。01材料与方法1.1实验材料 血液，载玻片1.2 主要仪器培养皿 保温箱分析检测的仪器灭菌箱台式离心机 血细胞计数板显微镜1.3 试剂及药品姬姆氏色素(BS) 钟楼区北港海拓实验仪器经营部瑞氏色素(BS)磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、甲醛 乙醇、二甲苯、盐酸、氢氧化钠 1.4主要试剂的配制（1） Giemsa染液的配制 用药匙取姬姆氏色素(BS) 放入干燥的研钵中，然后在研钵内滴入入少量的甘油，开始研磨到混合物里无颗粒状时停止，然后把剩余的甘油全部倒入研钵，混合均匀后放温箱内，将温度调至56保温2小时，保温结
11、束拿出混合物并把33ml的甲醇全部倒入搅拌均匀，最后把配制好的染液放入棕色瓶内密封保存，棕色瓶最好在04的环境内保存【8-11】。（2） Wright 染液的配制 用药匙盛出瑞特色素(BS) 放入已清洁干净并保持干燥的研钵中，甲醇滴入少量，开始进行充分研磨直到染料完全溶解，溶解的染料直接倒入棕色试剂瓶中，未溶解的继续加入少量甲醇进行研磨，最后染料完全溶解，60ml的甲醇全部也完全溶解其中。染液配好全部装入棕色瓶，室温保存，一周方可拿出使用。新配制的染液染色效果较差，我们应当适当的延长放置时间，时间越久染色效果也更加明显。因为甲醇会挥发或者氧化成甲酸，如果需要长时间放置需要进行密封。另外将中性甘
12、油23ml加入到染液中，既可以阻止甲醛挥发还可以增强细胞着色效果。（3） Giemsa-Wright染液的配制 Giemsa-Wright染液的配制和前两种染液的配制一样，用药匙取出姬姆氏色素(BS)、瑞氏色素(BS)各1g直接放到已经清洗干净保持干燥的研钵中，慢慢地把10ml甘油倒入研钵内，开始进行研磨，当染料完全溶解时把500ml甲醛倒入混合均匀，最后要把配制好的染液密封保存棕色瓶内。（4） Sorensen缓冲液的配制 用药匙称取磷酸二氢钾（无水）1 g，磷酸氢二钠（无水）1 g；加入1000 ml蒸馏水使其溶解。配好后磷酸盐缓冲溶液应校正PH值，其范围在即可，后塞紧瓶口备用。2 实验方
13、法2.1 血涂片的制作 首先我们需要用脱脂棉蘸取75%的酒精涂抹在将要取血的部位（如指尖），进行消毒；接着用已消毒的针尖刺破指尖的皮肤；挤出一滴血,滴在已消毒的载玻片上；取另外一片消毒过的载玻片，推动玻片自血滴左侧向右移动，保持两片成3045度夹角；当两片之间出现均匀的血滴之后,推片继续向左慢慢地推移，直到推出均匀的血膜【12】。2.2 Giemsa 染色 染色方法: 我们在血涂片干燥之后开始染色，血涂片在湿润的环境中进行，首先将其放入湿盒，滴入46滴 Giemsa 染色液完全覆盖血膜，保持染色35分钟后滴入812滴的Sorensen缓冲液，染色 25 分钟，用自来水冲洗晾干，密封存储。 Wr
14、ight 染色 染色方法: 待血涂片干燥之后将其放入湿盒，滴入适量 Wright 染色液至将涂片完全被覆盖，保持2 分钟后加入等量的Sorensen缓冲液，染色3分钟，用自来水冲洗晾干，密封存储。2.4 Giemsa-Wright 染色 染色方法: 待血涂片干燥之后将其放入湿盒，滴加 Giemsa-Wright染色液 4 5 滴，染色 3 分钟，然后加Sorensen缓冲液 2 3 倍混合均匀，静止15分钟后用自来水冲洗晾干，密封存储。2.5 注意事项（1）PH对细胞染色有影响。血细胞中的蛋白性质主要是两性电解质，因此血细胞蛋白所带电荷与PH值大小息息相关。因此我们在实验中药使用清洁中性的载玻片，缓冲液PH值6.47.0之间，另外需要用流水冲洗玻片，我们直接使用自来水实验【13】。（2） 新作好的血膜未干透染色时容易出现血膜脱落，因此等干燥之后再进行染色。（3）
