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1、口腔上皮细胞巴氏小体的观察,一、 实验目的 掌握人体性染色质的检测方法; 观察人体性染色质的形态特征及存在部位;为进一步研究人体染色体的畸变与疾病提 供参考条件; 了解雌性哺乳动物X染色体失活假说和剂量补偿效应的机制,二、 实验原理,1949年M.L.Barr等研究发现了雌猫神经细胞核膜内具有凝缩的深染小体(巴氏小体),而雄性个体细胞中则没有.进一步研究发现:所有哺乳类雌体细胞中都可以见到这一结构。,巴氏小体是雌性哺乳动物体细胞 中失活的X染色体,在间期细胞核中呈异固缩状态(染色质高度螺旋化),直径约1m,贴近于核膜边缘的染 色小体。 细胞分裂间期 细胞核中出现异固缩现象:浓缩、 染色深、无活
2、性; 细胞分裂期 可形成正常的染色体形态;复制 时间比有活性的X染色体稍迟一些。,Barr小体的数目=n-1(n为X染色体数目) 正常女人的体细胞间期核中Barr小体为1; 正常男人的体细胞间期核中Barr小体为0; XXX女人的体细胞间期核中Barr小体为2; XXXX女人的体细胞间期核中Barr小体为3。,定义:具有两份或两份以上的基因量的个体与只有一份基 因量的个体的基因表达趋于一致的遗传效应. 举例:雌性哺乳动物一条X染色体异染色质化(失活),只有一条X染色体具有活性,使雌雄动物虽然X染色体数目不同但基因产物的剂量是平衡的。,剂量补偿效应 (dosage compensation ef
3、fect),莱昂假说(Lyon hypothesis),巴氏小体是一条失活的X染色体;哺乳动物雌性个体两 条X染色体的其中一条在受精后失活; 两条X染色体中哪一条失活是随机的;在同一哺乳动物的体细胞中,有些父源X染色体失活,有些为母源失活。 失活在胚胎早期发生(人类在胚胎发育16天时),失活的X染色体在以后分裂中不会复活;当生殖细胞形成时,失活的染色体可恢复。 杂合体雌性在伴性基因的作用上是嵌合体。,X-染色质的形态表现为一结构 致密的浓染小体;轮廓清楚;大小 11.5m;常附着于核膜边缘或 靠近内侧;形状为凸形、三角形、 卵形、短棒及双球形等。 正常女性口腔黏膜细胞中出现 率:30 50%。
4、,三、 实验材料,1、器材: 显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、牙签等 2、试剂: 改良苯酚品红、60%醋酸(盐酸) 3、实验材料: 女生口腔黏膜细胞(男生为对照),四、实验步骤,(1)取干净载玻片,用记号笔在将涂细胞的一面右上角做好标记; (2)嗽口(三次),尽可能除去口中杂物; (3)用牙签刮取颊部粘膜上皮细胞,弃第一次刮取物,在同一部位继续刮取; (4)将刮得的细胞涂在干净载玻片上,反复几次,使玻片上的材料尽可能多些; (5)空气中干燥; (6)涂片区滴上100l的60%冰醋酸(盐酸)固定5分钟; (7)吸去冰醋酸,滴20l改良苯酚品红染色2分钟; (8)压片; (9)将玻片置于显微镜下观察
5、。,五 观察 在女性间期细胞核内侧靠近核膜处有约1微米大小的反光极强的颗粒状亮点,即为巴氏小体。材料不同,观察结果可能有不同,且必须和核仁区别开来(核仁往往离核膜较远或接近核中央部位)。,箭头所示为巴氏小体 (女性细胞左中存在,男性细胞右中没有),注意事项 1刮口腔上皮前要漱口; 2刮时用灭菌牙签的宽边,勿用一角,以免划破口腔; 3第一次刮下的脱落细胞用酒精棉球擦去,在原位重复刮一下制片; 4盛放酒精棉球的小广口瓶,瓶盖用完即时盖好; 5涂片略干再加改良苯酚品红; 6染色时间不要太长,否则核质着色深,X染色质体不易区分; 7可数细胞的标准:核质染色呈网状或颗粒状;核膜清晰,无缺损;染色适度,周围无杂质。,五、作业 1分别观察男女各50个可数细胞,计算显示X染色质所占百分比。 2观察中选绘4-5个典型细胞,示明X染色质体的形成和部位。,六、思考题 1、巴氏小体是怎么形成的?女性的卵母细胞含有巴氏小体么? 2、你认为是什么原因造成了“剂量补偿效应”?,