稻谷、玉米脂肪酸值测定操作练习实验项目稻谷、玉米脂肪酸值测定时 长: 4h目的规定1. 熟悉和掌握脂肪酸值检查流程；2. 掌握微量滴定管的使用和滴定终点的判断练习重点1. 调节配制0.01mol/L氢氧化钾-乙醇原则滴定溶液所需95%乙醇至中性；2. 0.01mol/L氢氧化钾-乙醇原则滴定溶液的配制；3. 样品制备：去杂、粉碎、称量、提取、过滤；4. 脂肪酸值滴定速度控制；5. 滴定终点的判断；6. 脂肪酸值检测成果的的报出练习难点1. 滴定速度控制； 2. 滴定终点的判断 预习要点1. 脂肪酸值测定原理2. 脂肪酸值测定措施中对锤式旋风磨的规定有哪些？3. 脂肪酸值测定用样品粉碎粒度规定？4. 如何配制脂肪酸值测定所用0.01mol/L氢氧化钾-乙醇溶液？5. 如何将稀释氢氧化钾原则溶液用的95%乙醇溶液调节至中性？6. 影响脂肪酸值测定因素有哪些？7. 脂肪酸值滴定应在什么条件下进行？8. 脂肪酸值滴定速度应如何控制？9. 如何判断脂肪酸值滴定终点？10. 应如何报出脂肪酸值检测成果？实验原理在一定温度（15℃～25℃）条件下，以无水乙醇提取谷物及制品中的游离脂肪酸，用氢氧化钾原则溶液滴定，游离脂肪酸与氢氧化钾发生中和反映，以中和100 g试样中游离脂肪酸所需氢氧化钾的毫克数表达。
谷物脂肪酸值测定的实质是酸碱滴定但由于谷物成分比较复杂，溶于乙醇的组分比较多，用乙醇提取游离脂肪酸的同步，尚有其她醇溶性物质，如：醇溶蛋白、色素、植酸等也被提取出来，并且提取的游离脂肪酸不是单一的脂肪酸，因此，提取液组分非常复杂，酸碱滴定也就与一般的强碱滴定单一的弱酸有所不同，是强碱滴定混合弱酸试 剂与仪器无水乙醇：A.R；1%酚酞-乙醇溶液：1.0g酚酞溶于100 mL 95％（V/V）乙醇；不含二氧化碳的蒸馏水：将蒸馏水煮沸10min，加盖冷却；0.5mol/L氢氧化钾原则储藏液；0.01mol/L氢氧化钾-乙醇原则滴定溶液 锤式旋风磨：具有风门可调和自清理功能，不易发热，粉碎后的样品一次通过CQ16（40目）筛的达95%以上；来回式振荡器，振荡频率为100次/min ；微量滴定管：5mL，最小刻度为0.02mL；10mL，最小刻度为0.02mL；移液管：50mL，25mL；天平：感量为0.01g； 具塞锥形瓶：250mL；锥形瓶：150mL实验环节1．0.01mol/L KOH-乙醇原则滴定溶液的配制精确移取20mL已经标定好的0.5mol/L氢氧化钾原则储藏液，用事先调节至中性的95％（V/V）乙醇稀释定容至1000mL，盛放于聚乙烯塑料瓶中。
临用前稀释V浓=c稀×V稀/c浓）注：需要组织单位提供事先配制并已经标定的0.5mol/L氢氧化钾原则储藏液2．试样制备稻谷试样的制备：从混合均匀的平均样品中分取100 g左右，清除杂质（保存谷外糙米），得到净稻谷样品用锤式旋风磨粉碎，粉碎后的样品一次通过CQ16（相称于40目）筛的应达到95%以上粉碎样品（筛上、筛下的所有筛分范畴样品）经充足混合后装入磨口瓶中备用 玉米试样的制备：从混合均匀的平均样品中分取100 g左右，清除杂质，得到净玉米样品用锤式旋风磨粉碎，粉碎后的样品一次通过CQ16（相称于40目）筛的应达到95%以上收集筛上、筛下的所有筛分范畴的粉碎样品样品，经充足混合后装入磨口瓶中备用3. 试样解决称取制备好的试样约10 g，精确到0.01 g，于250 mL具塞磨口锥形瓶中，并用大肚移液管（或同等精度加液器）加入50.0 mL无水乙醇，置于来回式振荡器上振荡提取30 min，（振荡频率为100次/min）静置1 min ~2 min，在玻璃漏斗中放入折叠滤纸过滤弃去最初几滴滤液，收集滤液25 mL以上 注：样品粉碎后应在2h内进行提取4. 测定用大肚移液管移取25.0 mL滤液于150 mL锥形瓶中，加50 mL不含二氧化碳的蒸馏水，滴加3~4滴酚酞批示剂后，用氢氧化钾原则滴定溶液滴定至呈微红色，30 s不消褪为止。
记下耗用的氢氧化钾原则滴定溶的体积（V1）注1：滴定速度宜先快后慢，不能太慢或太快，一般控制在（6~8）mL/min，即每秒（2~3） 滴，滴定液成串不成线临近滴定终点时，要合适放慢滴定速度，注意观测样液的颜色变化注2：有的样品由于受提取液自身颜色的影响，达到滴定终点时样液不可见微红色，当样液颜色与参照样液有明显色差时，即为滴定终点5. 空白实验用移液管移取25.0 mL无水乙醇于150 mL锥形瓶中，加50 mL不含二氧化碳的蒸馏水，滴加3~5滴酚酞批示剂，用氢氧化钾原则滴定溶液滴定至呈微红色，30 s不消褪为止记下耗用的氢氧化钾原则滴定溶液体积（V0）6. 成果计算按公式 计算成果7. 报出成果每份试样取两个平行样进行测定，两个测定成果之差的绝对值符合反复性规定期，以其平均值为测定成果；不符合反复性规定期，应再取两个平行样进行测定若4个成果的极差不不小于n=4的反复性临界极差[CrR95(4)]，则取4个成果的平均值作为最后测试成果；若4个成果的极差不小于n=4的反复性临界极差[CrR95(4)]，则取4个成果的中位数作为最后测试成果，成果保存三位有效数字实验记录1（稻谷）稻谷脂肪酸值测定记录样品名称编号试样质量(g)试样耗标液体积（mL）空白耗标液体积（mL）制备样水分（%）脂肪酸值（mg/100g）双实验差值（mg/100g）四平行极差（mg/100g）脂肪酸值报出成果（mg/100g） 注:制备样水分按13.0%计。
实验记录2（玉米）玉米脂肪酸值测定记录样品名称编号试样质量(g)试样耗标液体积（mL）空白耗标液体积（mL）制备样水分（%）脂肪酸值（mg/100g）双实验差值（mg/100g）四平行极差（mg/100g）脂肪酸值报出成果（mg/100g） 注:制备样水分按14.0%计思考题1. 脂肪酸值测定措施中对锤式旋风磨的规定有哪些？答：规定具有风门可调和自清理功能，不易发热，粉碎后的样品一次通过CQ16（40目）筛的达95%以上2. 测定脂肪酸值所用的粉碎样品是通过CQ16（相称于40目）筛的样品吗？答：测定脂肪酸值所用的粉碎样品不仅仅是通过CQ16（相称于40目）筛的筛下物，而是筛上、筛下的所有筛分范畴样品，也即除了筛下物而外，还应当涉及残留在筛上的样品3. 脂肪酸值测定为什么要做空白实验？答：为了消除试剂的影响，减少系统误差4. 脂肪酸值滴定应在什么条件下进行？答：滴定应在散射日光或日光型日光灯下对着光源方向进行，光线不能太强或太暗，阳光不能直射；环境温度应控制在15℃~25℃之间5. 脂肪酸值滴定速度应如何控制？答：滴定速度宜先快后慢，不能太慢或太快，一般控制在（6~8）mL/min，即每秒（2~3） 滴，滴定液成串不成线。
临近滴定终点时，要合适放慢滴定速度，注意观测样液的颜色变化滴定手法应尽量一致，振摇速度一致，滴定操作要纯熟，整个滴定过程一气呵成6. 如何判断脂肪酸值滴定终点？答：对提取液颜色很浅的样品，可将滴定至微红色浮现视为达到滴定终点；但有些样品由于受提取液自身颜色的影响，达到滴定终点时样液不可见微红色，终点难以鉴定，可用一种已加入提取液和去二氧化碳蒸馏水尚未滴定的锥形瓶作参照，当被滴定样液颜色与参照样液有明显色差时，即可视为已到滴定终点7. 影响脂肪酸值测定成果精确性的因素有哪些？答：脂肪酸值测定是较低浓度的强碱滴定多种混合弱酸的体系，加之提取液中除了酸性物质以外，尚有某些其她的醇溶性物质如色素等也被提取出来，使提取液自身有一定颜色，而颜色及颜色的深浅因粮食种类和品种的不同而有所不同，从而增长了精确测定脂肪酸值的难度因此，影响脂肪酸值测定成果精确性的因素诸多，如：粉碎磨升温、样品粉碎细度、样品粉碎后到提取的间隔时间、计量器具、环境温度、振荡频率、振荡提取时间、批示剂用量、背景干扰、滴定速度、滴定操作的纯熟限度、二氧化碳的影响、终点鉴定（每个人对颜色的敏感限度、每个人对微红色或明显色差的理解不同）、数据读取等等，都会对检测成果产生不同限度的影响，因此，规定在脂肪酸值测定的全过程都要严格、规范操作。