《马铃薯叶及其加工制品中茄尼醇的含量测定 高效液相色谱-质谱法》国家标准编制说明目录1任务来源 32起草的目的意义 32.1 茄尼醇相关产品质量控制的需要 42.2 完善国家标准的需要 43茄尼醇研究、应用与标准现状 43.1茄尼醇研究 43.2茄尼醇检测方法 53.3茄尼醇标准 54主要起草过程 64.1成立标准制定工作组 64.2确定工作计划和标准制定原则 64.3查询国内外相关标准和文献资料 74.4 研究建立标准方法，开展条件实验 74.5方法验证 74.6形成标准讨论稿和编制说明 84.7形成标准草案 84.8形成标准征求意见稿和编制说明 84.9征求意见并形成标准送审稿和编制说明 95 本标准与国内外分析方法的关系 96主要技术指标依据与说明 96.1标准名称 96.2前言 96.3主体内容 106.4“范围”的界定 106.5原理 106.6试剂 106.7仪器和设备 116.8马铃薯叶试样处理 116.9马铃薯叶提取物（提取液）试样处理 126.10检测方法 126.10.1 色谱质谱条件 126.10.2 标准曲线 136.10.3 精密度和稳定性 156.10.4 方法的准确度 166.10.5 方法的检出限和定量限 176.10.6 方法验证 176.10.7小结 177.采用国际标准和国外先进标准程度，以及与国际、国外同类标准水平的对比情况 188与现行法律法规和强制性标准的关系 189标准作为强制性或推荐性标准的意见 1810实施标准的建议 1811参考文献 18II1任务来源本国家标准的制定任务是根据国家标准化管理委员会下达的国家标准制定计划《马铃薯叶及其加工制品中茄尼醇的含量测定 高效液相色谱-质谱法》项目（计划号为20193348-T-424）起草。
本项目为2017年国家重点研发计划NQI项目《主要农业废弃物提取加工与功效评价标准研究》（2017YFF0207800）中一个任务国家标准计划《马铃薯叶及其加工制品中茄尼醇的含量测定 高效液相色谱-质谱法》由中国计量大学上报，中国标准化研究院归口及执行，主管部门为国家市场监督管理总局本标准由中国计量大学、中国标准化研究院、北京信息职业技术学院、云南农业大学、中国热带农业科学院分析测试中心、河北冠卓检测科技股份有限公司共同起草本标准主要起草人：马正、兰韬、席兴军、陈亮、初侨、田洋、阳新凤、张敬轩、于聪聪、李忍2起草的目的意义马铃薯作为全球第四大粮食作物，仅次于小麦、稻谷和玉米[1]近年来，我国马铃薯生产快速发展，已初步形成了北方一作区、中原和南方二作区及西南一二季混作区的种植模式，覆盖我国大部分省区市，常年种植面积稳定在8500万亩左右，总产量保持在9000万吨以上[2]马铃薯叶是马铃薯的地上部分，其产量与马铃薯块茎相当，即年产量也在9000万吨左右马铃薯叶作为一种青绿色的农副产品，具有一定的营养价值，但由于其龙葵素含量高[3]，适口性差，限制了马铃薯叶作为饲料在养殖业中的利用，这不仅造成了资源浪费，同时还污染了环境。
马铃薯收获时，其茎叶多为青绿色，具有较高的营养价值，尤其是粗蛋白质含量较高据测定，马铃薯叶的水分含量为85%- 92%，其干物质中粗蛋白质含量为11%-26%、中性洗涤纤维含量为28%-47%、粗脂肪为2.5%-4.8%、粗灰分为9.5%-16.8%、钙含量为1.4%-1.9%、磷含量为0.19%-0.36%更为重要的是马铃薯叶中还具有一些独特的生物活性物质，如茄尼醇、绿原酸、色素、黄酮类物质、酚酸类物质等[4]其中以茄尼醇在马铃薯叶中含量较高（0.1%-1%）、用途广泛而被大量研究[5-7]2.1 茄尼醇相关产品质量控制的需要茄尼醇是一种不饱和的九聚异戊二烯伯醇，属四倍半萜烯醇，具有独特的链状隔离多烯结构，是合成多种心血管疾病治疗药物、抗癌药物和抗溃疡药物的重要中间体，如合成辅酶Q10、维生素K2和抗癌增效剂SBD等[8, 9]茄尼醇本身还具有抗菌、消炎和止血等作用所以从马铃薯叶中提取茄尼醇是其资源化利用的有效途径之一目前以茄尼醇为主要成分的提取物主要有茄尼醇提取物和提取液两种浸膏形式，大多为粗提物西安清烁进出口贸易有限公司生产的茄尼醇提取物和茄尼醇提取液广销国外而为了更好的资源化利用马铃薯叶中的茄尼醇，同时为了做好茄尼醇提取物相关制品的质量控制，首先需要对马铃薯叶中的茄尼醇进行准确、高灵敏的检测，即需要发展普适性好、准确度高、高灵敏度的检测方法。
2.2 完善国家标准的需要经查询，目前ISO、AOAC的相关标准中都没有马铃薯茎叶及其加工制品中茄尼醇含量测定方法的相关标准而我国国家标准中有一项[10]与之相关，为《烟叶和烟叶提取物中茄尼醇的测定 高效液相色谱法》（GB/T 31758-2015），该标准针对烟叶、烟膏、烟叶提取液中游离茄尼醇和总茄尼醇的含量给出了明确的测定方法，并对该方法对烟叶、烟膏、烟叶提取液中茄尼醇的检出限和定量限进行了说明该方法对于烟叶中游离茄尼醇和总茄尼醇含量的检出限为0.0013 mg/g，烟膏中游离茄尼醇和总茄尼醇含量的检出限为0.0013 mg/g，提取液中游离茄尼醇和总茄尼醇含量的检出限为0.000052 mg/g由于马铃薯茎叶及其加工制品中茄尼醇含量通常较少，通常所使用的高效液相色谱法存在检测灵敏度接近马铃薯茎叶提取物中茄尼醇的下限的问题，难以实现马铃薯茎叶提取物中茄尼醇含量的准确测定而高效液相色谱-质谱法具有较高的灵敏度，可以实现马铃薯茎叶提取物中茄尼醇含量的准确测定3茄尼醇研究、应用与标准现状3.1茄尼醇研究国内外对茄尼醇的研究已经十分广泛，可查询到大量的论文与专利，研究范围包括提取分离、纯品制备、分析检测、结构表征、药理活性、毒性、分子结构改性、产品加工等方面。
3.2茄尼醇检测方法目前对马铃薯叶中的茄尼醇的检测方法主要包括高效液相色谱-质谱法[11-14]、高效液相色谱法[15, 16]、薄层色谱法[17]等方法，其中高效液相色谱法应用较多，如沈建伟等[15]应用液相色谱法建立了马铃薯叶提取物中茄尼醇含量的测定方法，该方法线性范围为0.13 ppm-0.46 ppm，平均回收率为98.2%，RSD值为1.32%，具有良好的精密度和准确性，适用于茄尼醇产品中茄尼醇含量的测定杨玲娟等[16]建立了反相高效液相色谱法测定马铃薯叶中茄尼醇的分析方法，并采用微波辐射法进行样品前处理，大大提高了样品的提取效率并减少了提取溶剂消耗，该方法线性范围为6.125 μg/mL-196 μg/mL，平均加样回收率为99.04%，RSD值为1.87%薄层色谱法也有较多应用，如贾海红等[17]发展了薄层扫描测定马铃薯叶中茄尼醇的方法，方法的回收率为92.6%-97.1%，方法相对标准偏差为2.17%-2.59%，最低检测限为0.15 ug这些方法都具有简便、快速、实用等优点，但都存在检测灵敏度接近马铃薯叶提取物中茄尼醇的下限，难以实现马铃薯叶提取物中茄尼醇含量的准确测定。
而高效液相色谱-质谱法具有较高的灵敏度，如石小鹏等[14]建立了马铃薯叶中茄尼醇含量的高效液相色谱-质谱检测方法，方法的线性范围为0.006 μg/mL-114.0 μg/mL，可以实现马铃薯叶提取物中茄尼醇含量的准确测定因此，制订简单可信的马铃薯叶中茄尼醇含量的高效液相色谱-质谱检测方法标准具有十分重要的现实意义和紧迫性3.3茄尼醇标准 经查询，目前ISO、AOAC的相关标准中都没有马铃薯叶及其加工制品中茄尼醇含量测定方法的相关标准而我国国家标准中有一项与之相关，为《烟叶和烟叶提取物中茄尼醇的测定 高效液相色谱法》（GB/T 31758-2015），该标准针对烟叶、烟膏、烟叶提取液中游离茄尼醇和总茄尼醇的含量给出了明确的测定方法，并对该方法对烟叶、烟膏、烟叶提取液中茄尼醇的检出限和定量限进行了说明该方法对于烟叶中游离茄尼醇和总茄尼醇含量的检出限为0.0013 mg/g，烟膏中游离茄尼醇和总茄尼醇含量的检出限为0.0013 mg/g，提取液中游离茄尼醇和总茄尼醇含量的检出限为0.000052 mg/g由于马铃薯叶及其加工制品中茄尼醇含量通常较少，通常所使用的高效液相色谱法存在检测灵敏度接近马铃薯叶提取物中茄尼醇的下限的问题，难以实现马铃薯叶提取物中茄尼醇含量的准确测定。
而高效液相色谱-质谱法具有较高的灵敏度，可以实现马铃薯叶提取物中茄尼醇含量的准确测定因此，有必要尽快制定《马铃薯叶及其加工制品中茄尼醇的含量测定 高效液相色谱-质谱法》国家标准，以满足相关企业和检测、管理结构的需要4主要起草过程4.1成立标准制定工作组国家重点研发项目立项后，2017年11月10日在北京市西藏大厦召开了国家标准《马铃薯叶及其加工制品中茄尼醇的含量测定 高效液相色谱-质谱法》第一次工作会参加单位有中国计量大学、中国标准化研究院、北京信息职业技术学院、云南农业大学、中国热带农业科学院分析测试中心、河北冠卓检测科技股份有限公司、浙江大学、中华全国供销合作总社天津再生资源研究所等会议成立了由中国计量大学、中国标准化研究院、北京信息职业技术学院、云南农业大学、中国热带农业科学院分析测试中心、河北冠卓检测科技股份有限公司等单位参加的标准工作组，主要由从事标准制修订、仪器分析、具有丰富技术经验的专业研究人员组成，工作组制定了初步的标准编制工作计划4.2确定工作计划和标准制定原则按照工作任务要求，工作组制定了标准起草工作计划和任务分工在充分研究与讨论的基础上，制定了标准制定原则：（1）先进性：其准确度、精密度和灵敏度达到较高水平。
2）适用性：要适应我国植物提取物产业发展的要求，满足植物提取物现代化的需要3）可操作性：符合我国目前检测仪器设备和试剂、材料的供应条件4）实用性：符合检测从业人员的技术水平，能被国内主要的环境分析实验室所使用并达到所规定的要求要有利于提高农业废弃物综合利用，为植物提取物质量控制部门、有关企业和三农服务4.3查询国内外相关标准和文献资料2018年，开始开展“马铃薯叶及其加工制品中茄尼醇的含量测定 高效液相色谱-质谱法”方法研究由于在现行国家标准、行业标准、地方标准、团体标准和企业标准中，均无相应的测定方法标准，与之相关的只有一个《烟叶和烟叶提取物中茄尼醇的测定 高效液相色谱法》的测定茄尼醇的标准方法，所以我们查阅相关文献，分析茄尼醇的结构特点，茄尼醇属于四倍半萜烯醇，具有九个连续的双键的独特结构高效液相色谱-质谱法具有准确度好、精密度高、检出限与定量限低、操作简单等优点，因此确定采用液相色谱-质谱法检测马铃薯叶中提取的茄尼醇借鉴《烟叶和烟叶提取物中茄尼醇的测定 高效液相色谱法》中茄尼醇的提取方法，以马铃薯叶为样品，经过初步试验，证明方法是可行的而后对方法进行优化，对方法进行验证，结果表明方法的准确性、回收率、精密度等方面都能达到国家可标准的要求，并且基本符合制定国家标准的条件，并于2018年向国家标准化管理委员会提出立项申请。
4.4 研究建立标准方法，开展条件实验标准工作组按照计划任务书的要求，结合制定标准的要求，研究建立标准方法的实验方案，并进行方法前处理条件的选择、仪器条件的确定和方法精密度、准确度及检出限的测定等试验2018年3月开始，标准起草工作组赴云南省昆明市进行马铃薯主产地进行调研，获取了大量相关信息与数据2018年3月27日从朱有勇教授的马铃薯基地采集很多马铃薯叶，作为茄尼醇提取的原料原料样品采集后。