实验二一、实验目的MS培养基的配制与灭i学会配置MS+I mg/L2.4-D+蔗糖3% +琼脂0. 8%二、实验原理2,4-D （二氯苯氧乙酸）属生长素的范畴在自然界中，生长 素可影响到茎和节间的伸长向性顶端优势叶片脱落和生71根等现象，在组织培养中，生长素被用于诱导细胞的分裂和根的 分化，其中2, 4-D （二氯苯氧乙酸）被广泛用于愈伤组织的诱导三、 实验材料1. 实验器械：灭菌锅，电磁炉，三角瓶量筒，酒精灯，镣子, 解剖刀，超净工作台，pH,试纸，电子天平等2. 实验药品：MS母液，蒸僧水，2,4-D,升汞，乙醇，无 菌水等四、 （一）配置培养基（1L MS培养基的配置） 1 .瓶塞制作2. 盖纸的准备及配置100mg/L（ 100ml）的2, 4-D （-氯苯氧乙酸）3. 称取8g/L （0. 8%）的琼脂置于不锈钢的锅中，加蒸馄水直到培养基最终容积的3/4,在电炉上加热溶解待琼脂溶解后再加30/L （3%）的蔗糖，用玻璃棒搅拌均匀4. 分别加入一定量的各种贮备液，包括生长调节物质和其他的特殊补加物5. 加蒸饲水定容6. 分均匀后，用1.0或0. 1 mo I /LNaOH或HCI调节培养基的pH (5. 4~7. 0) o7. 把培养基分装到所选用的培养容器中（约25~30mL）。
8. 用包在纱布中的棉塞（它不仅能阻止微生物污染，而且还可以使气体自由交换）,然后再用牛皮纸套在棉塞上（防止棉塞在高 温灭菌时吸湿）培养基的灭菌1 .把已经装入了培养基的培养容器置于灭菌锅中进行灭菌（在灭FT菌之前，必须注意水至吃水线，防止烧干，接通电源升温后，首 先要排净锅内的冷空气，然后在121C 1.06kg/cm2或者 0.105MPa的条件下灭菌15至20min）2.灭菌结束后，切断电源，让锅内气体自然下降，待压力表指针回到零后，再打开放气阀，排除剩余蒸汽，打开锅盖取出培养基（过早开阀放气会造成锅内气压骤降，引起培养基沸腾外溢）o（三）最后清理实验室实验项目注意事项:1.注意琼脂和蔗糖的称量2.注意2,4-D （二氯苯氧乙酸）配制与量取3. 注意瓶塞的制作与包扎（相对于瓶口不应该过大或过松）o 4 .注意灭菌锅里的水是否至吃水线5. 灭菌后应该切断电源，让锅内气体自然下降，待压力表指针回到零后，再打开放气阀，排除剩余蒸汽，打开锅盖取出培养基（因为过早开阀放气会造成锅内气压骤降，引起培养基沸腾外溢)6. 配置MS培养基时应该注意调节pH (5.4~7.0)因为过酸培养基不易凝固过碱培养基会变硬。
7. 配置溶液时应注意定容到位8. 生长素相对含量不宜过高以免刺激细胞产生乙烯。