不同品种橘皮中的黄酮分摘要：目的：检测六种柑橘皮中黄酮类化合物的含量，为天然产物开发提供数据 参考方法：采用紫外-可见分光光度法和高效液相色谱法分别建立标准品的标 准曲线方程和检测方法结果：不同品种柑橘皮不仅总黄酮含量相差悬殊，含有 黄酮的种类和各自含量也差别很大六种柑橘皮苦柑中总黄酮的含量最高，达到 干重的9.26%,新橙皮莒是其黄酮的主要组成部分结论:进行天然产物的开发， 根据目标物质含量对优良品种筛选是必要的关键词：紫外可见分光光度计；HPLC；黄酮；质量检测1材料与方法1.1仪器与材料1.1.1仪器岛津UV-1700紫外可见分光光度计,SK7200HP超声波清洗器，依利特Sinochrom ODS-BP色谱柱(4.6mmX 200mm, 5um), KNAU-ER脱气装置，紫外检测器 (K-2600), N2000色谱工作站，台式离心机(80-2B型)，0.45um有机系过滤膜1.1.2材料甲醇(色谱纯)，纯净水，冰醋酸(AR),柚皮莒、橙皮莒标准品(99%)；芦柑、晚熟蜜橘、雪柑、苦柑、纽荷尔脐橙、塔罗科血橙均购自南平1.2实验方法121样品处理对不同品种的柑橘洗涤后剥皮，在35C吹风干燥箱中干燥，然后粉碎过20 m 筛。
各称量2g置于500mL的广口瓶中，加入300mL80%的甲醇溶液，浸泡过夜 后超声20min,再放置24h后超声20min,过滤得提取液，并以300mL作为总提 取液体积进行计算1.2.2紫外吸收标准曲线的绘制准确称量lO.OOmg橙皮莒标准品，溶解于甲醇：5%NaOH=4： 1的混合溶液 中，稀释到不同浓度，以281nm左右最大吸收峰的吸光度A和橙皮莒浓度(C) 为变量，绘制标准曲线，得到回归方程为：A=0.0228C-0.0994, R2=0.9977,线性 范围为 5.0〜30ug/mL,加入回收率 99.87%(RSD=1.1%, n=3)1.2.3总黄酮含量测定分别量取不同提取液各l.OOmL到50mL容量瓶中，加入5%NaOHlmL,再 加80%甲醇溶液定溶摇匀后，以加有NaOH的80%甲醇溶液为参比测量281 nm 左右最大峰的吸光度A依照122得来的函数计算提取液中总黄酮的浓度、质 量、百分含量各测量三次，求平均值1.2.4 HPLC标准曲线绘制分别用橙皮莒、柚皮莒标准品配制成不同浓度的溶液，选择依利特Sinoehrom ODS-BP 色谱柱(4.6mmX200mm, 5um)为分析柱，以甲醇：0.5%HAC=l： 1 作 流动相，流速为0.6mL/min,脱气，每次进样量为20uL,建立橙皮苜、柚皮 背的色谱峰面积(Y)和浓度(x)为变量的标准曲线方程。
柚皮昔的回归方程为:Y=90812X+31970, R2=0.9997,线性范围为3.5〜 56ug/mL,加入回收率 99.72%(RSD=1.1%, n=3)橙皮昔的回归方程为：Y=113277X - 256546, R2=0. 9954,线性范围为4. 0〜 12ug/mL,加入回收率 99.46%(RSD=1.3%, n=3)125提取液中橙皮苜、柚皮苜含量测定把各提取液用流动相稀释到一定的浓度，再用0.45um有机系过滤膜抽滤， 利用124建立的方法进样，由色谱峰面积求得提取液浓度、某些黄酮质量和百 分含量各测量三次，求平均值2结果与讨论2.1总黄酮含量测定多数黄酮在240-400nm有两个主要吸收带，I位于300~400nm,由B环桂 皮酰基体系的电子跃迁产生；H位于240〜285mn,由A环苯甲酰基体系的电子 跃迁产生，基于光吸收的分光光度法只能对物质中总黄酮含量进行粗略测量不 同品种的柑橘皮中总黄酮含量不同，并且差别很大，测量结果如表1所示可以 看出，苦柑中黄酮的含量最多，高达9.26%,其它品种含量相差不大，雪柑中最 少，为 3.83%表1不同品种柑橘皮中总黄酮的含・品种芦柑纽荷尔脐橙塔罗科血橙雪柑苦柑晚熟蜜橘C*K (mg/mL)1.7751.4131.3961.2753.0851.652黄酮质量(叫5)106.5084.7883.7676.50185. 1099.12黄隔含量(％)5. 334.244.193. 839.264.962.2 HPLC法对黄酮的分析高效液相色谱法实现了对橘皮中不同黄酮的分离定量分析，分离度符合定量 分析要求。
实验研究了不同甲醇浓度、pH时流动相的分离效果，在兼顾缩短保 留时间，提高分离度的前提下，选择甲醇/0.5%HAC（l： 1）作为流动相HPLC法对柚皮莒、橙皮莒进行了定量分析，结果如表2所示，图1中a、b、 c、d、e、f为检测到的色谱图其中新柚皮苜、柚皮莒、橙皮莒、新橙皮莒的保 留时间分别为12.998, 14.165, 14.998, 16.432min在此洗脱条件下,进样量太 大，橙皮昔的色谱峰容易被柚皮昔掩盖，必须控制在适当的浓度范围内，才能有 理想的分离效果，并且橙皮莒的含量一信号响应灵敏性远远低于柚皮莒，适宜线 性范围比柚皮莒也低许多不同品种橘皮中的主要黄酮不仅含量不同，所含有黄酮的种类也不一样在 所设计的实验浓度范围内，芦柑检测到两种主要黄酮，柚皮昔的含量很高，新圣 草莒含量少；纽荷尔脐橙、塔罗科血橙、雪柑各检测到三种黄酮；苦柑和晚熟蜜 橘中检测到四种黄酮苦柑中新橙皮莒的含量特别多，是其总黄酮含量明显增加 的原因，可作为提取新橙皮昔的最佳原料201816141210864202-412 13 14 15 16 17 18 19 20 时间(min) c品种芦柑纽荷尔脐證塔罗科血橙雪柑苦柑晚熟密橘柚皮伴含・(%)1.730.140.360.020.170.07橙皮昔含量(%)2.453.002.312.871.742.163结论橘皮中总黄酮含量占干重的3%〜10%之间，是一类重要的活性物质。
HPLC 法是从天然产物中分离定量分析物质的有效方法之一，当提高进样量的浓度时， 分离度会下降，需要调整流动相的组分比或重置色谱柱的载体由于分光光度法 和HPLC法定量依据差异，测量总黄酮的含量之间出入较大目前，国内柑橘加工的副产品一柑橘皮是资源丰富的天然资源，增加农产品 的附加值是中国农村增加收入的客观要求，也是中草药走向国际市场的有效途径 由不同柑橘皮中黄酮含量的差别可知，进行天然产物的开发，根据目标物质含量 对优良品种筛选是必要的参考：http://www.yunuo-, 。