DEAE Sephrose CL使用说明 DEAE Sephrose CL-6B运用说明DEAE Sepharose CL-6B是一种弱用离子交换剂，有特别好的流淌性质和很高的容纳全部PI值蛋白质的实力，离子交换群体是二乙氨乙基，它可以保持带电状态并在整个工作范围PH3-9维持持续的高容量Tablel 表1 胶性质 离子交换剂类型：弱阴离子 总离子容量：0.13~0.17m mole/m1胶有效容量：甲状腺球蛋白〔TG〕 MW669.000 2mg/ml HSA MW 68000 170 mg/ml 2-乳清蛋白质 MW 14 300 150 mg/ml颗粒构造：67交联 agarose 颗粒尺寸范围：45~165um 平均粒子尺寸：90um 最大流速：150 cm/h最大操作压力：0.015Mpa(0.15bar,2psi)PH稳定性：长期 3~12 短期 2~10化学稳定性：通常用水溶液buffer,1.0氨基酸，1.0NaoH,8M VREA尿素；8M的盐酸胍，乙醇，丙醇等。
物理稳定性：由于PH或离子强度改变引起的体积改变可以忽视高压灭菌：在0.1M Nacl 121℃ 30min有效容量是由在0.5×5cm柱子，线性流速为300cm/h条件下确定的，运用的初始buffer为0.05M Tris PH8.3，洗脱buffer包含2M Nacl.给定的范围是由我们的学问和经历估计的，请留意如下几个方面：〔1〕pH稳定性，长期的参考的pH区间是指在以后的层析过程中胶体保持稳定，长时间内不会受到页面的影响〔2〕pH稳定性，短期参考的pH区间指，再生和CIP和灭菌过程胶作打算：DEAE，Sepharose CL-6B应先在20%乙醇中预膨胀，倾析掉20%乙醇制备粗纯物，取代之为初始指buffer,按75%的沉积胶25%的buffer的比例，初始buffer中不应含有明显增加粘度的试剂装柱完成以后应用粘性buffer在减小的流速下平衡装柱：Sepharose CL-6B gols1． 在层析进展过程吕所在温度下，平衡全部材料 2． 除去粗纯物中气泡3． 除去柱子颗粒体空间内的气体，利用buffer流淌，确保柱子网状构造中没有气泡残留，关掉柱子开关，并在柱子中保存几厘米buffer .4． 将粗纯物的连续参加柱子中，用玻璃棒斜靠柱壁，将粗纯说沿玻璃棒参加以削减气泡的导入。
5． 马上用buffer填满柱子，盖上顶端连上泵6． 翻开柱子底部开关，让泵在所需流速下进展，流速至少应限制在层析过程所需流速的135%倍然而最大流速〔参考表1〕主要适用于装柱过程，不要超过表1所给出最大流速，Note:假如在最大流速下装柱在接下来的层析过程中不要超过比数值的75%7． 当到达一个柱床高度以后，保持此流速流过三个床体积 Vos of adaptor 受体运用 受体按以下条件参加：1． 按上述说明装好柱子以后，关掉底部开关，去掉顶部盖子，当心用buffer加满柱子剩余空间，以使在顶部形成一个向上的弯液面2． 将受体，与柱子成一角度参加，保证在下面网孔中没有气泡3． 连接好全部管子连接，必需保证从柱子到泵的管子和从柱子到样品应用系统中没有气泡4． 渐渐向下滑动柱塞，以保证网状构造和毛细管中气泡被洗脱剂取代赶走在过程中，应旋转柱子开关的阀门向各个方向旋转以确保气泡被赶完全5． 在此条件下锁住受体，翻开柱子开关，起先洗脱，按装柱流速让洗脱液流过直到胶床稳定假设须要重新在胶体外表参加受体 平衡：起先试验之前，确保离子交换床已到达平衡，通过泵入初始buffer通过柱子，直到洗脱液的导电率和pH值与进入溶液一样。
●结合：最普遍的过程是：让目的物分子结合到离子交换剂上而且其它分子流过，然而，在一些状况下，结合其它的“感染剂”而让目的分子流过更有用，● 吸附过程中，选择一个最适pH值buffer特别关键，请参考表2，buffer的离子强度应保持很低不至于干挠样品的结合，引荐的pH值，应在buffer的Pka值上下偏差0.5个pH单位范围内，并至少高于目的分子的pI值1个pH单位洗脱：解吸附/解离应在递增盐梯度〔线性或阶梯性〕或递减pH梯度条件下进展再生：依据样品的性质，再生通常用一个高离子强度的buffer冲洗耳恭听，〔例如1-2M Nacl〕或渐小的PH，然后用初始的buffer再平衡在有些条件下，有此物质请如变性Pr或脂质，不能再生过程中洗脱，这些物质可以在CIP过程中除去 CIP用0.5柱体积2M Nacl溶液冲洗柱子除去结合pr，接触时间为10-15min，后流筒除去预期pr，亲水性结合pr和脂质蛋白，用1M NaoH 在大约40cm/h的线性流速下冲洗柱子，接触时间1-2br，后流向除去强结合的亲水性结合pr，脂pr脂质用4个柱体积的70%乙酸或30%异丙醇冲流柱子后流向，当运用有机溶剂时应用递增梯度洗脱以幸免气泡形成。
同样也可用2个样体积清洁的碱或酸性溶液冲洗柱子，例如，运用0.1-0.5%的非离子型清洁剂溶于0.1M氨基酸中，用大约40cm/h的线性流速冲洗，然后用5个柱体积70%的乙醇，冲洗柱子以除去残留的清洁剂 在全部条件下，应运用至少3个柱体积的初始buffer. Sanifation:Sanifation过程以将微生物污染减至最小用0.5~1M NaoH 在40cm/h的流速下冲洗柱子，接触时间30~10min，反流相3~5倍柱体积无菌初始buffer重新平衡在柱子上述CIP或灭菌过程中不会有明显变更 保存：建议长期储存胶在20%乙醇中4℃本文来源：网络收集与整理，如有侵权，请联系作者删除，谢谢！第5页 共5页第 5 页 共 5 页第 5 页 共 5 页第 5 页 共 5 页第 5 页 共 5 页第 5 页 共 5 页第 5 页 共 5 页第 5 页 共 5 页第 5 页 共 5 页第 5 页 共 5 页第 5 页 共 5 页。