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磷酸盐缓冲液配制方法

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磷酸盐缓冲液配制方法_第1页
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磷 酸 盐 缓 冲 液 ( P B S ) 配 制 方 法0.01M PBSPBS (135 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1.5 mM KH2PO4, and 8 mM K2HPO4, pH 7.2)PBS 缓冲液( pH7.2 ~ 7.4 ): NaCl 137mmol/L, KCl 2.7mmol/L , Na2HPO4 4.3mmol/L , KH2PO4 1.4mmol/L称 7.9g NaCl , 0.2g KCl , 0.24g KH2PO4(or 1.44g Na2HPO4) 和 1.8g K2HPO4 ,溶于800 ml蒸馏水中,用 HCl调节溶液的pH 值至 7.4,最后加蒸馏水定容至1 L 保存于 4℃冰箱中即可需要注意的是,通常所说的浓度0.01 M指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度,而非Na离子或 K 离子的浓度, Na 离子和 K离子只是用来调节渗透压的母液的配制:0.2M Na2HPO4 :称取 71.6g Na2HPO4-12H2O,溶于 1000ml 水0.2M NaH2PO4 :称取31.2g NaH2PO4-2H2O ,溶于 1000ml 水各种浓度 PB(pH=7.4)的配制:先配 0.2M PB (pH=7.4, 100ml) :取 19ml 0.2mol/L的 NaH2PO4 , 81ml 0.2mol/L的 Na2HPO4, 即可。

然后 只需将 0.2M PB (pH=7.4)按相应比例适当稀释即可,如:0.1M PB ( PH=7.4 ) :取 500ml 0.2M PB,加水稀释至1000ml即可0.01M PB( PH=7.4 ):取 50ml 0.2M PB ,加水稀释至1000ml 即可0.02M PB( PH=7.4 ):取 100ml 0.2 M PB ,加水稀释至1000ml即可若需要 NaCl 的话,加入NaCl至 0.9%( g/100ml )即可另:其它各种另PH 值的0.2M PB ( 100ml) 配方 :pH0.2M NaH2PO4 ( ml )0.2M Na2HPO4 ( ml )5.793.56.55.89285.990106.087.712.36.185156.281.518.56.377.522.56.473.526.56.568.531.56.662.537.56.756.543.56.851496.945557.038627.133677.228727.323777.419ml81ml7.516847.613877.710.590.57.88.591.57.97938.05.394.70.01M磷酸盐缓冲液(PBS)配制方法称取 8g NaCl 、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和 0.24g KH2PO4, 溶于 800ml 蒸馏水中,用HCl 调节溶液的pH 值至7.4,最后加蒸馏水定容至1L 即可。

在 15lbf/in2(1034× 105Pa) 高压下蒸气灭菌(至少20 分钟),保存存于室温或 4℃冰箱中需要注意的是,通常所说的浓度0.01M指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度,而非Na 离子或 K离子的浓度, Na 离子和K 离子只是用来调节渗透压的如果是用于免疫组化的话,则需要在配置的时候分别加入100 u/ml 青霉素和链霉素之后再调PH 、定容、灭菌消毒PH7.67.47.27.0H2O1000100010001000NaCl8.58.58.58.5Na2HPO4 2.22.22.22.2NaH2PO4 0.10.20.30.4根据经验来看,新鲜配置的PBS 搅匀后其 PH 值约在7.2-7.4 之间,可是在温度的影响下,尤其在夏天,其电离常数发生了改变,在经过昼夜的时间后, PH 值会明显改变(我亲自测过偏酸)所以做实验的同学可要注意了, PH 值可能会影响实验结果,甚至可能导致阴性所以务必记得这个时候和天气,要加强实验条件控制问题每次使用前最好用试纸测一下过夜了的 PBS,如果发生偏酸或偏碱,注意重新换新液PBS 缓冲液称取 NaCl 8g, KCl 0.2g , Na2HPO4?12H2O 3.63g, KH2PO4 0.24g ,溶于 900ml 双蒸水中,用盐酸调 pH 值至7.4,加水定容至 1L ,常温保存备用。

PBST 缓冲液取 300μ l Tween-20 加入 PBS 100ml 中,混匀后即刻使用现用现配如果是把所有固体加大十倍,配置为浓缩液,工作时候十倍稀释,那么,在刚配好浓缩液时,PH 在6.5 左右,明显偏酸不能用盐酸调虽然可以用氢氧化钠颗粒调,但是有更方便的方法十倍稀释以后, PH 自动升高到所需要的值不需要其它任何处理这个可以先取少量试一试,配好之后再测一次 ~PH8.0 的 PBS 配方详细1. NaCl 137mmol/L , KCl 2.7mmol/L , Na2HPO4 4.3mmol/L , KH2PO4 1.4mmol/L2. 向烧杯中加入约 800 ml 的去离子水,充分搅拌溶解3. 滴加浓盐酸将 pH 值调节至 8.0 ,然后加入去离子水将溶液定容至 1 L 4. 高温高压灭菌后,室温保存注意:上述 PBS Buffer 中无二价阳离子,如需要,可在配方中补充1 mM CaCl2 和 0.5 mM MgCl20.05mol/L PBS( 磷酸缓冲液 Phosphate Buffer Solution , PBS)的配制:甲液: 0.05mol/L Na2HPO4溶液 :称取磷酸氢二钠9.465g 7.099g, 加蒸 馏水至 1000ml ;乙液: 0.05mol/L KH2P04溶液 : 称取磷酸二氢钾 , 9.07g 6.803g, 加蒸馏水至 1000m1 。

将甲乙液分装在棕色瓶内,于4℃冰箱中保存,用时甲、乙两液各按不同比例混合,即可得所需pH 的缓冲液 ,见下表 :pH甲液 ml乙液 mI5.292.597.55.595.095.05.9110.090.06.2420.080.06.4730.070.06.6440.060.06.8150.050.06.9860.040.07.1770.030.07.3880.020.07.7390.010.08.0495.05.0你要配制 pH=6.8的 PBS,可用甲、乙液各50ml 混合即可。

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