实验十六 细胞核与线粒体的分级分离 (选做，综合性实验，8学时）实验原理细胞内不同结构的比重和大小都不相同，在同一离心场内沉降速度也不相同，根据这一原理，常用不同转速的离心法，将细胞内各种组分分级分离出来分离细胞器最常用的方法是将组织制成匀浆，分级分离和分析三步，这种方法已成为研究亚细胞成分的化学组成，理化特性及其功能的主要手段实验原理分级分离（Fractionation）由低速到高速离心逐渐沉降，先用低速使较大的颗粒沉淀，再用较高的转速，将浮在上清夜中的颗粒沉淀下来，从而使各种细胞结构，如细胞核，线粒体等得以分离细胞核的分离提取步骤：小白鼠肝脏（用生理盐水洗涤）将湿重1g的肝组织放于培养皿中，加入8ml 预冷的0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L氯化钙溶液剪碎肝组织倒入匀浆器中（冰浴）研磨，过滤，涂片，做好标记，自然干燥用1%甲苯胺兰染色观察.(1)接上步滤液以2500rpm离心15min,上清夜涂片(2)干燥用1%甲苯胺兰染色观察余下沉淀用6ml 0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L氯化钙溶液悬浮沉淀物,以2500rpm离心15min,弃上清液将沉淀配制成悬液,涂片,（3）干燥。
用1%甲苯胺兰染色观察结果（1）（2）（3）用1%甲苯胺兰染色后盖片即可观察高速离心分离提取线粒体上清液分离线粒体用以17000rpm离心20min，弃上清液，留沉淀加入0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L氯化钙溶液1ml，以以17000rpm离心20min，沉淀物加入0.1ml 0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L氯化钙溶液,制成悬液.取上清液和悬液,分别滴片,各滴一滴0.02%詹纳斯绿B染色20min.实验结果油镜下观察,颗粒状的线粒体被詹纳斯绿B染成蓝绿色.思考题。