Y2HGold Competent Cell • Y2HGold: 10×100μl 保存条件:-80 ℃ • PGADT7(control vector):10ng/ μl 10μl 保存条件: 4℃ • Carrier DNA: 5ug/μl 100 μl 保存条件:-20 ℃ • PEG/liAC: 5 ml 保存条件: 4℃北京华越洋生物 Y2HGold 酵母感受态细胞基因型:MATa, trp1-901, leu2-3, 112, ura3-52, his3-200, gal4Δ, gal80Δ,LYS2 : : GAL1UAS–Gal1TATA–His3, GAL2 UAS–Gal2TATA–Ade2 URA3 : : MEL1UAS–Mel1TATA AUR1-C MEL1产品说明:Y2HGold 菌株是 Clontech 开发的 GAL4 系统酵母双杂实验用菌株,MATa 型,可直接转化质粒或与 MATα 型酵母 菌株 Y187 通过 mating 操作进行蛋白互作验证或筛库试验Transformation marker 为: trp1, leu2,报告基因 为:AbAr,HIS3,ADE2,MEL1。
High5TM 系列 Y2HGold 感受态细胞经特殊工艺制作,-80℃可保存 3 个月,经 PGADT7 质粒检测转化效率为 10^4 cfu/μg DNA操作方法:1. 取 100 μl 冰上融化的 Y2HGold 感受态细胞,依次加入预冷的目的质粒 1-5ug,Carrier DNA(95-100 度 5min,快速冰浴,重复一次) 10 ul ,PEG/liAC 500ul 并吸打几次混匀,30度水浴 30 分钟(15 min 时翻转 6-8 次混匀) 2. 将管放 42 度水浴 15min (7.5 min 时翻转 6-8 次混匀) 3. 5000 rpm 离心 40s 弃上清,ddH2O 400ul 重悬,离心 30s 弃上清 4. ddH2O 50ul 重悬,涂板, 29℃培养 48-96h编码 品名 规格 单位北京华越洋生物GX9122-100 Y2HGold Competent Cell 100ul*20 包北京华越洋生物GX9122-100s Y2HGold Competent Cell 100ul*10 包注意事项:1. 感受态细胞最好在冰上融化。
转化高浓度的质粒可减少用于涂板的菌量,同时转化 2-3种质粒时应增加质粒的用量 2. Y2HGold 酵母菌株对高温敏感,最适生长温度为 27-30℃;高于 31℃,生长速度和转化效率呈指数下降 3. 菌落变粉不是污染,是酵母细胞生长中一个常见现象当细胞在平板培养几天后,平板上的 Adenine 被消耗完,酵 母试图通过自身代谢途径合成 Adenine 以供利用,然而,有些菌株的 ADE2 基因被破坏, Adenine 合成途径受阻;又由于 其 ADE4,5,6,7,8 基因均正常,所以造成中间产物 P-ribosylamino imidazole(AIR )的积累而使菌落变为粉红色。