犬乳腺肿瘤的临床与病理学观察 1 犬乳腺肿瘤的临床与病理学观察 肖国华 （西南民族大学生命科学与技术学院，成都 610041） 1引言 宠物已经成了人们生活中重要的组成部分，随着宠物犬年龄的增大，乳腺 肿瘤已经成为了危害犬健康的一种重要的疾病调查发现，在 9-11 岁的老龄母 犬的发病率较高，公犬较少见[1]乳腺肿瘤可分为良性肿瘤与恶性肿瘤，也可 以根据起源的组织、形态学特征和预后因素做进一步分类为进一步了解犬乳 腺肿瘤的临床与组织病理学特征，提高对犬乳腺肿瘤的诊断、预后与治疗工作 水平，我们对来西南民族大学动物医院就诊的犬乳腺肿瘤病犬进行了临床与病 理学观察 2材料 2.12.1 乳腺肿瘤病犬乳腺肿瘤病犬 来西南民族大学宠物医院就诊的乳腺肿瘤病犬 2.22.2 主要仪器主要仪器 旋转式切片机（浙江金华无线电厂） 、电热恒温鼓风干燥箱（DGG-9140A， 上海森信实验仪器有限公司） 、电热恒温水浴锅（HH.SY.21，北京长凤仪器有限 公司） 、电子调温万用炉（1KW×4、龙口市先科仪器有限公司） 、光学显微镜 （CKX41,OLYMPUS）等 2.32.3 主要试剂主要试剂 甲醛溶液、伊红、酒精、二甲苯、切片石蜡、中性树胶、蒸馏水、苏木 素、甘油等。
3方法 3.13.1 临床检查临床检查 对前来就诊的患病犬进行一般检查，通过问诊、视诊、触诊的方法进行资 犬乳腺肿瘤的临床与病理学观察 2 料的收集，根据所得的信息进行疾病的初步诊断询问宠物主患犬饮食，运 动，既往病史等观察乳房是否异常最后用手触摸乳房看是否有肿块及能否 推动肿块 3.23.2 病理学检查病理学检查 3.2.13.2.1 取材与固定取材与固定 以 0.5×0.5×0.2cm 的大小切取肿瘤组织、肿瘤周围组织、肿瘤与健康组 织交界处组织，不可挤压以免损伤内部结构将组织样品放入 4%甲醛溶液固定 24 小时以上 3.2.23.2.2 修块与洗涤修块与洗涤 将固定好的组织修切至约 1mm 厚度，自来水浸泡、洗涤 3-4 天，每隔 12 小时换水一次 3.2.33.2.3 脱水脱水 在不同浓度的酒精中进行脱水：75%酒精 4 个小时，85%酒精 4 个小时， 95%酒精Ⅰ2 个小时，95 酒精Ⅱ2 个小时无水酒精Ⅰ1 个小时，无水酒精Ⅱ1 个小时 3.2.43.2.4 透明透明 为了减少组织收缩首先应经过酒精与二甲苯的混合液后再浸入二甲苯即 用无水酒精与二甲苯以 1：1 的比例，透明 15 分钟。
然后再以二甲苯透明 15 分 钟 3.2.53.2.5 浸蜡浸蜡 准备好蜡杯，事先石蜡融化放入温箱内，使保温箱保持约 62℃左右将透 明好的组织块依次放入不同熔点的Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ杯石蜡中每杯石蜡中各放 1 小 时 3.2.63.2.6 包埋包埋 将熔好的蜡倒入标有标记的纸盒中，然后将组织块放入纸盒中，并调整好 组织块的方向，自然冷却凝固 3.2.73.2.7 切片与粘片切片与粘片 犬乳腺肿瘤的临床与病理学观察 3 把包埋的每块组织周围过多的石蜡修去，组织块周围预留 3-4mm 石蜡，切 面修平整呈长方形或正方形用酒精灯将蜡块粘在木托上待蜡块与木块粘紧 后，将木块与石蜡固定在切片机上，进行连续切片调整好切片机，使切片厚 度 4-7um 左右 用毛笔将切片放在 40℃左右的电热恒温水浴锅中展开，用涂有薄层蛋白甘 油的载玻片捞片，每个组织选取 1，2 张最好的切片玻片做好标记50-60℃ 烘干 3.2.3.2.8 8 染色与封存染色与封存 本次实验采用 HE 染色法步骤如下：二甲苯Ⅰ10 分钟，二甲苯Ⅱ10 分 钟，无水酒精Ⅰ5 分钟，无水酒精Ⅱ5 分钟，95%酒精Ⅰ3 分钟，95 酒精Ⅱ3 分 钟，80%酒精 2 分钟，70%酒精 2 分钟，自来水 2 分钟，苏木精 5 分钟，自来 水洗去浮色，1.5%盐酸溶液 2-3 秒，自来水 2 分钟，自来水蓝化 30 秒，自来 水 2 分钟，70%酒精 2 分钟，80%酒精 2 分钟，伊红 2 分钟，95%酒精Ⅰ5 分钟， 95%酒精Ⅱ5 分钟，无水酒精Ⅰ5 分钟，无水酒精Ⅱ5 分钟，二甲苯Ⅰ5 分钟，二 甲苯Ⅱ10 分钟。
染色结束后，待二甲苯未干时封片将适量中性树胶滴在组织切片上，在 固封剂上覆盖盖玻片，使组织片位于载玻片与盖玻片的中间 3.2.93.2.9 显微镜观察及照片显微镜观察及照片 应用 Olympus 显微镜对制作好的组织切片进行观察，及时做好记录选择 较好的切片使用显微相机进行拍照 犬乳腺肿瘤的临床与病理学观察 4 4结果 4.14.1 临床检查结果临床检查结果 乳腺肿瘤病犬多数是 5 岁以上的母犬，多发生在倒数第一或第二对乳腺的 一侧肿瘤一般为界限清楚的结节形，就诊时肿瘤直径约为 1-5cm 大小有单 发，也有多发，在母犬的某个或多个乳腺发现大小不一的增生物（见图 1） ，有 些能推动，有些不能推动质软或质硬有些犬患部形成溃疡或者腹腔积液 图 1 乳腺肿瘤 Fig.1 Breast tumor 犬乳腺肿瘤的临床与病理学观察 5 4.24.2 病理学检查结果病理学检查结果 41 例乳腺肿瘤患病犬中，肿瘤分属于乳腺实性癌，乳腺纤维瘤，乳腺管状 腺癌三个类型 4.2.14.2.1 实性癌实性癌 显微镜下可见大小形状不一的癌巢细胞数量多，大量的癌细胞形成紊乱 的细胞团块，癌细胞大小不均，形状不一，染色较浅（见图 2） 。
癌组织间质较 少，有些出现间质水肿、间质透明变性，间质出血部分癌巢细胞与组织结构 崩溃成为红染得无结构团块其中，实性癌有27例 图 2 实性癌 Fig.2 solid cancer 犬乳腺肿瘤的临床与病理学观察 6 4.2.24.2.2 纤维瘤纤维瘤 乳腺纤维瘤的瘤细胞排列紊乱，瘤细胞大小不一，细胞与纤维束排列成束 状，纵横交错细胞少，胶原纤维多细胞多为梭形细胞核为长或短椭圆 形，大小不一致（见图 3） 核仁清晰，偶尔出现双核仁血管较少见有一例 出现核分裂像纤维瘤共出现 9 例 图 3 纤维瘤 Fig.3 Fibroma 犬乳腺肿瘤的临床与病理学观察 7 4.2.34.2.3 管状腺癌管状腺癌 癌细胞排列成腺管或腺泡状，腺管或腺泡大小和形状不规则核分裂像多 见，细胞层次增多（见图 4） 细胞排列紊乱并且大小不均有些出现间质水 肿，大量的中性粒细胞、淋巴细胞浸润管状腺癌共有 5 例 图 4管状腺癌 Fig.4 Tubular adenocarcinoma 犬乳腺肿瘤的临床与病理学观察 8 5讨论 5.15.1 犬乳腺肿瘤的临床检查犬乳腺肿瘤的临床检查 乳腺肿瘤通常为大小不一的增生物，有些能推动，有些不能推动。
质软或 质硬乳腺肿瘤病犬可表现疲劳、昏睡和体重减轻，局部淋巴结肿胀或正常 症状的严重程度取决于转移灶的程度和位置患有炎性乳腺肿瘤的犬表现更加 明显的临床症状，包括浮肿、疼痛和受累的乳腺炎性扩散，全身虚弱，体重减 轻 恶性肿瘤的临床表现包括：快速生长、非局限性、侵袭性生长、与皮肤或 皮下组织紧密联结这些表现中出现越多表明恶性肿瘤的风险增大，但是，即 使没有以上表现也并不能排出恶性肿瘤恶性肿瘤可以沿着组织间隙侵入破坏 邻近正常器官或组织并继续生长乳腺癌一般为不规则圆形、卵圆形或圆盘 形，多数比较坚硬，有的有囊性结构，常不可推动，表面常见溃疡 [2] 良性肿瘤临床表现：生长缓慢，不浸润，不转移，对机体的影响较小主 要表现为局部压迫和阻塞偶尔单个或多个软的结节可在年轻母犬发情后期或 注射孕激素过程中快速增长有时良性纤维瘤也会侵入乳腺但通常在切除卵 巢或者停止孕激素给药后消失 [3] 5.25.2 犬乳腺肿瘤的发病机理犬乳腺肿瘤的发病机理 很多原因能引起肿瘤的形成和生长有研究表明基因突变与肿瘤的形成密 切相关，大多数病犬都过度表达过某一种致癌基因[4]在来就诊的病犬中，很 多犬最初都较肥胖，也有学者认为肥胖是一种能导致肿瘤发生的危险因素[5]。
卵巢的分泌也能影响肿瘤的形成，研究发现在第一次发情前摘除卵巢几乎可以 完全避免乳腺肿瘤的发生，在第二次发情前摘除卵巢的母犬发病率比未绝育母 犬低 10 倍，第二次发情到 2 岁之间摘除卵巢的母犬发病率比未绝育母犬低 4 倍2 岁后摘除卵巢可以减少良性肿瘤的发病率，但对降低恶性肿瘤的发病率 作用很少或无作用[6] 动物的年龄、品种、生育情况、既往病史等因素均能影响肿瘤的形成与发 展如年龄，老龄动物免疫反应机能减退，对环境致瘤因素的体抗力低，大大 增加了肿瘤的形成机会 犬乳腺肿瘤的临床与病理学观察 9 乳腺肿瘤的发病机理也涉及细胞增生过度、凋亡不足、分化障碍等原癌 基因的激活与抑癌基因的失活导致细胞分裂增生不正常[7] 5.35.3 乳腺瘤的诊断乳腺瘤的诊断 5.3.15.3.1 临床检查临床检查 根据犬的年龄，性别，病史等，结合犬乳腺肿瘤的临床表现可初步判定肿 瘤 5.3.25.3.2 实验室诊断实验室诊断 活组织检查是首选的方法，如果肿瘤界限完整，切除活组织可以治愈尺寸 较小、分化良好的良性肿瘤可通过组织学检查判断肿瘤是良性还是恶性 5.5.4 4 犬乳腺肿瘤的组织学类型犬乳腺肿瘤的组织学类型 根据实验结果可以看出，在 41 例乳腺肿瘤患病犬中，乳腺实性癌 27 例 ， 占了 66%。
乳腺纤维瘤 9 例，占了 22%乳腺管状腺癌 5 例，占了 12%良性肿 瘤占了 22%，而恶性肿瘤占了 78%有文献指出，约 40%～50% 的犬乳腺肿块为 良性，即为纤维腺瘤[8]但本实验良性肿瘤比例只有 22%，分析起原因可能是 一：材料的局限性只收集到 41 例病犬肿瘤组织，并不能准确的代表乳腺肿瘤 恶性与良性的比例二：恶性肿瘤生长迅速，对机体造成较大的影响病犬一 般都是表现明显的病症后才被带来就诊而良性肿瘤能够长期生长且病理症状 不明显直到老死三：地域的差异性，不同地区由于饮食等的不同肿瘤恶性与 良性比例也有差异 6结论 本校动物医院检出的病犬乳腺肿瘤组织学类型包括乳腺纤维瘤，乳腺实性 癌，乳腺管状腺癌 犬乳腺肿瘤的临床与病理学观察 10 参考文献 [1]郑家三,王玉珠,盛鹏飞,等. 犬的乳腺肿瘤[J].广东畜牧局兽医科技，2006， 31（1） ：14-16. [2]黄志宏，卢建远，李必富,等.犬猫乳腺癌的病理学观察[J].西南民族学学 报·自然科学版，2006,32(5). [3] 宋巍巍，柴敏，张菁. 犬猫乳腺肿瘤的组织病理学诊断[J].黑龙江畜牧兽 医，2012,12：96-97. [4] La Guardia M, Giammanco M.Canine Breast cancer and obesity [J].Panminerva Med, 2001, 43(2):123-133. [5]李文波.犬的乳腺肿瘤[M].第四届北京宠物医师大会论文集，2008 ,10 (25)：214-217. [6] 冯万宇，刘云.小动物乳腺肿瘤[C].哈尔滨,中国畜牧兽医学会兽医外科学 分会，2004:195-196. [7] 马学恩,家畜病理学[M].北京：中国农业出版社，2010, 149-168. [8] 李花,崔洪平,袁冬.犬乳腺瘤的病例报告[J]中国畜牧兽医文摘,2012,28 (6)：154-155. 犬乳腺肿瘤的临床与病理学观察 11 致谢致谢 本文是在黄志宏老师亲切关怀和悉心指导下完成的。
他严肃、严谨的科学 态度深深的激励着我在论文的实验和撰写过程，黄老师付出了宝贵的时间和 大量心血我在学到专业知识的同时也学到了那严谨的科学态度在此表示衷 心的感谢 同时感谢西南民族大学动物医院的卢建远老师和李必富老师在收集病理材 料过程中给予的帮助和支持也感谢其他同学在实验过程中的热心帮助 还要特别感谢我的父母，感谢他们的养育之恩，以及在我成长、学习过程 中给我的教诲、支持与帮助家人的支。