《医学检验本科毕业论文范例-供参考.doc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《医学检验本科毕业论文范例-供参考.doc（11页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、 毕 业 论 文题 目：乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法学验证 姓 名： 学 号： 系 别： 年 级： 专 业： 指导教师： 二 一 一 年 十二 月目 录中文文献英文摘要前 言。1. 材料与方法。1.1 试剂盒1.2 仪器1.3 方法1.3.2铺板方案1.3.3加样步骤2. 结果2.1 标准曲线与线性范围2.2 准确度（回收率）的验证22.3 精密度的验证2.3.1 板内精密度的验证2.3.2 板间精密度的验证2.4 检测限（LOD）计算53. 讨论53.1 乙肝表面抗原定量分析的意义53.2 常用定量分析方法63.3 方法概述63.4 方法学验证内容63.5 结果分析及应用评价7参考
2、文献7在清洗液中硅表面为负电位有些颗粒也为负电位，由于两者的电的排斥力作用可防止粒子向晶片表面吸附，但也有部分粒子表面是正电位，由于两者电的吸引力作用，粒子易向晶片表面吸附。 乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法学验证摘 要目的：对福州蓝图生物工程有限公司生产的HBsAg的ELISA法定量分析试剂盒进行方法学验证，以判断是否能用于临床样本分析。方法：ELISA法定量分析，应用试剂盒HBsAg标准品从浓度为8ng/ml做2倍稀释的6个浓度梯度做标准曲线，以6，3，1.5ng/ml 3个浓度梯度5复孔做准确度，精密度和检测限等方法学验证。结果：标准曲线R2=0.997，准确度97.07%，1.5
3、ng/ml的RSD为16.78%，不满足ng/ml级水平的RSD一般应15%的要求，检测限LOD为0.172ng/ml，低浓度样品（1.5ng/ml）的检测在准确性和精密度方面都低于高浓度样品，不适合低浓度样品的检测。结论：该HBsAg的ELISA法定量分析试剂盒不能用于临床标本的分析。关键词 乙肝表面抗原 ELISA 定量分析 方法学验证The reification of the HBsAg ELISA quantitative methodologyAbstractObject: to verify the quantitative methodology of Fuzhou bluep
4、rint biological engineering company to make sure whether it ca be used to the analysis of Clinical Sample. Methods: ELISA quantitative methodology , make an Application of the standard HBsAg kit from the concentration of 8 ng/ml do 2 times diluted six concentration gradient to constitute a standard
5、curve, testing With 6, 3, 1.5 ng/ml 3 a concentration gradient 5 accurately precise and detection .Results: standard curve ,R2=0.997, the accuracy of RSD of 1.5ng/m is 16.78%，the RSD that cannot meet the demand of ng/ml basic level is less than 15% in common. The LOD is 0.172ng/ml, the testing of Lo
6、w concentration samples （1.5ng/ml）are lower than high concentration samples in both accuracy and precision , which as a result make it unsuitable for low concentration sample testing. Conclusion: the ELISA quantitative analysis kit of HBsAg cannot be used for the analysis of Clinical Sample.Key word
7、sHBsAg Quantitative analysis Verification Methodology. I前 言乙肝病毒感染是我国最常见的感染性疾病之一，而乙型肝炎血清标志物是检测乙肝病毒感染最主要的病原标志。随着免疫学技术的不断发展，抗原抗体检测灵敏度明显提高，使低水平乙肝病毒得以检出，对临床诊断及流行病学有重要意义1。ELISA法具有较高灵敏度、特异性强、重复性好、可进行定量和半定量测定等优点，可以在酶免疫分析仪上做批量检测。目前临床上多倾向于做定量分析，若想知道检验结果是否可靠，实验室则必须对所用试剂盒进行方法学验证，本实验对福州蓝图生物工程有限公司生产的HBsAg的ELISA法定
8、量分析试剂盒进行准确度，精密度和检测限等方法学验证，现报告如下。1. 材料与方法1.1 试剂盒 乙肝表面抗原ELISA法定量分析试剂盒，福州蓝图生物工程有限公司出品。1.2 仪器酶标仪：Bio-Rad 680 ；洗板机：Bio-Rad 1575；超纯水系统：Millipore Elix ；电热恒温培养箱(DNP-9052)上海精宏实验设备有限公司；振荡器（苏州管械，KJ-201A）；移液器；Tip头；EP管。1.3 方法1.3.1溶液配置 1PBS缓冲液的配置： 称取8g NaCl、 0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4，溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶
9、液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可。标准品的配置：原始标准品浓度为8 ng/ml。取6个2mlEP管，分别标记为S1-S6。50ul/well, 共1孔需50ul，每孔配置60ul备用，按照下表稀释方案进行稀释。编号终浓度（ ng/ml）预加1PBS取剩余（ul）标记（ul）S180标准品120S2460S16060S3260S26060S4160S36060S50.560S46060S60.2560S56060 质控品的配置：50ul/well, 共5复孔需250ul，配置300ul备用，取3个2mlEP管，分别标记为C1，C2，C3，按照下表稀释方案进行稀释。编号终浓度（ ng
10、/ml）预加1PBS取剩余（ul）标记（ul）C16150标准品450C23300C1300300C31.5300C23003001.3.2铺板方案 取出试剂盒中已包被酶标板，取出板条，按照下表铺板方案进行铺板在相应孔中依次加入系列标准品、质控品及空白对照，每孔50ul。空白对照加入1PBS缓冲液。12345AS1C1C2C3PBSBS2C1C2C3PBSCS3C1C2C3DS4C1C2PBSES5C1C3PBSFS6C2C3PBS1.3.3加样步骤加入酶标抗体，50 ul/well，震荡。37电热恒温培养箱温育60min，取出后洗板4次， 加入A、B液, 50 ul/ well，37电热恒温
11、培养箱温育15 min。加入终止液，50 ul/ well。酶标板放入酶标仪，盖上盖子，在电脑上打开Microplate Manager 5.2软件，选择450nm波长（参照波长630nm），设置LAYOUT和报告模式，测定各孔吸收值。2. 结果2.1 标准曲线与线性范围标准品理论浓度对应的实测OD值HBsAg(ng/ml)84210.50.25OD 1.661.000.620.390.310.27以HBsAg理论浓度为横坐标，所测OD值为纵坐标作图，绘制标准曲线观察线性关系，结果显示R2=0.9973，显示具有良好的相关性2.2 准确度（回收率）的验证 质控品理论稀释浓度对应实测浓度值HBs
12、Ag(ng/ml)测定值1234566.244.565.736.096.4033.363.293.553.283.481.51.241.271.171.171.20质控品做了3个浓度梯度，每个浓度做了5个复孔，下表是对每个浓度梯度进行准确度（回收率）的验证。HBsAg(ng/ml)测定值（ng/ml）回收率（%）平均回收率RR（%）3个浓度的平均回收率66.24103.9397.5897.07%4.5675.925.7395.576.09101.456.40106.6033.36112.13113.073.29109.573.55118.403.28109.403.48115.831.51.2482.4780.561.2784.671.1778.071.1777.671.2079.93 结果显示HBsAg 6ng/ml和3ng/ml的平均回收率为97.58%，113.07%，满足限度要求在85%-115%的范围内，而HBsAg 1.5ng/ml的平均回收率为80.56%，满足方法定量限在80%-120%的范围内。3个浓度梯度的平均回收率为97.7%，显示准确性好。2.3精密度的验证2.3.1 板内精密度的验证HBsAg(ng/ml)测定值RSD(%)1234566.244.565.736.096.405.800.7412.73
