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1、多肽含量的测定方法1原理采用15%的三氯醋酸溶液将样品中大分子蛋白完全沉淀，同时小分子肽保留在该溶液中，除去蛋白沉淀，上清液按照GB/T5009.5-2003规定的方法测定总氮含量。2试剂（所用试剂均为分析纯，使用的水为蒸馏水或同等纯度的水）a） 硫酸铜（CuSO45H2O）b） 硫酸钾c） 硫酸（密度为1.84g/L）d） 硼酸溶液（20g/L）e） 氢氧化钠溶液（400g/L）f） 硫酸标准滴定溶液c（1/2H2SO4）=0.0500mol/L或盐酸标准滴定溶液c（HCL）=0.0500mol/Lg） 混合指示液：1份甲基红醇溶液（1g/L）与5份溴甲酚绿醇溶液（1g/L）临用时混合，也可
2、用2份甲基红醇溶液（1g/L）与1份亚甲基蓝醇溶液（1g/L）临用时混合。h） 15%三氯乙酸.3仪器（定氮蒸馏装置如图1所示）a） 电炉b） 水蒸气发生器（2L平底烧瓶）c） 螺旋夹d） 小玻杯及棒状玻塞e） 反应室f） 反应室外层g） 橡皮管及螺旋夹h） 冷凝管i） 蒸馏液接收瓶 4多肽含量的测定4.1样品处理精密称取1.000g左右样品，加15%的三氯乙酸并定容至50ml，充分摇匀，静置30mim，过滤，取上清液备用。4.2总氮含量的测定4.2.1消化取5ml上清液，移入干燥的100ml定氮瓶中，加入0.04g硫酸铜 ，1.2g硫酸钾及5ml硫酸，稍摇匀后于瓶口放一小漏斗，将瓶以45度角
3、支于有小孔的石棉网上。小心加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停止后，加强火力，并保持瓶内液体微沸，到液体呈蓝色澄清透明后，再继续加热0.5h1h。取下放冷，备用。同时做试剂空白试验。4.2.2蒸馏按照图1装好定氮装置，于水蒸气发生瓶内装水到2/3处，加入数粒玻璃珠，加甲基红指示液数滴及数毫升硫酸，以保持水呈酸性，用调压器控制，加热水蒸气发生瓶内的水，向接收瓶内加入10ml（20g/L）硼酸溶液和5滴混合指示剂，提起玻塞用少量蒸馏水多次洗涤，全部试样处理液流入反应室，棒状玻塞塞紧。将10ml氢氧化钠溶液（400g/L）由小玻杯加入反应室，立即并加水于小玻杯以防漏气，夹紧螺旋夹，开始蒸馏。蒸馏5mi
4、n，使液面离开冷凝管下端，再蒸馏1min。然后用少量水冲洗冷凝管下端外部。取下接收瓶，以硫酸或盐酸标准滴定溶液（0.05mol/L）滴定到灰色或蓝紫色为终点。同时准确吸取5ml试剂空白消化液重复上述操作，作为空白对照。5结果计算样品中多肽含量的结果计算：式中：X试样中多肽的含量，单位为克每百克（g/100g）V1试样消耗硫酸或盐酸标准滴定溶液的体积，单位为毫升（ml）；V2试剂空白消耗硫酸或盐酸标准滴定液的体积，单位为毫升（ml）C硫酸或盐酸标准滴定溶液浓度，单位为摩尔每升（mol/L）0.01401.Oml硫酸c1/2H2S04=1.000mol/1或盐酸c（HCL）=1.000mol/L标准滴溶液相当的氮的质量，单位为克（g）M试样的质量，单位为克（g）F氮换算为蛋白质的系数，一般为6.25N稀释倍数
