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1、Tris是什么?有什么作用?Tris-HCl,Tris-EDTA如何配制?Tris:三羟甲基氨基甲烷三羟甲基氨基甲烷(Tris(hydroxymethyl)aminomethane,一般简称为Tris)是一种有机化合物,其分子式为(HOCH2)3CNH2。Tris被广泛应用于生物化学和分子生物学实验中的缓冲液的制备。例如,在生物化学实验中常用的TAE和TBE缓冲液(用于核酸的溶解)都需要用到Tris。由于它含有氨基因此可以与醛发生缩合反应 Tris为弱碱,在室温(25下,它的pKa为8.1;根据缓冲理论,Tris缓冲液的有效缓冲范围在pH7.0到9.2之间。Tris碱的水溶液pH在10.5左右
2、,一般加入盐酸以调节pH值至所需值,即可获得该pH值的缓冲液。但同时应注意温度对于Tris的pKa的影响。 由于Tris缓冲液为弱碱性溶液,DNA在这样的溶液中会被去质子化,从而提高其溶解性。人们常常在Tris盐酸缓冲液中加入EDTA制成“TE缓冲液”,TE缓冲液被用于DNA的稳定和储存。如果将调节pH值的酸溶液换成乙酸,则获得“TAE缓冲液”(Tris/Acetate/EDTA),而换成硼酸则获得“TBE缓冲液”(Tris/Borate/EDTA)。这两种缓冲液通常用于核酸电泳实验中。用途:有机合成中间体。在电泳缓冲液中同甘氨酸构成缓冲体系,稳定电泳过程中的PH值。在凝胶中也起到稳定PH的作
3、用,只不过是Tris-HCl缓冲体系。 Tris缓冲液不仅被广泛用作核酸和蛋白质的溶剂,还有许多重要用途。Tris被用于不同pH条件下的蛋白质晶体生长。Tris缓冲液的低离子强度特点可用于线虫(C. elegans核纤层蛋白lamin)的中间纤维的形成。Tris也是蛋白质电泳缓冲液的主要成分之一。此外,Tris还是制备表面活性剂、硫化促进剂和一些药物的中间物。Tris也被用作滴定标准物。1 M Tris-HCl (pH7.4,7.6,8.0)组份浓度1 M Tris-HCl配制量 1L配制方法:1.称量121.1 g Tris置于l L烧杯中。2.加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。3
4、.按下表加入浓HCl量调节所需要的pH值。pH值 浓HCl7.4 约70 ml7.6 约60 ml8.0 约42ml4.将溶液定容至1 L。5.高温高压灭菌后,室温保存。注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1,溶液的pH值大约降低0.03个单位。1.5 M Tris-HCl (pH8.8) 组份浓度1.5 MTris-HCl配制量 1 L配制方法1.称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。2.加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。3.用浓HCl调节pH值至8.8。4.将溶液定容至1 L。5.高温高压灭菌后,室温保存。注意:
5、应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1,溶液的pH值大约降低0.03个单位。TE即Tris-EDTA buffer(10mM Tris,1mM EDTA,pH7.4 pH7.6 pH8.0)。常用分子生物学试剂,用于DNA的溶解等。配制1 0TE Buffer (pH7.4, 7.6,8.0) 组份浓度:100 mM Tris-HCl,10 mM EDTA配制量: 1 L配制方法: 1. 量取下列溶液,置于l L烧杯中。1 M Tris-HCl Buffer(pH7.4,7.6,8.0) 100 ml500 mM EDTA(pH8.0) 20 ml2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水,均匀混合。3.将溶液定容至1 L后,高温高压灭菌。4.室温保存。解决党委自身和基层党支部存在的的突出问题,发挥各村、社区、机关单位党支部在当前城市征迁、园区建设、招商引资、服务群众、维护稳定的作用,我镇党委高度重视,制定了切合临淮实际的活动实施方案,按照中央规定的活动步骤和要求扎实有效的开展了基层组织建设年活动。