发给学生的微生物实验汇报

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1、广州大学实验报告学 院 土 木 学 院 专业、班级 06 给水排水 班 学 号 姓 名 课 程 名 称 水处理微生物学 实 验 时 间 2008.12.12008.12.5 2实验目录实验一 显微镜的使用及微生物形态的观察实验-2实验二 微型动物的计数实验-5实验三 细菌、霉菌、酵母菌、放线菌形态的观察实验-6实验四 微生物的染色实验-7实验五 培养基的制备及灭菌实验-9实验六 微生物纯种分离、培养及接种技术-12实验七 纯培养菌种的菌体、菌落形态观察实验-14实验八 微生物的生理生化特征实验-153实验一 显微镜的使用及微生物形态的观察一、实验目的(1)学习普通光学显微镜的使用方法。(2)结

2、合天然污水的观察，认识原生动物、菌胶团等微生物形态，并学习测量微生物大小的方法。二、实验用具(1)生物滤池滤料、活性污泥法曝气池混合液。(2)显微镜、目测微尺、物测微尺、载玻片、盖玻片等。三、实验步骤(一)显微镜的结构和各部分的作用微生物检验常用的显微镜见图 311、312，其构造分机械和光学两部分1机械结构熟悉显微镜的镜筒、载物台、调节器的各部分结构，并操作使用。2光学部分（1）接目镜。显微镜具有 3 个接目镜，其上常刻有“5” 、 “10”或“16”符号，即使用时可放大 5 倍、10 倍或 16 倍。观察微生物时常用 16 倍的接目镜。(2) 接物镜。接物镜装在回转板上，可分低倍镜、高倍镜

3、和油镜 3 种，放大倍数分别是4、10、40、100。(3) 聚光器。聚光器在载物台的下面，用来聚合由光源聚合器射来的光线。聚光器可以上下调整，中央装有光阑，用以调节显微镜照明系统的数值孔径，它直接影响分辨率、对比度和焦深。（二）显微镜使用和保护的方法 1操作步骤4(1）把电源开关按向“ON”一边，接通电源。(2)把标本放在载物台上，把 10物镜转入工作位置，对标本调焦。调焦旋钮往外旋为升，往内旋为降。微调焦钮每一转使载物台升(降)0，3mm。此调焦钮上的刻度分为每小格 2an。粗调焦钮每一转使载物台升(降)36mm。转动调焦钮时用力要均匀、缓慢，避免碰坏标本片。(3)将需用的物镜转入，再次对

4、标本调焦。(4)调节聚光器的升降位置，达到所需要的照明状态。一般情况下，孔径光阑的直径调至物镜光瞳的 7080时，能获得适当对比度的良好图像。(5)调节亮度控制钮，改变输入电压以调正亮度。(6)调节聚光器孔径光阑。2油镜的使用使用 100油物镜时，必须在镜头与标本之间涂上香柏油，浸油不能存有气泡，不然将使像质劣化。检查镜渍油中是否有气泡时，将目镜从镜筒取下，在镜筒中的光瞳孔观察。要消除气泡，可将物镜转换器稍稍来回转动几次，再加些油，或者换掉油，注意不要把转换器转得过远，以免其他物镜端面也沾上了油。擦去油时，要用擦镜纸或软布片，沾上二甲苯在透镜下面轻擦数次。用过的纸或布，不能再接触擦净的透镜。（

5、三）活性污泥和生物膜的观察观察活性污泥与生物膜的结构及菌胶团的形状、形态特征和运动方式等。1.标本的制备(1)、活性污泥。取活性污泥法曝气池混合液一小滴，放在洁净的载玻片的中央(如混合液中污泥较少，可待其沉淀后，取沉淀污泥一小滴加到载玻片上；如混合液中污泥较多，则应稀释后进行观察)。小心地用洗净的盖玻片覆盖。这样，就制成了活性污泥的标本。注意：加盖玻片时应使其中央已接触到水滴后才放下，否则会在片内形成气泡，影响观察。(2)、生物膜。从生物膜法的构筑物内刮取生物膜一小块，用蒸馏水稀释，制成供显微镜观察用的菌液。对于用石子作滤料的生物滤池，也可取石子一小块，置于冲洗干净的烧杯中，加蒸馏水 少许和干

6、净的玻璃珠，摇荡数分钟，使滤料上的生物膜脱落在水中，去掉滤料，再摇荡数分钟，做成菌液(如太浓、不易在显微镜下观察，可进行稀释)。取菌液一小滴，置于洁净载玻片的中央，用洗净的盖玻片覆盖(注意不要有气泡)，以备显微镜观察之用。1.显微镜观察(1)、低倍镜观察。、在选定的接目镜下，利用低倍镜，确定目测微尺 1 格的长度(单位以 m 计)：、观察所制备的微生物标本玻片，画出所见原生动物、菌胶团等微生物的形态草图。选择一个原5生动物，量出其尺寸：记下观察所用接目镜和接物镜的放大倍数，算出显微镜的放大倍数。(2)高倍镜观察：改用高倍镜观察，画出微生物的形态草图，并与用低倍镜所看到的比较，注意其不同点。记下

7、显微镜的放大倍数。四、实验结果：五、思考题(1)、使用显微镜时，哪些地方必须特别注意?(2)、使用低倍镜时，显微镜的放大倍数最小可达多少?使用高倍镜时显微镜的放大倍数是怎样呢?在什么时候才需要使用油镜?(3） 、为什么目测微尺必须用物测微尺标定?在某一放大倍数下，标定了目测微尺，如果放大倍数改变，它还需重新标定吗?6实验二 水中微生物的观察实验一、实验目的观察天然污水或活性污泥法曝气池混合液中的微生物。二、实验用具(1)、天然污水或活性污泥法曝气池混合液，(2) 、显微镜、小量筒、滴管、载玻片等，三、实验步骤、取洗净的滴管 1 支(其每一滴水的体积应预先标定)，吸取天然污水或混合均匀的曝气池混

8、合液或已稀释的混合液，滴 1 滴在载玻片的中央，以盖玻片(以方形为好)轻轻盖好水滴，要避免盖玻片内形成气泡。、将标本放在显微镜低倍镜下计数。计数时，先将视野放在盖玻片的右上角(可根据各人的习惯，也可放在另一角)，然后移动玻片，视野即可随之从上而下、从右到左通过。当前一个视野数完，并作好记录后，再换第二个视野，如此往复将整个盖玻片下面的动物全部计数完毕。注意在调换视野时，不可使相邻的视野重叠或遗漏，然后换算成 1mL 混合液中的动物数。四、实验结果微生物名称 每滴稀释液中的数量 每 ml 混合液中的数量 状态描述7实验三 细菌、霉菌、酵母菌、放线菌形态的观察实验一、实验目的(1)、进一步掌握显微

9、镜的使用方法。(2)、观察几个典型细菌的形态(示范片)。(3)、观察几个典型细菌的构造(示范片)。(4)、观察霉菌、酵母菌、放线菌的形态和构造，以便找出它们之间及细菌之间的区别点。二、实验用具(1)、显微镜、擦镜纸、镜油(香柏油)、二甲苯等。(2)、示范片。、金黄色葡萄球菌、肺炎双球菌、四联球菌、尿八联球菌、链球菌、球衣细菌、大肠杆菌、霍乱弧菌等。、枯草杆菌芽孢、假单孢杆菌鞭毛、固氮菌荚膜等。、酵母菌、霉菌、放线菌三、实验步骤(1)、复习显微镜的使用方法，重点放在油镜的使用部分。(2)、严格按照显微镜的使用方法，依次逐个观察细菌的形态、构造及酵母菌、霉菌、放 线菌的形态，分别绘出其形态、构造图

10、。四、实验结果（观察细菌形态构造图）8实验四 微生物的染色实验一、实验目的学习微生物涂片染色的操作技术，掌握微生物的普通染色法(单染色法)和革兰氏染 色法。二、实验用具(1)、菌种。(2)、显微镜、载玻片、接种环、酒精灯等。(3)、染料，a、单染色染色剂:美蓝染色液，石炭酸品红染色液。b、革兰氏染色剂:草酸铵结晶紫染色液，碘液，沙黄染色液。三、操作步骤1单染色(1)、涂片：在洁净的载玻片上先作一记号，以免弄错正反面，在其中央滴 1 滴无菌水或生理盐水(085NaCl)，用烧灼冷却过的接种环取少量菌体至玻片水滴中，和匀后涂成薄片，涂片面积不宜过大。对于活性污泥，可用滴管取其 1 滴，置于玻片上铺

11、成一薄层即可。(2)、干燥：在空气中自然干燥，使菌体的位置不再移动(也可将玻片置酒精灯火焰高处稍稍加热以干燥之，涂抹面应向上)。(3)、固定：于酒精灯火焰中通过 34 次(以玻片与手接触面感到稍微烫手为度)，使菌体固定于玻片上而不易脱落。固定也可使标本容易着色。(4)、染色：放标本于水平位置，在上面滴加美蓝或石炭酸品红染色液，染色时间的长短，随不同染色液而定(美蓝约染 3-5min，石炭酸品红约染 12min)。(5)、水洗：染色达到需要的时间后，倾去染色液，并以水冲洗，至冲下的水无色时为止。注意使水柱由玻片上端流下，避免直接冲在涂片处。(6)、吸干：在空气中自然干燥，或用吸水纸吸干后，用油镜

12、观察。2革兰氏染色 (1)、将实验所供菌种按单染色法作涂片、干燥并固定。(2)、在涂面上，加草酸铵结晶紫染色液 1 滴约 Imin 后，水洗。(3)、加碘液 lmin 后，水洗。(4)、斜置载玻片于一烧杯之上，滴加 95酒精脱色。并轻轻摇动玻片，至流出的酒精 不现紫色时立即停止滴加(约滴加 05-lmin)，随即水洗。为了节约酒精，也可将酒精滴至涂片上，静置05-lmin 后水洗。酒精脱色程度必须严加掌握。如脱色过度，则阳性菌会被误染为阴性菌；而脱色不够时，阴性菌将被误染为阳性菌。(5)、加沙黄复染液 05min，水洗。(6)、吸干，置于油镜下观察，阳性者为紫色，阴性者为红色。四、实验结果9观

13、察到的微生物有：单染色，复染色，草图如下：染色方法 菌体类型 颜色（分析） 菌体草图五、思考题(1)、微生物的染色原理是什么?(2)、用单染法染色后看到的微生物是什么颜色?什么形状?画出所观察到的微生物的草图。(3)、用革兰氏染色法染色后看到的细菌是什么颜色，属于革兰氏阴性还是阳性?(4)、革兰氏染色法中若只做(1)(4)的步骤而不用沙黄复染液复染，是否能分出革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌，为什么?(5)、微生物经固定后，是死了呢还是仍活着?10实验五 培养基的制备及灭菌实验一、实验目的(1)、学会玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备工作。(2)、掌握培养基配制和无菌水制备的方法。(3)、学会高压蒸汽灭菌

14、技术。二、实验用具(1)、培养皿(又称平皿，直径 90mm)、试管、吸管、锥形瓶、烧杯等。(2)、纱布、棉花、报纸。三、实验内容(一)、玻璃器皿的洗刷与包装1洗刷：玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。培养皿、试管、锥形瓶等可先用去污粉或洗洁精洗刷，然后用自来水冲洗。吸管则先用洗液浸泡，再用水冲洗。洗刷干净的玻璃器皿应放在烘箱中烘于。2包装(1)、培养皿由一底一盖组成 1 套，按实验所需的套数一起用牛皮纸包装。(2)、吸管应在吸端用铁丝塞人少许棉花，构成 1-1.5cm 长的棉塞，以避免吸尔球中细菌吸入管内。(3)、试管和锥形瓶等的管口或瓶口均需用棉花塞堵塞。(二)、培养基的制备1营养琼脂培养基(1)

15、、成分：蛋白胨 log，牛肉膏 3g，氯化钠 5g，琼脂 1020g，蒸馏水 1000ml。 (2) 、制法1)、将上列成分混合后，煮沸至琼脂完全溶解。在加热过程中，应不断搅拌。2)、用蒸馏水补充因蒸发而损失的水量。3、)调整溶液的 pH 值为 7.47.6。4、)乘热用纱布或脱脂棉过滤(最好用保温漏斗)，分装在锥形瓶中，250mL 的锥形瓶， 以装100mL 左右为宜。瓶口以棉花塞住。5)、置高压蒸汽灭菌器中，以 121 (9.8MPa)灭菌 20min，然后储存于冷暗处备用。2乳糖蛋白胨培养基(用于“发酵法”大肠菌群检验)(1)、成分：蛋白胨 10g，牛肉膏 3g，乳糖 5g，氯化钠 5g，1.6溴甲酚紫乙醇溶液 l