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1、2019年丙型肝炎病毒感染人群的戊型肝炎流行特征分析 丙型肝炎病毒感染人群的戊型肝炎流行特征分析本文关键词：肝炎，病毒感染，人群，特征，流行 丙型肝炎病毒感染人群的戊型肝炎流行特征分析本文简介：摘要：目的了解丙型肝炎病毒（HCV）感染人群中的戊型肝炎病毒（HEV）重叠感染流行情况，为更有效地开展丙型肝炎和戊型肝炎防治工作提供科学依据。方法采集20XX年10月20XX年12月孝感地区HCV感染者的血清进行抗-HEVIgG、抗-HEVIgM筛查。对调查发现的抗-HEVIgM阳性样本进行核酸检测 丙型肝炎病毒感染人群的戊型肝炎流行特征分析本文内容： 摘要：目的了解丙型肝炎病毒（HCV）感染人群中的戊
2、型肝炎病毒（HEV）重叠感染流行情况，为更有效地开展丙型肝炎和戊型肝炎防治工作提供科学依据。方法采集20XX年10月20XX年12月孝感地区HCV感染者的血清进行抗-HEVIgG、抗-HEVIgM筛查。对调查发现的抗-HEVIgM阳性样本进行核酸检测和基因分型。对HCV感染者进行肝功能筛查以及收集其人口学资料进行分析。结果164例HCV感染者中抗-HEVIgG阳性率为34.15%,抗-HEVIgM阳性率为2.44%（4/164）.抗-HEVIgG阳性率在性别和年龄上差异均无统计学意义（P0.05）,4个抗-HEVIgM阳性个体中异常指标2个，异常个体值分别为ALT328.05U/L、AST25
3、9.80U/L、总胆红素（TBIL）107.65mol/L、直接胆红素（DBIL）5.32mol/L和ALT32.01U/L、AST40.20U/L、总胆红素（TBIL）10.65mol/L、直接胆红素（DBIL）9.32mol/L,其中1个HEVRNA为阳性，基因型为d亚型。结论HCV感染者HEV既往感染和急性感染较高。对有HCV感染史的人群进行HEV筛查很有必要，同时要采用综合治疗。 关键词：戊型肝炎病毒；丙型肝炎病毒；血清流行病学；基因型；混合感染； 戊型病毒性肝炎（hepatitisE,HE）是经粪-口途径传播的急性自限性传染病，主要临床症状为食欲减退、恶心呕吐、乏力、肝大及肝功异常，
4、小儿发病率低，孕妇患戊肝病死率高。现已是世界卫生组织公认为发展中国家重要的公共卫生问题之一1.HEV的感染呈全球性分布，每年预估新发病例200万，在发展中国家，戊型肝炎属于介水传染病，除了诱发肝病外，还可能导致神经障碍2.HEV感染可能会导致HBV（hepatitisBvirus）、HCV（hepatitisCvirus）、HBV/HCV人群的慢性肝病增强3-6.目前HEV主要分为4种基因型，其中HEV-型流行最广，广泛分布在亚洲和非洲；HEV-型分布比较聚集，主要集中于墨西哥、尼日利亚、纳米比亚和其他几个西非国家；HEV-型在猪群等动物普遍存在，但临床上感染此型病毒的病例几乎全部来自发达国家
5、；HEV-型在印度、中国和一些欧洲国家均被发现可在动物间传播。目前我国报道的HEV主要有型和型，其中HEV-型感染率超过HEV-型7.陆一涵等发现我国部分地区猪群中有型和型共存的现象8.我国目前HCV与HEV合并感染的报道较少。综述国外文献后发现，HCV感染人群感染HEV病毒都是HEV-型，而我国主要流行的是HEV-型和型，因此有必要加强HCV和HEV混合感染流行特征分析。笔者现对孝感地区HCV感染者进行HEV既往感染、急性期感染、肝功能指标分析和HEV基因型分析，具体如下。 1资料与方法 1.1研究对象 在知情同意情况下，20XX年10月20XX年12月通过安陆市疾病预防控制中心疾控科收集不
6、同医院上报的HCV感染者信息，告知研究目的，在保障个人隐私的情况下，在个人自愿参加这项调查研究的人员中采集抗-HCV阳性者164人的人口统计学数据和采集其血清样本。样本来源于安陆市疾病预防控制中心、安陆市普爱医院、安陆市中医院、安陆市烟店卫生院。采外周静脉血5ml,3000r/min离心5min,吸取上层血清分成两管置-80保存。 1.2方法 1.2.1HEV抗体和转氨酶检测 对164例HCV感染者检测抗-HEVIgM和抗-HEVIgG（试剂由北京万泰生物药业有限公司提供）.对164份样本进行谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、直接胆红素（DBIL）和总胆红素（TBIL）检测（试剂由武
7、汉生之源生物科技有限公司提供）.ALT、AST、DBIL和TBIL采用IFCC速率法，ALT/AST40U/L、DBIL6.8mol/L、TBIL18mol/L或2mol/L判为异常。具体操作严格按试剂说明书进行，整个过程严格进行质量控制。 1.2.2部分HEVORF2区域序列分离 对抗-HEVIgM阳性样本用QIAampViralRNAMinikit提取HEVRNA（QIAGEN）,取备用血清样品140l按试剂说明书的步骤进行提取，最后获得30l的RNA提取液。PrimerScript1ststrandcDNAsynthesiskit（TAKARA）,取5lRNA按照试剂说明书的步骤进行反转
8、录。用巢氏RT-PCR反转录产物进行HEVORF2区域部分序列扩增，PCR引物和程序设置按照参考文献提供的方法操作9-10.整个实验重复两次，阳性结果，割胶纯化后进行克隆测序（上海生物工程有限公司）. 1.2.3序列分析 参照序列为HEV型代表序列：L08816（a）、AY230202（b）、AY204877（c）;型代表序列：M74506;型代表序列：AF060668（a）、AB189073（b）、AB073912（c）;IV型代表序列：ABl97674（a）、AF103940（b）、AB161719（c）、AB161717（c）、AJ272108（d）、FJ461765（d）、AY7237
9、45（e）、AB0825558（f）、AB220974（f）、AB108537（g）、GU188851（h）、KU974934（h）、KU974936（h）、JQ993308（i）、DQ450072（i）. 1.3统计学处理 采用Excel20XX进行数据录入，使用SPSS17.0软件的率的检验对结果进行统计分析。使用Mega5.0软件对不同HEVORF2部分序列进行比对，分析核苷酸序列的同源性，并选择合适模型法构建系统进化树。 2结果 2.1一般情况 164例HCV者平均年龄（53.0312.25）岁，其中抗-HEVIgG阳性率为34.15%（56/164）,抗-HEVIgM阳性率为2.44
10、%（4/164）.男性抗-HEVIgG阳性率为32.0%（24/75）,女性抗-HEVIgG阳性率为35.96%（32/89）,差异无统计学意义（=0.283,P=0.595）. 2.2抗HEV-IgG在HCV感染者中的年龄分布 HCV感染者抗-HEVIgG阳性率在年龄上分布差异无统计学意义（=0.927,P=0.921）（见表1）. 2.3ORF2核苷酸部分序列同源性分析和构建基因进化树 采取巢式RT-PCR检测4份抗HEV-IgM阳性血清标本，HEVRNA总检出率为25.00%（1/4）.将分离的HEV病毒株ORF2304bp核苷酸序列与参考病毒株序列进行比对并绘制系统进化树，分析显示，H
11、EV病毒株基因型属于d亚型，与20XX年湖北省人源HEVd（FJ461765）序列同源性为97.37%.系统进化树见图1. 2.4抗-HEVIgM阳性个体肝功能指标 4个抗-HEVIgM阳性个体肝功能指标2个正常，2个异常，分别是ALT328.05U/L（正常参考值040U/L）、AST259.80U/L（正常参考值040U/L）、TBIL107.65mol/L（正常参考值3.4220.5mol/L）、DBIL5.32mol/L（正常参考值06.8mol/L）和ALT32.01U/L（正常参考值040U/L）、AST40.20U/L（正常参考值040U/L）、TBIL10.65U/L（正常参考
12、值3.4220.5mol/L）、DBIL9.32U/L（正常参考值06.8mol/L）. 3讨论 本调查研究首次开展HCV感染者的HEV流行调查，其HEV既往感染和急性感染较高，因此要开展HCV感染者的HEV筛查。本次HCV感染者没有进行慢性HEV感染调查，先前国外有关报道HCV和HBV混合感染会导致肝炎病情加重3-6,因此应该增加样本量对HCV感染者抗-HEVIgM病人进行追踪调查，以进一步研究我国HCV与HEV混合感染的慢性转化情况。本次调查性别之间HEV既往感染差异无统计学意义。不同年龄组之间既往感染差异也无统计学意义，跟以往独自HEV既往感染随年龄增长不一致11-12,可能是由于样本量
13、不够多，后续需增加样本量验证。 本研究仅仅成功分离出1条304bpHEVORF2序列，经同源性比较和系统进化树分析，分离出的1条序列属于d亚型。与20XX年湖北省人源HEVd（FJ461765）序列同源性为97.37%.d亚型是否在此区域流行和导致混合感染后慢性转化还要增加HEVRNA阳性样本量予以验证。与先前山东省公开的猪源HEVd（基因编号：KF176370）的同源性为97.04%,暗示可能存在猪源HEV传给人类，且20XX年对孝感地区商品猪的HEV急性感染调查结果显示普遍存在HEV急性感染13.中国主要存在HEV和型。1986年我国新疆暴发流行了HEV型导致119280人发病，707人死
14、亡14.近年来中国HEV感染超过HEV，目前中国流行主要是HEV15.因此，要加强对HEV在国内流行趋势和特征监测。4个抗-HEVIgM阳性个体肝功能指标2个正常，2个异常，表明存在亚临床症状，但有临床症状的比率较高，可能跟采集抗-HEVIgM阳性样本量较少有关，后期需增加此类样本量加以验证。混合感染是否会导致临床症状加重需要进行后期追踪研究。 戊肝是一种人兽共患病，张守德等报道安陆市是湖北省生猪养殖比较集中的地区，对周边地区输出量较大，而且血清学调查发现猪HEV阳性率显着高于普通人群16-17.因此，安陆市HCV感染者应进一步避免接触生猪这一传染源。我国已经生产和批准了全球第一个预防戊肝的疫苗，对易感和重点人群接种疫苗是预防戊肝的重要措施；同时采取切断传播途
