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1、1芫花根质量标准研究作者：韩伟,章军,吴立军,李娆娆【摘要】目的建立芫花根中芫花酯甲的定性鉴别和定量分析方法。方法采用薄层色谱法对芫花根中芫花酯甲进行定性鉴别,采用高效液相色谱法测定芫花酯甲的含量。色谱条件：KromasilC18 色谱柱(4.6mm250mm,5m)；流动相为甲醇-水(8515),流速 1.0mL/min；柱温 40；检测波长为 238nm；记录时间40min。结果芫花根中芫花酯甲的薄层色谱鉴别特征明显、专属性强；含量测定线性范围为 0.0470.282g(r0.9996)；平均回收率为99.2%,RSD2.00%(n6)。结论该方法操作简便,结果准确,能够对芫花根中的芫花酯
2、甲进行定性鉴别和定量分析,提高了该药材的质量控制水平。【关键词】芫花根；芫花酯甲；薄层色谱法；高效液相色谱法Abstract：ObjectiveTodevelopqualitativeidentificationandquantitativeanalysismethodofyuanhuacininrootofDaphnegenkwasieb.etZucc.MethodYuanhuacinwasidentifiedbyTLCanditscontentwasdeterminedbyHPLC.KromasilC18(4.6mm250mm,5m)columnwasused.Themobilephase
3、wasmethanol-water(8515)ataflowrateof1.0mL/min.Thecolumntemperaturewas40.Thedetectionwavelengthofyuanhuacinweresetat238nm.Therecordtimewas40min.ResultsThelinearrangeofyuanhuacinwas0.0470.282g(r0.9996).Theaveragerecoverywas99.2%withRSD2.0%(n6).ConclusionTheseanalyticalmethodsweresimpleandaccurate,andc
4、anbeusedforthequalitativeidentificationandquantitativeanalysisofyuanhuacin.ItissuitableforqualitycontrolofrootofDaphnegenkwaSieb.etZucc.Keywords：DaphnegenkwaSieb.etZucc；yuanhuacin；TLC；HPLC芫花根为瑞香科植物芫花 DaphnegenkwaSieb.etZucc.的干燥根,广泛分布于我国长江流域各省和黄河流域的部分地区。本品味辛、苦,性温,有毒；具有逐水、解毒、散结等功效；用于治疗水肿、乳痈等。本品主要含二萜类、
5、黄酮类和香豆素类成分1；芫花酯甲为主要的二萜类成分,具有利水作用,能直接兴奋子宫平滑肌,为引产药的有效成分,还能抑制 P388 癌细胞核酸和蛋白质的合成,有抗白血病作用。该成分具有强烈的刺激性,对皮肤、黏膜系统有较大的毒害作用,是芫花根利水、抗生育作用的有效成分,也是毒性成分。本试验对芫花根中芫花酯甲进行定性定量研究,以期为提高芫花根的质量控制水平提供试验数据。1 仪器与试药薄层成像系统 TRANSILLVMINATOR2020D 型(冷泉港科技有限公司)；MerckTLC 薄层板(德国 Merck 公司)；Waters 高效液相色谱仪(600Pump；Waters600Controller；
6、Waters2487DualAbsorbanceDetector)；2Millennium32 色谱管理软件；CX-250 超声波清洗器(北京医疗设备二厂,功率250W,频率 40kHz)。芫花酯甲对照品为自制,经 1HNMR 和 13CNMR 鉴定结构,HPLC 检测其纯度,面积归一化法计算对照品的含量在 98%以上,符合对照品纯度要求。甲醇为色谱纯,水为自制高纯水。其余试剂均为分析纯。芫花根采自河南信阳,经笔者鉴定来源于瑞香科植物芫花DaphnegenkwaSieb.etZucc.的干燥根。2 定性鉴别取本品粉末 10g,置于 100mL 三角烧瓶中,用 95%乙醇 80mL 回流提取 1
7、.5h,提取液回收至无醇味,加水分散,用石油醚(6090)萃取,回收溶剂至干,溶解于1mL 甲醇中,得供试品溶液。另取芫花酯甲加甲醇制成每 1mL 约含 2mg 的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法2005 年版中华人民共和国药典(一部)附录B试验,吸取上述溶液各 15L,分别点于同一荧光板上,以苯-乙酸乙酯(11)系统展开,取出,晾干,置紫外光灯(254nm)下检视,样品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的暗斑。3 含量测定3.1 色谱条件KromasilC18 色谱柱(4.6mm250mm,5m)；以甲醇-水(8515)为流动相；流速 1.0mL/min；柱温 40；检测波长为
8、 238nm。3.2 溶液的制备3.2.1 对照品溶液的制备取芫花酯甲适量,精密称定,用甲醇溶解并定容,制成 0.0235g/L 的溶液,摇匀,即得对照品溶液。3.2.2 供试品溶液的制备取芫花根样品约 5g,置 100mL 具塞锥形瓶中,准确加入三氯甲烷 50mL,超声(功率 250W,频率 40kHz)30min,滤过,用少量三氯甲烷洗涤残渣,洗液并入滤液中蒸干,残渣加 50mL 甲醇,称重,回流 1h,放置,待其冷却至室温,称重,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液过微孔滤膜(0.22m),即得供试品溶液。3.3 线性关系考察取对照品溶液(0.0235g/L),分别进样 2、4、6
9、、8、10、12L,以芫花酯甲的进样量为横坐标,以峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,得芫花酯甲的回归方程为：Y2768985.32X319820,r0.9996,结果表明进样量在 0.0470.282g 范围内线性关系良好。3.4 方法学考察3.4.1 精密度试验精密吸取同一样品 5L,连续进样 5 次,按上述色谱条件测定峰面积,RSD1.43%,表明仪器性能良好。3.4.2 重复性试验取同一样品 5 份,按照供试品溶液的制备方法制备,分别进样 5L,测定芫花酯甲的峰面积并计算含量,平均含量为 0.0236%,RSD1.69%(n5),表明本方法重复性较好。3.4.3 稳定性试验精密吸取同一样品,
10、分别在样品制备后 0、2、4、8、16、24h 进样 5L,测定芫花酯甲的峰面积,RSD1.28%,表明样品溶液在 24h 内稳定。3.4.4 加样回收率试验精密称取样品 6 份,各约 2.5g,分别精密加入对照品 0.60mg,按“3.2.2”项下方法制备供试液,分别精密吸取 5L,测定芫花酯甲含量及加样回收率,结果平均回收率为 99.2%,RSD2.00%。见表 1。3.5 样品测定精密吸取按“3.2”项下方法制备的对照品溶液和供试品溶液各 5L,分别进样测定。含量测定结果见表 2,色谱图见图 1。表 2 芫花根样品含量测定结果（略）4 讨论薄层色谱显色条件的选择：本试验对比了偏钒酸铵-硫
11、酸溶液显色和薄层板用荧光板在 254nm 下检视为暗斑点两种显色方法。用荧光板点样量小,分离效果好,容易观察；同时发现用偏钒酸铵-硫酸显色,放置一段时间后,在自然光下芫花酯甲显蓝紫色斑点,效果比直接观察红棕色斑点好。供试品溶液制备方法的选择：参考文献2的方法,经试验确定,选择三氯甲烷超声 30min、溶剂用量为 50mL 的甲醇提取为最佳方法。检测波长的确定：采用光电二极管阵列检测器在 200400nm 对芫花酯甲色谱峰进行全波长扫描,发现在 238nm 处有最大吸收,因此,选择 238nm 为检测波长。4本试验测定了芫花根、根皮、木心、市售根饮片,发现市售根饮片经过浸泡、切制后,芫花酯甲的含量明显降低；在临床应用芫花根的时候可以去除体积较大的木心,直接应用根皮。本方法简便,准确性高,能够提高芫花根药材的质量标准,对于保证其临床药效具有参考价值。【参考文献】1应百川,王成瑞,周炳南,等.芫花根有效成分的研究J.化学学报,1975,35(1)：103107.2黄兰岚,李娆娆,原思通,等.不同产地芫花药材中芫花酯甲含量比较J.中成药,2008,30(10)：附 1012.
