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1、1紫草总酚酸辅助米非司酮对妊娠小鼠的抗早孕及对妊娠小鼠离体子宫肌条的收缩作用作者：王丽君，张鑫毅，廖矛川【摘要】目的观察紫草总酚酸辅助米非司酮对妊娠小鼠的抗早孕及对妊娠小鼠离体子宫肌条的收缩作用。方法对妊娠昆明种小鼠于妊娠第 68 天给药，共8 组，每组 10 只,观察妊娠抑制率；用放射免疫法测定血清中孕酮的水平。建立离体子宫平滑肌装置，研究紫草总酚酸对孕龄 510d 的受孕小鼠的离体子宫平滑肌的作用。结果用小鼠口服紫草总酚酸 1040mgkg-1 能够显著性的提高单用米非司酮（1.5mgkg-1）的妊娠抑制率（P0.05） 。紫草总酚酸有显著增强早孕小鼠离体子宫平滑肌条的收缩活性的作用（与给
2、药前比较 P0.01） 。结论紫草总酚酸辅助米非司酮对妊娠小鼠的抗早孕作用明显，其抗早孕作用不是通过降低孕酮水平来实现的。紫草总酚酸可显著增强早孕小鼠离体子宫平滑肌条的收缩活性。【关键词】紫草总酚酸；小鼠；抗早孕；子宫肌条Abstract:ObjectiveToobservetheeffectofphenolicacidsfromArnebiaeuchromaassistMifepristoneinanti-Earlypregnancyofmiceandtheeffectofthephenolicacidsoncontractileactivityofisolateuterinesmoothm
3、usclestripsingravidrats.MethodsThemicewithphenolicacidsduringthe6thto8thdays,andtherestainingrateofpregnancywasobserved.Atthesametime,theprogesteronelevelinbloodserumwasdeseruinedbyradioimmunoassay.Theequipmentofisolateuterinesmoothmusclewasusedtostudytheeffectofthephenolicacidsonisolateuterinesmoot
4、hmusclestripsingravidratsthathasbeenpregnancyfor510days.Results1040mg/kgphenolicacidscouldmarkedlyincreasetherestainingrateofpregnancy(P0.05).Thephenolicacidshadamarkedeffectoncontractileactivityofisolateuterinesmoothmusclestripsingravidrats.ConclusionTheeffectofthephenolicacidsassistMifepristoneina
5、nti-Earlypregnancyofmiceisclearwhichisnotrelevanttothedecreaseofprogesteronelevelphenolicacidshasamarkedeffectoncontractileactivityofisolateduterinesmoothmusclestripsingravidrats.Keywords:PhenolicacidsfromArnebiaeuchroma;Mice;Anti-earlypregnancy；Uterinesmoothmusclestrips2新疆紫草 Arnebiaeuchroma(Royle)J
6、ohnst.为常用中药，具有凉血、活血、解毒透疹的功能；用于血热毒盛、斑疹紫黑、麻疹不透、疮疡、湿疹、水火烫伤。在国家高技术研究发展计划（863 计划）资助下，张慧桢等1全面系统地进行了新疆紫草酚酸类化合物有效部位的化学成分、制备工艺、质量标准及辅助药物流产药理作用2的研究。本文报道紫草总酚酸辅助米非司酮对妊娠小鼠的抗早孕及对妊娠小鼠离体子宫肌条的收缩作用。1 材料与仪器1.1 药物米非司酮，由上海市华联制药有限公司提供，25mg/片（不包括辅料量） ，批号 20010510，用 1%的羧甲基纤维素钠制成混悬液备用。紫草总酚酸，棕褐色颗粒,酚酸含量 57%，由上海市计划生育科学研究所国家计划生
7、育药具重点实验室提供，批号 20011216，用蒸馏水溶解，配成 260mgml-1,4冰箱保存。低钙任-洛氏营养液，NaCl153.8mmolL-1(分析纯,上海建信化有限公司试剂厂,批号 20001114)，KCl5.77mmolL-1(化学纯,上海化学试剂总厂试剂一厂,批号20001213)，NaHCO35.95mmolL-1(化学纯,上海虹光化工厂,批号 20010213)，CaCl20.54mmolL-1(分析纯,金山县兴塔化工厂,批号 20010314)，葡萄糖16.7mmolL-1(分析纯,上海化学试剂分装厂,批号 20001019)。缩宫素：上海禾丰制药有限公司，10uml-1
8、)，用蒸馏水配制成 1u/ml 浓度。1.2 动物成年,未孕昆明种雌性小鼠(体质量为 2530g),由上海医科大学实验动物中心供应，清洁级，动物合格证：02-22-1。动物饲养于上海市计划生育科学研究所实验动物房，人工昼夜，室温（202），相对湿度 65%70%。1.3 仪器 OlympusCX41-32C02 光学显微镜,日本产品。501 型超级恒温器，上海市实验仪器厂产品。麦氏浴槽，型号 MYC，上海中胜科教设备有限公司产品。张力换能器，型号 XJZ-3，上海中胜科教设备有限公司产品。生物信号处理系统，型号 SMUP-PC，上海市嘉龙教仪厂产品。2 方法2.1 辅助米非司酮对妊娠小鼠的抗早
9、孕作用2.1.1 受孕选用体质量 2630g 处于动情期或动情前期的雌鼠与同种雄鼠按照雌雄 21 合笼交配,每天清晨 8：009：00 检查阴道有无阴栓,无阴栓的小鼠做阴道涂片，显微镜下观察有无精子，将查到阴栓者或显微镜下查到精子者作为妊娠第 1 天,雌、雄鼠 2 周交配不成功者剔除3 。取妊娠小鼠 80 只,随机分成7 个实验组和 1 个正常对照组，每组 10 只。2.1.2 分组与给药单用米非司酮组：妊娠第 6，7，8 日上午 9：0010：00灌胃给药 1.5mgkg-1 米非司酮；单用紫草总酚酸低、中、高剂量组：于妊娠第6，7，8 日上午 9：0010：00 分别灌胃给药紫草总酚酸26
10、0，520，1040mgkg-1；米非司酮+紫草总酚酸低、中、高剂量合用组：妊娠第 6，7，8 日上午 9：0010：00 灌胃 1.5mgkg-1 米非司酮，妊娠第 6，7，83日下午 15：0016：00 分别灌胃 260，520，1040mgkg-1 的紫草总酚酸；正常对照组灌胃同体积蒸馏水。2.1.3 一般观察各实验组均于妊娠第 12 天解剖，检查子宫内胚胎情况，剪取两侧子宫称重，计算死胎活胎数和各实验组的平均死胎数，统计给药组妊娠抑制率，与对照组比较有无统计学差异。2.1.4 指标检测各实验组的小鼠于妊娠第 12 天断头取血，按 RIA 法测定血清中孕酮的含量。2.1.5 统计检验采
11、用医学统计软件 PEMS3.1 进行统计处理，各项数值均用s 标准差表示，妊娠抑制率用卡方检验，子宫重量和孕酮含量采用 excel 进行t 检验。2.2 对妊娠小鼠离体子宫肌条的收缩作用2.2.1 预处理浴槽中放置洛氏液 22ml，水温控制在(370.5)，记录仪灵敏度调至 1g。受孕 510d 左右雌性小鼠在实验前两天，用雌二醇 20g/10g，腹腔注射，每隔 24h 注射 1 次。实验当天，将小鼠颈椎脱臼处死，割腹取出子宫立即置于盛有低钙任-洛氏液的玻璃平皿中,轻柔剥离附着于子宫壁上的结缔组织和脂肪组织,将一侧子宫角的两端分别用线结扎，两线间距 0.81.0cm,置于浴槽内（20ml）,子
12、宫角标本一端和通气钩相连，另一端与张力换能器接入端上钩子相连，静息张力调至 1.0g。2.2.2 正常子宫肌张力检测标本在浴槽内低钙任-洛氏营养液中稳定 35min,同时通以 95%O2+5%CO2 混合气体,工作温度 3032,其间每隔 15min 更换低钙任-洛氏营养液 1 次，后 1 次更换液后 5min,记录正常的子宫肌张力。2.2.3 加缩宫素子宫肌张力检测将 1u/ml 缩宫素 0.1ml 加入浴槽（此时药物浓度为 510-3u/ml）,观察及记录平滑肌张力的变化，记录到最大值时，稳定 5min 后，用低钙任-洛氏营养液洗涤次，让子宫肌条重新稳定到加药前的基线。2.2.4 加紫草总
13、酚酸子宫肌张力检测按“2.2.3”操作，药物的浓度均为50mg/ml，给药量为 0.1ml，加药后观察的时间为 5min，观察并记录结果，总共做个样本。2.2.5 检测指标收缩强度（mm）:5min 内各次收缩最高点均值；收缩频率：5min 内收缩次数；收缩活性：5min 内收缩强度与收缩频率的乘积。2.2.6 统计检验采用医学统计软件 PEMS3.1 进行统计处理，各项数值均用s 表示,统计分析用配对计量资料检验和 t 检验，显著性水平取 P=0.05 和0.01。3 结果43.1 紫草总酚酸辅助米非司酮对妊娠小鼠的抗早孕作用3.1.1 肉眼观察对照组小鼠妊娠子宫直径粗，淡红色，呈结节状，表
14、面光滑而有光泽，胚胎发育良好，呈密集串珠状。米非司酮组小鼠出现不完全流产，子宫直径比对照组细，呈暗红色，有淤血现象。单纯紫草总酚酸低剂量组小鼠的子宫类似对照组的子宫，但直径较细，结节状，部分胚胎出现淤血，其余胚胎发育良好；单纯紫草总酚酸中剂量组和高剂量组小鼠的子宫出现不完全流产，子宫直径较对照组细，呈暗红色，个别子宫甚至出现完全流产，胚胎有坏死淤血现象。米非司酮+紫草总酚酸低剂量组的小鼠大部分出现完全流产，其子宫直径与对照组相比较明显减小，暗红色，结节不明显，表面光泽差，胚胎无或发育差，有淤血坏死现象。米非司酮+紫草总酚酸中剂量组的小鼠大部分完全流产，无结节状膨大，子宫血管增生，呈灰红色。米非
15、司酮+紫草总酚酸高剂量组小鼠全部出现完全流产，子宫直径细，无结节状膨大，无胚胎，呈灰白色。3.1.2 病理组织学检查正常对照组胚胎发育正常，单用中药组胚胎基本发育正常；米非司酮组胚胎细胞形态结构有轻微紊乱和萎缩，底蜕膜表面出血，部分细胞有异形，蜕膜出血；合用药组囊胚内细胞团部分细胞空泡变，表面有出血坏死，可见少量异形细胞。3.1.3 各实验组的妊娠抑制率和平均死胎数和对照组相比较米非司酮组的妊娠抑制率与对照组相比较有显著性差异(P0.05);米非司酮+紫草总酚酸低、中、高剂量组的妊娠抑制率与对照组相比较均有非常显著性差异(P0.01)。米非司酮+紫草总酚酸高剂量组的妊娠抑制率与米非司酮组相比较也有显著性差异(P0.05)。紫草总酚酸单用组即可使得部分胚胎死亡，紫草总酚酸与米非司酮合用时则能使得平均死胎数增加，平均死胎数增加的程度随着紫草总酚酸剂量的增加而增加。3.1.4 各实验组的子宫重量的变化与对照组相比较米非司酮组、紫草总酚酸中剂量组和高剂量组的子宫重量均显著性减轻(P0.05),而紫草总酚酸低剂量组子宫重量与对照组相比较没有显著
