《western blotting技术手册以及常见错误》由会员分享，可在线阅读，更多相关《western blotting技术手册以及常见错误（64页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、G r a s p t h e P r o t e o m e WesternBlotting Handbook and Troubleshooting Guide Featuring the SuperSignalWestFamily of Products Table of Contents Introduction. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 Western Blotting Overview . . . . . . .
2、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2-3 Transfer Protein to a Membrane. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4 Transfer Buffers. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4 Nitrocellulose Membrane . . .
3、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4 Polyvinylidene Difluoride Membrane . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4 Filter Paper for Blotting . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4 MemCode Protein Stains . . . . . . .
4、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5 Molecular Weight Markers . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6-7 Miser Antibody Extender NC. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8 Increasing Sensitivity of a Western Blot . . . . .
5、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9 Qentix Western Blot Signal Enhancer . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9 Blocking Nonspecific Binding Sites. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10 Transfer Membranes. . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
6、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10 Blocking Buffer Optimization . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11 Blocking Buffers . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 12-13 Washing the Membrane. . . . . . . . . . . . . . . . .
7、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 14 Wash Buffers. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 14 Primary and Secondary Antibodies . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 15 Conjugate Stabilizer Solutions. . . . . . . . .
8、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 16 DyLight Fluor Antibody and Streptavidin Conjugates . . . . . . . . . . . . . . . 17 Affinity-Purified Secondary Antibodies . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 18-21 Labeling Your Own Antibodies . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
9、 . . . . . . . . . . 22-25 ImmunoPureEnzymes. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 23 EZ-Link Activated Enzymes. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24-25 EZ-Label Fluorescent Labeling Kits . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
10、 . 26 DyLight Reactive Fluors. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 27 Optimizing Antibody Concentration. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 28-29 Chromogenic Substrates . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 30
11、-31 Chemiluminescent Substrates . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 32-39 Pierce ECL Substrate . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 33 SuperSignalChemiluminescent Substrates. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 34-38 LumiPhos Che
12、miluminescent Substrate . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 39 Quick Reference Substrate Guide. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 39 Data Imaging . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 40 CL-XPosure Film. . .
13、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 40 Western Blot Detection Kits. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 41-42 Far-Western Blotting. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 43-44 ProFound Far W
14、estern Protein:Protein Interaction Kits. . . . . . . . . . . . . . 45 In-Gel Western Detection . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 45-47 UnBlotIn-Gel Chemiluminescent Detection Kit. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 47 Optimizing the Signal-to-Noise Ratio . .
15、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 48 Restore Western Blot Stripping Buffer . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 50 Erase-ItBackground Eliminator . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 51-52 Troubleshooting Guide Blotting with Chemiluminescence . .
16、. . . . . . . . . . . 53-57 Western Blotting Protocol Using Chemiluminescent Substrates . . . . . . . . . . 58-59 Recommended Reading. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 60 Introduction 1 Tel: 800-874-3723 or 815-968-0747 The term “blotting” refers to the transfer of biological samples from a gel to a membrane and their subsequent detection on the surface of the membrane. Western blotting (also called immunobl
