《牛奶中酪蛋白和乳糖分离及检测方法讲义》由会员分享,可在线阅读,更多相关《牛奶中酪蛋白和乳糖分离及检测方法讲义(11页珍藏版)》请在金锄头文库上搜索。
1、牛奶中酪蛋白和乳糖 的分离及检测,5学时,一、前言,牛奶是营养最完备的食品之一,这一点己为许多人认识并接受。尤其是在婴儿及青少年时期,每大一定量的牛奶能促进身体健康成长。牛奶的主要成分是水、蛋白质、脂肪、糖和矿物质,这些都是人体发育所必不可少的物质。,牛奶是一种均匀稳定的悬浮状和乳浊状的胶体性液体,牛奶主要由水、脂肪、蛋白质、乳糖和盐组成。酪蛋白是牛奶中的主要蛋白质,是含磷蛋白质的复杂混合物。蛋白质是两性化合物,当调节牛奶的pH值达到酪蛋白的等电点(pH=4.8)时,蛋白质所带正、负电荷相等,呈电中性,此时酪蛋白的溶解度最小,会从牛奶中沉淀出来,以此分离酪蛋白。因酪蛋白不溶于乙醇和乙醚,可用此
2、两种溶剂除去酪蛋白中的脂肪,牛奶中酪蛋白的含量约为3.4%。,牛奶中的糖主要是乳糖。乳糖是一种二糖,它是唯一由哺乳动物合成的糖,它是在乳腺中被合成的。乳糖是成长中的婴儿建立其发育中的脑干和神经组织所需的物质。乳糖也是不溶于乙醇的,所以当乙醇混入水溶液中时乳糖会结晶出来,从而达到分离的目的。,乳糖是由D-半乳糖分子C,上的半缩醛羟基和D-葡萄糖分子C4上的醇羟基脱水通过-1,4苷键连接而成。乳糖是还原性糖,绝大部分以-乳糖和-乳糖两种同分异构体形态存在,-乳糖的比旋光D20=+860, -乳糖的比旋光D20=+350,水溶液中两种乳糖可互相转变,因此水溶液有变旋光现象。牛奶中乳糖的含量约为4-6
3、%。乳糖的溶解度20时为16.1%。,二、实验部分, 牛奶中酪蛋白的分离 牛奶中乳糖的分离, 牛奶中酪蛋白的分离,取100mL新鲜伊利牛奶,在恒温水浴中加热至40,边搅拌边慢慢加入10%醋酸溶液,用pH计测量其pH值,使其在4.8左右,放置冷却、澄清后,抽滤。但由于抽滤速度过慢,故先拿出离心,收集离心之后的固体部分和液体部分,分别再抽滤(在滤液中加入少量粉状碳酸钙,留作乳糖的分离),此时过滤速度加快。依次用乙醇、乙醇和乙醚的等体积混合液、乙醚洗涤酪蛋白,去除脂肪,待酪蛋白充分干燥后称量其重量., 牛奶中乳糖的分离,将1. 中加入碳酸钙的滤液置于蒸发皿中,用蒸气浴浓缩至约15mL,稍冷后,在溶液
4、中加入约90mL95%乙醇,再加热,使其混合均匀,趁热过滤,滤液不是特别澄清。将滤液移至锥形瓶中,加塞,放置1-2天,让乳糖充分结晶,过滤分离出乳糖晶体。用冷的95%乙醇洗涤结晶,干燥后称重。, 酪蛋白的鉴定,将少量酪蛋白溶解于水中,在碱性溶液中与硫酸铜作用,溶液呈现紫色。 在试管中加入蛋白质溶液约2mL,浓硝酸0.5mL,振荡,加热煮沸,溶液和沉淀都变为黄色。冷却后加入过量氨水或20%NaOH溶液,黄色变成棕色。再酸化,又变黄。 这两个实验都说明我们制得的是酪蛋白。, 乳糖的测定,糖脎 取自制乳糖溶于少量水中,浓度约为5%,在试管中加入1ml乳糖溶液,1ml苯肼试剂,摇匀,试管口用棉花塞住,
5、在沸水浴中加热,并不时振摇,加热1015分钟后,取出放置冷却,乳糖脎成结晶析出。取少量乳糖脎在显微镜下观察其结晶形态,可证实为乳糖。 苯阱试剂有毒,小心使用,勿触及皮肤,如触及皮肤先用稀醋酸洗,再用水洗。,参考文献:,1B.Y.KIM等,温度和PH值对酪蛋白凝聚的影响,中国乳品工业,第22卷第3期,1994年6月 2陈忠平,牛奶中酪蛋白和乳糖的分离,安徽技术师范学院学报,2001,15(4):5859 3张才骏,张海峰,邓生栋,才仁三德布,青海牛乳中s1-酪蛋白的电泳研究,青海畜牧兽医杂志,30卷2期,2000 4程涛,孙艳波,李健,双缩脲法测定乳中酪蛋白含量,中国乳品工业,第28卷第3期,2000年6月 5张宗岩,乳糖的物理特性,中国乳品工业,第22卷第1期,1994年2月 6童殿荣,旋光仪测定新鲜牛乳中乳糖,