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1、6.7 杂质检查,酸度 生育酚 正己烷,6.7 含量测定,GC法 HPLC法 （详见教材P253）,6.8 抗生素类药物的分析,-内酰胺类抗生素,2,氨基糖苷类抗生素,3,四环类抗生素,4,大环内酯类抗生素,5,概述,1,6.8.1 概述,抗生素是指在低微浓度下可对微生物的生命活动有特异抑制作用的化学物质”。它主要是由微生物发酵、化学纯化和化学修饰等过程而得到的化合物。 分类：-内酰胺类抗生素、氨基糖苷类抗生素、氨基糖苷类抗生素、四环类抗生素、大环内酯类抗生素。,6.8.2 -内酰胺类抗生素,化学结构与性质 鉴别反应 特殊杂质的检查 含量测定,6.8.2.1 化学结构与性质,6.8.2-内酰胺
2、类抗生素分为青霉素和头孢菌素两大类，其分子结构如下所示,6.8.2.1 化学结构与性质,6.8.2.1 化学结构与性质,6.8.2.2 鉴别反应,呈色反应：羟肟酸铁反应、类肽键反应、其他显色反应。 各种盐的反应：焰色反应、重氮化-偶合反应 光谱法：红外光谱、紫外吸收光谱 色谱法： HPLC 和TLC可被用来鉴别 -内酰胺类药物,6.8.2.3 特殊杂质的检查,聚合物 有关物质和异构体 其他高分子杂质 残留溶剂 溶液的澄清度与颜色,6.8.2.4 含量测定,HPLC法：中大多数青霉素和头孢菌素药物的含量测定采用HPLC法。 碘量法：青霉素或头孢菌素不会与碘发生反应,但其碱性水解产物青霉噻唑酸可与
3、碘反应,利用此性质用剩余碘量法对本类药物进行测定 紫外-可见分光光度法：青霉素的降解产物青霉稀酸具有紫外吸收的性质,但稳定性不好,可加入Cu2+或Hg2+使之形成稳定的配合物,6.8.3 氨基糖苷类抗生素,化学结构与性质 鉴别试验 特殊杂质检查及组分分析 含量测定,6.8.3.1 化学结构与性质,水溶性及碱性 旋光性 稳定性 紫外吸收特性,6.8.3.2 鉴别试验,茚三酮反应 Molish反应： N-甲基葡萄糖胺的反应 坂口反应 麦芽酚反应： 光谱法 色谱法,6.8.3.3 特殊杂质检查及组分分,TLC法：硫酸新霉素中新霉胺的检查 HPLC法：硫酸庆大霉素C组分测定，硫酸小诺霉素的组分测定、硫
4、酸卡那霉素中卡那霉素B的测定.,6.8.3.4 含量测定,硫酸盐反应：本类药物的硫酸盐的水溶液显硫酸盐反应，见Ch.P2005附录。 HTPC法：硫酸依替米星、硫酸卡那霉素等采用此法进行测定,因为被测药物本身没有紫外吸收,因此HPLC法不能采用紫外检测器,而是用蒸发光散射检测器。 微生物效价测定法：用微生物法进行测定的抗生素有硫酸链霉素、硫酸新霉素、硫酸核糖霉素、硫酸奈替米星、硫酸阿米卡星、硫酸庆大霉素、硫酸巴龙霉素等,具体方法参照见Ch.P2005附录 A,6.8.4 四环类抗生素,化学结构及性质 鉴别试验 杂质检查 含量测定,6.8.4.1 化学结构及性质,例如金霉素的脱水反应如下所示:
5、异四环素的形成原理见图6-68,6.8.4.2 鉴别试验,薄层色谱法 显色法 UC显色法 HPLC法 氯化物法,6.8.4.3 杂质检查,四环素类抗生素一般要检查酸度、吸光度和有关物质。有的还须检查残留溶剂,如盐酸多西环素中乙醇的检查采用GC法Ch.P2005规定的限量要求为4.3%-6.0% 酸度 杂质的吸光度 有关物质,6.8.4.4 含量测定,四环素类药物的含量测定,目前多国药典采用HPLC。 差向金霉素与四环素、四环素与金霉素峰间的分离度应符合规定,出峰顺序依次为差向金霉素、盐酸四环素、盐酸金霉素。,6.8.5 大环内酯类抗生素,大环内酯类抗生素的抗菌活性较强，毒性低，其中十六元大环的
6、抗菌活性最强（如吉他霉素）。红霉素最早应用于临床，其他应用于临床的还有螺旋霉素，吉他霉素、麦迪霉素、竹桃霉素、卡波霉素等。它们均是以一个大环内酯为母体，通过羟基，以苷键和1-3分子的糖相连接的一类抗生素。红霉素是这类药物中的典型代表。,6.8.5.1 红霉素的结构及性质,红霉素是由红霉内酯与去氧氨基己糖和红霉糖缩合而成的碱性苷，能与无机或有机酸形成盐，在水中溶解度较大。本品为白色或类白色的结晶或粉末；无臭，味苦；微有引湿性,6.8.5.2 本类药物的鉴别,(1) HPLC法 示例6-29 吉他霉素的鉴别(见教材P264) (2)IR法 (3)显色反应 (4)TLC法,6.8.5.3 本类药物的
7、组分检查,本类药物一般由微生物发酵制得，因此含有多种异构体或同系物组分。例如红霉素中红霉素活性最强，其他组分都比A小，因此药典规定应检查A、B、C组分；而吉他霉素中含有13个组分，组分检测采用HPLC法；罗红霉素中的有关物质检查、麦白霉素中麦迪霉素A1的检查等采用HPLC法；阿奇霉素中有关物质检查、依托红霉素中游离红霉素的检查等采用TPC法,6.8.5.4 含量测定,(1)微生物检定法: 对本类抗生素如红霉素、吉他霉素、阿奇霉素、 依托红霉素、麦白霉素、琥乙红霉素等的含 测定均采用抗生素微生物检定法 (2) HPLC法:罗红霉素的含量测定采用HPLC法,6.9 甾体激素类药物的分析,甾体激素药
8、物的鉴别,2,杂质检查,3,含量测定,4,甾体激素类药物的基本结构,1,6.9.1 甾体激素类药物的基本结构,6.9.2 甾体激素药物的鉴别,本类药物的甾体母核和官能团有典型的化学反应，可以用于鉴别。另外，药物的熔点、比旋度、吸收系数等物理常数，也可用于区别不同的药物。 物理常数的测定 化学鉴别法 HTPC法 TLC法 IR法,6.9.2.1 物理常数的测定,熔点:熔点是药物重要的物理常数，用以对原料药进行鉴别。 比旋度:比旋度为旋光药物的物理常数，测定比旋度可以鉴别不同的药物，也可检查药物的纯杂程度。 分光光度法及吸收系数:本类药物具有特征紫外吸收，为药物的重要理化常数之一，利用最大吸收波长
9、和吸收系数可以对药物进行鉴别。,6.9.2.2 化学鉴别法,与强酸的反应 -醇酮基的呈色反应 甲酮基反应 酮基反应 酚羟基反应 炔基反应 卤素反应,6.9.2.3 HTPC法,高效液相色谱法分离效能高，不仅可用于药物的含量测定，在药物的鉴别及杂质检查方面也发挥着重要作用。中国药典对大多数甾体药物及其制剂均采用了HTPC法进行鉴别，例如甲睾酮、丙酸睾酮、炔雌醇、炔诺孕酮、曲安奈德、苯丙酸诺龙、醋酸可的松、醋酸甲地孕酮、醋酸甲羟孕酮、醋酸泼尼松、醋酸泼尼松龙、氟轻松等均采用了HTPC法鉴别。 鉴别方法：在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间与对照品溶液主峰的保留时间一致。,6.9.
10、2.4 TLC法,薄层色谱法使用简便、成本低廉、分离效果较好，用于多种药物的鉴别反应。在甾体类药物的鉴别中，药典对苯丙酸诺龙的鉴别采用了TLC法，对多种药物的制剂如炔诺孕酮炔雌醚片、丙酸睾酮注射液、倍他米松磷酸钠、醋酸氯地孕酮、醋酸甲羟孕酮片、醋酸泼尼松片、苯丙酸诺龙注射液、复方炔诺酮片、复方炔诺孕酮片及滴丸、哈西奈德软膏、苯甲酸雌二醇注射液等的鉴别采用此法。,6.9.2.5 IR法,甾体激素类药物的结构比较相近，化学鉴别法和紫外分光光度法的特异性较IR法差， IR法的特征性强，按规定录制的供试品的红外吸收光谱图与对照的光谱图比较，应一致。中国药典及国外的药典对大多数的甾体激素类药物采用了IR
11、法鉴别。,6.9.3杂质检查,有关物质 卤素 硒元素 乙炔基 游离磷酸盐 残留溶剂,6.9.3.1 有关物质,吸光度法 高效液相色谱法 （ 示例6-30 HPTC法检查醋酸甲羟孕酮中有关物质 见教材P269） 3.薄层色谱法,6.9.3.2 卤素,一些皮质激素药物如地塞米松、氟轻松、曲安奈德、曲安西龙、哈西奈德等药物分子中含有氟元素，药典规定了氟含量检查。例如曲安奈德中氟、哈西奈德的检查。,6.9.3.3 硒元素,一些皮质激素药物如地塞米松、氟轻松、曲安奈德等在生产中，需使用二氧化硒脱氢，在药物中可能引入杂质硒，因此进行硒检查。检查方法按照中国药典 进行。例如曲安奈德中硒的限量为0.0050%
12、,6.9.3.4 乙炔基,炔诺酮、炔诺孕酮、炔雌醇、炔雌醚等药物中含有乙炔基，药典规定对炔诺孕酮进行乙炔基的检查。,6.9.3.5 游离磷酸盐,地塞米松磷酸钠、倍他米松磷酸钠等药物在生产和贮存过程中，可能引入磷酸盐，因此需检查其中的游离磷酸盐。,6.9.3.6 残留溶剂,药典规定对地塞米松磷酸钠进行残留甲醇及丙酮的检查，方法如下：取本品约0.15g，精密称定，置10ml量瓶中，精密加0.1。正丙醇溶液2ml，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取甲醇约7.9mg与丙酮约79mg，精密称定，置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，精密量取5ml，置10ml量瓶中，精密加内标溶液2ml，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。取供试品溶液与对照品溶液，照残留溶测定法，用高分子多孔小球色谱柱，应符合规定。,6.9.4 含量测定,HPTC法： 示例6-31醋酸甲羟孕酮的含量测定 见教材P271 分光光度法： 示例6-32炔孕酮的含量测定 见教材P271 示例6-33炔雌醚的含量测定 见教材P271 非水溶液滴定法 提取重量法,
