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1、一、正相色谱：固定相极性大于流动相极性反相色谱：固定相极性小于流动相极性，洗脱顺序取决于溶质分子的疏水性，疏水性强的保留时间长！在正相色谱体系中组分的出峰次序为：极性弱的组分，在流动相中溶解度较大，因此k值小，先出峰。极性强的组分，在固定相中的溶解度较大，因此k值大，后出峰。在反相色谱中组分的出峰次序为：极性弱的组分在固定相上的溶解度大，k值大，后出峰，相反极性强的组分在流动相中溶解度大，k值小，所以先出峰。流动相的比例，是有根据的。主要看你流动相的组成成分，一般来说，如果要分离的成分出峰时间较快，那么流动相中有机相就相对要少！总之只要能使样品 峰的分离度（大于1.5）、理论塔板数(根据实际情
2、况而定)、峰拖尾因子(0.951.05之间)达到要求的比例就行。 建议朋友有问题，可到分析测试百科网去提问，基本上问题都能得到解答，百度上搜下就有。流动相用0.45m微孔滤膜过滤后超声脱气15min，标准品是纯溶液的话不需要过滤，待测样品为生物样品是需要经过处理的（沉淀蛋白，萃取，高速离心），离心之后取上清液直接进样，不能过滤HPLC 的流动相的选择要看你使用的色谱柱固定相的种类，如果用C18等非极性键合相的色谱柱，流动相需要选定极性的例如 甲醇、乙腈、水等；如果选用的硅胶或者二醇基等极性键合相的色谱柱，则需要选择非极性的流动相，例如正己烷、正庚烷等等；8 流动相为什么要预先脱气?常用的脱气方
3、法有哪几种?解 流动相中溶解气体存在以下几个方面的害处，气泡进入检测器，引起光吸收成电信号的变化，基线突然跳动，干扰检测;溶解在溶剂中的气体进入色谱柱时，可能与流动相或固定相发生化学反应;溶解气体还会引起某些样品的氧化降解.对分离和分析结果带来误差。因此，使用前必须进行脱气处理。常用的脱气法有以下几种：(1)加热脱气法;(2)抽吸脱气法;(3)吹氦脱气法;(4)超声波振荡脱气法。9 按固定相孔径大小分类，液相色谱固定相有哪几类?各有什么特性及适用范围?解 从固定相的孔隙深度考虑，液相色谱固定相分为表面多孔型(薄壳型)和全多孔型(全孔型)两类。表面多孔型固定相多孔层厚度小.孔浅，相对死体积小，出
4、峰迅速，柱效高，颗粒较大，渗透性好，由于孔浅，梯度淋洗时，当流动相成分改变后.孔内外流动相成分能迅速达到平衡，机械强度高，装柱容易，其不足的是由于多孔层厚度小，因而柱容量小，最大允许样品量受到限制，适用于比较简单的样品分析及快速分析。全多孔型固定相，由于颗粒很细，孔仍然很浅.传质速度较快，柱效高。梯度淋洗时孔内外流动相成分的平衡速度仍然较快.其最大特点是柱容量大，最大允许样品量是表面多孔型的5倍，但装填的什于渗透性低，因而需要更高的操作压力.制柱比表面多孔型的难。这种固定相特别有利于痕量组分及多组分复杂混合物的分离分析。10 什么叫化学键合色谱? 与液液色谱相比有何优点?解 通过化学反应，将固
5、定液键合到载体表面，此种固定相称为化学键合固定相;采用化学键合固定相的色谱法，称为化学键合色谱。与液液分配色谱相比，键合色谱法的主要优点：(1)化学键合固定相非常稳定，在使用过程中不流失。(2)适宜用梯度淋洗。(3)适合于k范围很宽的样品。(4)由于键合到载体表面官能团，既可是非极性的，也可是极性的，因此应用面广。11 (选择题)在液相色谱中，常用作固定相合相基体的物质是A.分子筛 B.硅胶 c氧化铝 D.活性炭解 B.硅胶。要形成化学键合固定相，所用的基质材料应有某种化学反应活性，在四种固体固定相中只有硅胶合有硅醇基，是能进行键合的活性官能团。12 高效液相色谱柱有哪几种类型? 细径柱有什么
6、优点?解 高效液相色谱拄大致可分为三种类型：内径小于2mm的称为细管径或微管径柱;内径在25mm范围内的是常规高效液相色谱柱;内径大于5mm的一般称为半制备柱或制备柱。细管径柱的主要优点是：(1)分离效能高。(2)流动相最佳流速低，消耗量少。(3)可采用多种检测器，便于联用(CLC MS，CLC-FTIR)。(4)采用细而短的毛细管柱可以提高分析速度，实现快速分析。13 什么叫反相色谱?试从固定相、流动相、流出次序、流动相极性的影响等几个方面比较正相和反相的区别。解 流动相的极性比固定相的极性强的色谱体系叫反相色谱。例如以十八烷基硅胶键合相(ODS)为固定相，以甲酵/水作流动相，是典型的反相色
7、谱。正相色谱和反相色谱这两种操作模式的主要区别见下表：14 对液相色谱流动相有何要求?解 用作液相色谱流动相的溶剂，其纯度和化学特性必须满足色谱过程中稳定性和重复性的要求。对样品要有一定的溶解能力，粘度小，化学稳定性好，避免发生不可逆的化学吸附。溶剂应与检测器相匹配，不干涉所使用检测器的工作，制备色谱的溶剂应不干扰对分离各组分的回收。除此以外，选择的溶剂对所给定的样品组分具有合适的极性和良好的选择性。18 什么是溶剂极性参数与溶剂强度? 它们之间的关系如何?解 溶剂分子与溶质分子以色散力、偶极作用力、氢键作用力及介电作用力四种方式进行相互作用的能力称为分子的“极性”，溶剂的这种能力以溶剂极性参
8、数P表示，P值越大，溶剂的极性越强。溶剂强度指用作流动相的溶剂，将组分从色谱柱上洗脱下来的能力。溶剂强度直接与溶剂的极性有关，而且随不同色谱体系而变，在正相色谱体系中，溶剂极性增加，使组分从柱上洗脱下来的能力增加，即P越大的溶剂，溶剂强度越大。在反相色谱中，溶剂极性减小，使组分从柱上洗脱下来的能力增加，即P越小的溶剂，溶剂强度越大。19 预测在正相色谱与反相色谱体系中，组分的出峰次序。解 在正相色谱体系中组分的出峰次序为：极性弱的组分，在流动相中溶解度较大，因此k值小，先出峰。极性强的组分，在固定相中的溶解度较大，因此k值大，后出峰。在反相色谱中组分的出峰次序为：极性弱的组分在固定相上的溶解度
9、大，k值大，后出峰，相反极性强的组分在流动相中溶解度大，k值小，所以先出峰。25 某人用凝胶色谱分离一高聚物样品，分离情况很差，他改变流动相的组成后，分离情况大为改进，这种说法对吗? 为什么?解 这种说法不对。在凝胶色谱中流动相只起运载的作用，不能依靠改变流动相的性质和组成来改善色谱体系的选择性。凝胶色谱的选择性只能通过选择合适的固定相，根据固定相孔隙的大小以及孔径分布范围的最佳化来实现。题目中“改变流动相组成后，分离情况大为改进”是不可能的。26 (选择题)液相色谱中通用型检测器是A.紫外吸收检测器 B.示差折光检测器 C热导池检测器 D.荧光检测器解 B.示差折光检测器。A、D为选择性检测
10、器，C为气相色谱中通用检测器。27 为了测定邻氨基苯酚中微量杂质苯氨，现有下列固定相：硅胶、ODS键合相，下列流动相：水甲醇、异丙醚己烷，应选用哪种固定相、流动相? 为什么?解 邻氨基苯酚中微量杂质苯氨测定，为了良好分离，应让苯氨先出峰，由于苯氨的极性小于邻氨基苯酚，因此应采用正相色谱法，应选硅胶为固定相，异丙醚己烷为流动相。28 在ODS键合固定相，甲醇水为流动相时试判断四种苯并二氮杂苯的出峰顺序。为什么?解 色谱条件为反相键合色谱体系，在反相色谱体系中极性大的组分k小，首先出峰，按四种苯并二氮杂苯的结构，出蜂顺序为4321。29 用多孔凝胶为固定相，流动相为四氢呋喃，分离以下各组分，试判断
11、各组分的出蜂顺序。为什么?解 凝胶色谱组分的出峰次序是根据分子尺寸大小，大的先出峰.故出峰次数为n=9、8、7。30 分离含胺类和季铵接的样品，以0.2M HClO4溶液为固定相，以丁醇二氯甲烷己烷为流动相，已知组分A的保留时间为8.2min，死时间为1.0min.在另一根柱上.其他条件均不改变，只将HClO4的浓度增加一倍，间组分A在第二根柱上的移动速率，是在第一根柱上的几倍?解 从题意分析知，该题分离类型是正相离子对色谱，因此K与KBP的关系为：A在第二根柱上的移动速率是第一根柱的1.78倍。31. 在液相色谱中，常用作固定相，又可用作键合相的物质有什么特点?下列物质中哪种符合?分子筛、硅胶、氧化铝、活性炭。32. 高效液相色谱柱有哪几种类型?细口径柱有什么优点?
