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1、附件6磺胺氯吡嗪残留检测方法标准（试行）鸡可食性组织中磺胺氯吡嗪残留量的测定高效液相色谱法（试行）1. 范围本方法规定了鸡可食组织中磺胺氯吡嗪残留量检测的制样和高效液相色谱测定方法。本方法适用于鸡的肌肉、肝脏、肾脏和脂肪中磺胺氯吡嗪残留量的检测。2. 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。3. 方法原理试样中磺胺氯吡嗪
2、残留物用乙腈提取酸化后，经混合型阳离子交换反相吸附固相萃取小柱净化，氮气吹干，流动相溶解，用高效液相色谱法测定，外标法定量。4. 试剂和材料以下所用的试剂，除特别注明者外均为分析纯试剂；水为符合GB/T 6682规定的一级水。4.1 磺胺氯吡嗪钠对照品：纯度99.0。4.2 甲醇：色谱纯。4.3 乙腈：色谱纯。4.4 氨水。4.5 盐酸。4.6 磷酸二氢钾。4.7 5 %氨化乙腈：准确吸取氨水5 mL，置于100 mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀即得。4.8 0.1 mol/L盐酸水溶液：准确吸取37 %浓盐酸829 L，置于100 mL容量瓶中，用水稀释并定容至刻度，摇匀即得。4.9 0
3、.02 mol/L磷酸二氢钾水溶液：准确称取磷酸二氢钾2.7218 g，置于1000 mL容量瓶中，用水稀释并定容至刻度，摇匀即得。4.10 复溶液：将乙腈和0.1 mol/L盐酸水溶液按5050（V/V）比例混匀，现配现用。4.11 流动相：将乙腈和0.02 mol/L磷酸二氢钾水溶液按3565（V/V）比例混匀，经0.22 m有机滤膜过滤，超声脱气20 min。现配现用。4.12 磺胺氯吡嗪标准储备液（1 mg/mL）：准确称取磺胺氯吡嗪钠对照品25 mg，置于25 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定溶至刻度，摇匀即得。置-20 条件下储存，有效期3个月。4.13 磺胺氯吡嗪标准工作液：准确吸取
4、适量磺胺氯吡嗪标准储备液，用流动相稀释成系列标准工作液。现用现配。4.14 有机针式滤器（0.22 m）。4.15 MCX 固相萃取小柱，3 mL（60 mg），或相当者。5. 仪器和设备5.1 高效液相色谱仪。5.2 涡旋振荡器。5.3 冷冻离心机。5.4 氮吹仪。5.5 天平，感量 0.01 g。5.6 分析天平，感量 0.000 01 g。6. 样品的制备与保存6.1 试料的制备取适量新鲜或冷冻空白或供试组织，绞碎，并使均质。取新鲜或解冻的供试样品组织，作为供试试样。取新鲜或解冻的空白样品组织，作为空白试样。取新鲜或解冻的空白样品组织，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试样。6.2
5、试料的保存 -20 以下保存。7. 测定步骤7.1 提取准确称取空白试样（2.0 0.01）g，置于50 mL离心管中，加入3 g无水硫酸钠后，再加入5 %氨化乙腈9 mL；涡旋振荡3 min，超声10 min后；离心15 min（4 ,12000 r/min），将上清液移至50 mL离心管中。残渣用上述相同方法重复提取一次，合并上清液。于上清液中加入5 mL乙腈饱和的正己烷，涡旋振荡2 min，离心10 min（4 ,12000 r/min），弃去正己烷，保留下层液体备用。取除脂后液体于40 水浴氮气吹至近干，用1 mL复溶液溶解残渣，涡旋振荡1 min；加0.1 mol/L盐酸水溶液3 m
6、L，涡旋振荡1 min，离心10 min（4 ,12000 r/min），取上清液备用，记为A液。残渣加0.1 mol/L盐酸水溶液3 mL涮洗离心管，涡旋振荡30 s，记为B液。7.2 净化MCX（60 mg/3 mL）小柱依次用甲醇3.0 mL活化，水3.0 mL平衡，将浓缩后上清液A液全部过柱；依次用7.1项下B液3.0 mL，甲醇1.0 mL淋洗；用5 %氨化乙腈6 mL洗脱，收集洗脱液于10 mL离心管，40 水浴条件下氮气吹干，用1 mL流动相溶解已吹干的残渣，经0.22 m有机滤膜过滤，滤液供HPLC测定。7.3 标准曲线的制备准确量取磺胺氯吡嗪标准储备液适量，用流动相稀释，依次
7、制备浓度为40、80、200、400、800、1600 ng/mL的磺胺氯吡嗪系列标准溶液。进行HPLC分析。采用外标法进行计算，以磺胺氯吡嗪的浓度为横坐标，以磺胺氯吡嗪的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，并求出回归方程和相关系数。7.4 测定7.4.1 液相色谱条件色谱柱：Kromasil C18柱（250 4.6 mm，5 m）；或相当者；流动相：乙腈-0.02 mol/L磷酸二氢钾水溶液（3565，V/V）；流速：1.0 mL/min；柱温：35 ；进样量：20 L；紫外检测波长：=272 nm。7.4.2 测定法按7.3项下方法制备标准曲线，计算线性方程及相关系数，按外标法计算。试样溶液中
8、磺胺氯吡嗪的峰面积应在仪器检测的线性范围之内。7.4.3 空白试验采用与样品完全相同的测定步骤进行平行操作。8. 结果计算单点校准：或标准曲线校准：由，求得 和 ，则按下式计算试样中磺胺氯吡嗪残留量： 式中：C 试样溶液中磺胺氯吡嗪的浓度（g/mL）；Cs 标准工作液中磺胺氯吡嗪的浓度（g/mL）；A 试样品溶液中磺胺氯吡嗪的峰面积；As 标准工作溶液中磺胺氯吡嗪的峰面积；X 试样中磺胺氯吡嗪的残留量（mg/kg）；V 残余物定容体积（mL）；m 试样的重量（g）。注：测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。1 g/g = 1 mg/kg9. 检测方法灵敏度、准确度和精密度9.1 灵敏度磺胺氯吡嗪在鸡肌肉、肝脏、肾脏和脂肪中的检测限为20 g/kg，定量限为40 g/kg。9.2 准确度本方法在鸡肌肉、肝脏、肾脏和脂肪添加浓度为40 g/kg 200 g/kg时的回收率均为60 % 100 %。9.3 精密度本方法的批内相对标准偏差10 %，批间相对标准偏差15 %。附录A（资料性附件）磺胺氯吡嗪特征色谱图图A.1 磺胺氯吡嗪标准品（0.2g/ml）图A.2-1 鸡肝脏组织空白试样图A.2-2 鸡肝脏组织空白添加磺胺氯吡嗪试样（100g/kg）
