《丙酮酸的测定方法》由会员分享，可在线阅读，更多相关《丙酮酸的测定方法（2页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、 实验七 丙酮酸含量的测定 一、实验目的 掌握植物组织中丙酮酸含量测定的原理和方法。 二、实验原理 植物样品中的组织液，用三氯乙酸去蛋白质后，其中所含的丙酮酸可与2,4二硝基苯肼作用，生成丙酮酸2,4二硝基苯腙，后者在碱性溶液中呈樱红色，其颜色可用分光光度计测量，与已知丙酮酸标准曲线进行比较，即可求得样品中丙酮酸的含量。 三、实验器材与试剂 1、.实验器材 分光光度计；研钵；具塞刻度试管：20mL8；容量瓶：100mL2；移液管：1mL1 5mL4； 量筒：10mL1；离心机；天平； 大蒜、大葱或洋葱 2、试剂 （1）8%三氯乙酸(当日配制置冰箱中备用) （2）1.5mol/L氢氧化钠 （3）
2、0.1%2,4二硝基苯肼:称取2.4二硝基苯肼100mL，溶于2mol/LHCl中配成100mL溶液，盛入棕色试剂瓶，保存于冰箱内。 （4）丙酮酸钠 四、实验操作步骤 1.丙酮酸标准曲线的制作： 称取丙酮酸钠7.5mg于烧杯中，用8%三氯乙酸溶解，转入100mL容量瓶中，并用8%三氯乙酸定容，此液为60g /mL的丙酮酸原液。 取6支试管，按下表数据配制不同浓度的丙酮酸标准液：管? 号 123456丙酮酸原液量（mL） 00.61.21.82.43.08%三氯乙酸量（mL） 3.02.41.81.20.60丙酮酸浓度（g/mL） 01224364860在上述各试管中分别加入1.0mL0.1%的
3、2,4二硝基苯肼，摇匀，再加5mL 1.5mol/L的氢氧化钠溶液，摇匀显色，在520nm波长下比色。做标准曲线。 2.植物样品组织液的提取： 称取植物样品（大蒜、大葱或洋葱）5g，于研钵中加入少许石英沙及少量8%三氯乙酸，仔细研成匀浆，再用8%三氯乙酸洗入100mL容量瓶中（沙留在研钵内），定容至刻度。静置30 min，取10mL匀浆液离心（4000r/min）10min，取上清液备用。 3.组织液中丙酮酸的测定 取3mL上清液于一刻度试管中，加2mL8%三氯乙酸，加1.0mL0.1%的2,4二硝基苯肼溶液，摇匀，再加5mL 1.5mol/L氢氧化钠溶液，摇匀显色。在520nm波长下比色，记录吸光度，在标准曲线上查得丙酮酸的含量。 五、结果处理 式中：A标准曲线中查得的丙酮酸克数。 六、思考题：测定丙酮酸含量的基本原理是什么？2
