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1、DNS法测还原糖方法一 原理 DNS即二硝基水杨酸法是利用碱性条件下,二硝基水杨酸(DNS)与还原糖发生氧化还原反应,生成3-氨基-5-硝基水杨酸,该产物在煮沸条件下显棕红色,540nm处有吸收,且在一定浓度范围内颜色深浅与还原糖含量成比例关系的原理,用比色法测定还原糖含量的。 二 试剂及方法2.1 试剂 1. 1 mg/ml的葡萄糖溶液2. 3,5二硝基水杨酸 用 400mL 蒸馏水溶解 6.3g3,5二硝基水杨酸,逐步加入 21g 氢氧化钠,再加入182g 四水合酒石酸钾钠、5.0g 苯酚、5.0g 无水亚硫酸钠,温水浴(不超过 48),不断搅拌,直至溶液清澈透明。用蒸馏水定容至 1000
2、mL,保存在棕色瓶中,与二氧化碳隔绝,静置 57 天后使用,贮存期为 6 个月。2.2 葡萄糖标曲的绘制表1 葡萄糖标曲的绘制方法试剂试管012345葡萄糖标准液(ml)00.10.20.30.40.5蒸馏水(ml)0.50.40.30.20.103,5-二硝基水杨酸(ml)0.50.50.50.50.50.5糖含量(mg)00.10.20.30.40.5混合均匀,沸水浴5min,冷却后加入4mL蒸馏水,混匀,在540nm下测OD值2.3 发酵液样品测定将发酵液稀释一定倍数后,取3只比色管标号1,2,3,加入稀释和的发酵液0.5 ml,加入 DNS试剂0.5 ml 混匀,沸水浴5min,冷却后加入4 ml蒸馏水混匀,测OD540表 2 样品的测定方法管号 012还原糖待测样品 (mL)0.00.50.5蒸馏水 (mL)0.50.00.0DNS试剂 ( mL)0.50.50.5蒸馏水 (mL)444A540 nm计算所得还原糖含量 (mg)三 结果计算3.1 标曲3.2样品的还原糖含量