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1、Transwell 通透性支持物的 选择和使用手册 contents 目录 总览 选择合适的Transwell膜和合适的孔径 选择合适的Transwell 系统 如何使用Transwell通透性支持物 使用提示 常规使用指南 技术支持 订购信息 聚酯（PET）Tranwell 嵌套 胶原包被的Tranwell-COL嵌套 聚碳酯Transwell嵌套 Snapwell 嵌套 高通量筛选HTS Transwell-24系统 6，12和24孔细胞培养板 HTS Transwell-96系统 02 02 03 06 06 06 07 08 08 08 09 10 10 11 12 总览 02 0.4
2、 m孔径聚碳酯膜的扫描电镜 在6孔板中的聚酯Transwell透明 嵌套显示膜的清晰度 12mm直径的Transwell嵌套带有 聚碳酯膜 PTFE膜的扫描电镜，显示孔径结构 细胞和组织培养技术在基础和应用生命科学领域的重要性日益提高。为尽可能的模拟体内 环境以培养某些特殊的细胞系，新的培养容器和细胞贴附的表面不断涌现。顺理成章的， 使用带有多微孔膜的通透性支持物培养这些细胞成为基本的方法。通透性支持物可以有效 改善极性细胞的培养，因为这些支持物允许细胞从其基底面和顶面分泌和吸收分子，从而 以更为自然的方式进行代谢。 滤膜作为细胞培养介质来源于Grobstein (Nature, 172:86
3、0-872; 1953)关于后肾滤膜诱导的研 究。经过长年对不同种类细胞的无数次应用，利用通透性支持物进行细胞培养被认为明显 优于坚固的，不可透过的细胞生长界面。对于表皮细胞和其他种类的细胞，利用通透性支 持物在体外培养使得细胞可以在更为自然的极性条件下生长和研究。同时提高了细胞的分 化水平，使得体外生长的细胞在形态和功能上更为接近体内的细胞。还可以进行运输，吸 收和分泌等细胞功能的研究，因为在通透性支持物上生长的细胞可以很方便且无干扰的接 近其基底面和顶面的细胞膜结构。使用通透性支持物进行细胞培养对于实验细胞学研究是 一个无可比拟的工具。 选择合适的Transwell 膜和孔径 Transw
4、ell通透性支持物可以提供三种膜材料：聚碳酯（PC），聚酯（PET）和胶原包被的 聚四氟乙烯（PTFE）。表1提供了这些膜特性的更多信息。 聚酯Transwell-透明嵌套的特点是带有在显微镜下呈透明的膜。这些膜经过处理，可以 让细胞更好的贴附和生长。Transwell-透明嵌套使细胞在相差显微镜下更易观察，可以 估计细胞的生长状态和单层细胞的形成。 聚碳酯Transwell嵌套提供从0.1um到12.0um多种孔径。所有的膜都经过处理，使得细胞 更易贴附。 Transwell-COL嵌套湿润时透明的，胶原包被的PTFE膜，使得细胞更易贴附和伸展，同 时在培养的过程中可以观察。Transwel
5、l-COL含有牛胎盘中提取的等摩尔数混合I型和III 型胶原。不同于传统包被技术会形成密封的膜层，康宁专利包被技术使具有生物稳定 性的胶原包裹住滤膜的每一根纤维，从而保持了膜的多孔性。 选择孔径 在实验中使用Transwell通透性支持物时选择合适的孔径也是十分重要的。表2总结了通透 性支持物的常规应用和推荐使用的孔径。最小孔径的Tanswell膜（0.1um）主要应用于药物 转导研究。细胞侵袭，趋化性和运动性研究通常采用3.0um或以上的孔径的Tranwell膜。 细胞从膜的孔中迁徙通过的能力与选用的细胞系及培养条件有关，同时也与孔径相关。小 于3.0um孔径条件下，细胞不会迁徙通过。对于一
6、些要求严格的实验，康宁建议在实验中 选用一系列孔径作为对照来确定哪种尺寸最适合于你的细胞培养和特殊应用。还有一 个方 法就是参照已经发表的文献的推荐。若需更多的使用和应用信息， 请访问康宁网站上技术 信息部分的Transwell。 总览 03 表1.Transwell膜特征 化学兼容性 孔密度 选择合适的Transwell系统 传统Transwell通透性支持物 所有的Transwell膜都适用于组织学固定剂，包括甲醇和甲醛。聚酯Transwell膜具有最佳 的全面化学适用性。这些膜（不包括聚苯乙烯）都耐受多种酒精，胺类，脂类，醚类，酮 类，石油类和其他溶剂包括卤化碳氢化合物和DMSO，但是不
7、推荐使用强酸强碱。 在三类膜中只有胶原包被的PTFE膜没有确定的孔密度，因为它具有是曲折孔道的膜。两 种具有额定孔密度的膜是聚酯膜和聚碳酯膜。聚酯Transwell膜的孔密度不像聚碳酯膜 那么高，但是它具有更好的光学清晰度，康宁聚酯膜和聚碳酯膜的额定孔密度详见表3。 Transwell嵌套可以提供四种膜直径6.5mm（24孔板），12mm（12孔板），24mm(6孔 板)和75mm（100培养皿）。表4列出了这些尺寸可以提供的细胞生长面积。 相对于每个规格，都有几种类型的膜和大范围的孔径可选择。具有专利的中心悬挂设计可 以防止培养液由嵌套壁和孔壁之间通过毛细作用流失。悬挂设计使得嵌套与底部有1
8、mm的 差距，这样可以保证在嵌套移走的时候，形成的单层细胞不会被破坏。在嵌套壁上的缺口 可保证与底部接触。 传统的Transwell平板嵌套在6, 12和24孔板及10cm培养皿中独立使用。 HTS Transwell-24和HTS Transwell-96 嵌套按特殊规格包装以方便操作和自动处理。 Snapwell嵌套在扩散或Ussing chambers 模型中使用。 Transwell通透性支持物有三种基本设计： 有关这些产品的详细信息可以在下面及订购信息中找到。 75mm Transwell嵌套和100mm 培养皿 Snapwell嵌套设计与扩散或 Ussing培养室配套使用 特点 光
9、学特性 细胞可见度 组织培养处理 膜厚度 Matrix/ECM 包被性 胶原处理 可提供孔径（um） 聚酯（PET） 透明 好 有 10um 有 无 0.4, 1.0, 3.0, 8.0 聚碳酯（PC） 半透明 较差 有 10um 有 无 0.4, 3.0, 5.0, 8.0 聚四氟乙烯（PTFE） 湿润时透明 可见细胞轮廓 无 50um 有 有 0.4, 3.0 总览 04 表2. 通透性支持物应用选择表 应用推荐孔径 超大分子，离子，水，低分子量溶液，激素，生长因子等 离子通道，酶，转运蛋白，受体，脂类的极性分布 分类和定向靶点 极性的形成和维持 紧密连接的合成和装配 蛋白转换 膜循环 生
10、长因子，激素，抗体，病毒，毒素等受体-培体相互作用 受体定位和药物反应极性 药物对于血管通透性 药物运输通过表皮（Caco-2细胞）和内皮屏障 药物运输通过脑微血管内皮细胞 肿瘤侵袭和转移 克隆化检测 侵袭抑制物 细胞外支架作用 噬菌作用 血液中成形因子的趋药性与趋触性响应 组织巨噬细胞的移动 细胞-细胞相互作用 细胞-底物相互作用 肿瘤异质性 细胞-细胞外支架相互作用 饲养层-干细胞相互作用 转导和渗透性研究 细胞极性 胞吞作用 药物运输 转移潜力和侵袭 趋药性/动力研究 共培养 病毒，细菌和寄生虫对宿主细胞膜的附着 入侵和透过内皮屏障 微生物受体 药物对微生物受体的效应 微生物致病机理 伤
11、口愈合 血管生成 表皮再生 炎症反应 组织重建 粒层细胞培养 类固醇生成 内分泌和旁分泌影响粒层分化，胚囊从透明层孵化，底物结合，滋养层细胞生长 体外受精 0.4, 1.0, 3.0um 0.4, 1.0, 3.0um 0.4, 1.0, 3.0um 0.4, 1.0, 3.0um 5.0, 8.0, 12.0um 3.0, 5.0, 8.0um 0.4, 1.0, 3.0um 0.4, 1.0, 3.0um 0.4, 1.0, 3.0um 0.4, 1.0, 3.0um 在Transwell聚碳酯膜上的巨噬 细 胞 的 扫 描 电 镜 照 片 （ 由 B.Wetzel, S. Wahl, E
12、. Westbrook 和L. Altma, NIH, Bethesda, MD 惠赠） 总览 05 HTS Transwell系统 HTS Transwell系统是24个或96个独立Transwell嵌套通过一个坚固的，可以由机械臂操作的 支持物连接而成，从而可以作为一个单位来操作。这使得HTS Transwell系统成为自动操作 系统，高通量药物运输(Caco-2细胞)和毒性研究的理想工具。 HTS Transwell-96培养系统 (U.S. Patent No. 6,943,009) 包括以下几个部分：一个96孔嵌套 板，可以选择1.0或8.0um孔径的聚酯膜，或者0.4um, 3.0
13、um, 5.0um孔径的聚碳酯膜；带有可 拆卸的培养液稳定装置的储液板用来加液或换液；检测使用的接收板（黑色或透明）；2 个盖子， 以防止挥发和污染。每个嵌套具有0.143 cm2 的生长面积。顶面及侧面的大开口便 于添加和取样。 HTS Transwell-24 培养系统可以提供处理过的0.4um孔径及3.0um孔径的聚碳酯膜，或0.4um 孔径的聚酯膜，具有对细胞贴附，生长和分化极佳的界面。一个一体化的储液板可以减少 在培养过程中的液体处理操作（培养液可以一次性快速换掉）。一旦细胞层长满，HTS Transwell-24 嵌套可以转移到一个普通的康宁24孔培养板上进行实验。 Snapwel
14、lTM嵌套 Snapwell嵌套 (U.S. Patent No. 5,272,083) 是经过改良的Transwell嵌套，包括12mm 的经组织 培养处理的聚碳酯膜或透明的聚酯膜，以及一个分离环。这些嵌套主要用于运输和电生理 研究。一旦细胞长满，分离环固定的膜可以拆卸，并垂直或水平放置，或置于Ussing培养 室中。Ussing培养室可以通过哈佛仪器公司购买： HTS-96 系统是高通量药物转导 研究的理想工具 表3. Transwell 聚酯膜和聚碳酯膜的额定孔密度 孔径 0.4um 1.0um 3.0um 5.0um 8.0um 聚酯膜 1 x 108孔/cm2 无 2 x 106孔/
15、cm2 4 x 105孔/cm2 1 x 105孔/cm2 聚碳酯膜 4 x 106孔/cm2 1.6 x 106孔/cm2 2 x 106孔/cm2 无 1 x 105孔/cm2 额定孔密度 *数据为额定值，可能有生产流程误差有所不同，为保证实验成功，我们推荐研究者确立自己的实验方法。 表4. Transwell 通透性支持物生长面积 嵌套直径 4.26mm 6.5mm 12mm 24mm 75mm 多孔板和培养皿类型 96 well 24well 12well 6well 100mm培养皿 嵌套膜生长面积 0.143 cm2 0.33 cm2 1.12 cm2 4.67 cm2 44 cm
16、2 *数据为额定值，可能有生产流程误差有所不同，为保证实验成功，我们推荐研究者确立自己的实验方法。 HTS Transwell系统为机械操作 而设计 如何使用Transwell 通透性支持物 06 使用提示 1. 通透性支持物上的细胞形态和密度受滤膜孔径的影响。 2. 一些孔径大的膜可以容许细胞穿过。 3. 在通透性支持物上生长的细胞的贴附对于起始接种密度很敏感。初次使用应接种不同密 度保证最佳生长。 4. 在培养之前将通透性支持物在培养基中孵育可以改善细胞得贴附和分布。 5. 与塑料培养表面一样，细胞在通透性支持物上仍然需要细胞外支架的包被。 6. 透明的Transwell是带有透明的，经组织培养处理的聚酯膜，细胞在相差显微镜下很容易 被观察。 7. Transwell-COL带有PTFE膜，经过等摩尔数的I型和III型牛胎盘胶原处理。从而形成了覆 盖在滤膜纤维上的具有生物稳定性的胶原骨架。这些Transwell嵌套适用于需生物包被的
