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1、微生物的培养与应用微生物的培养与应用 （时间：45 分钟 满分：100 分） 一、选择题(每小题 4 分，共 48 分) 1下列关于配制培养基的叙述，正确的是( ) A配制固体培养基必须加入琼脂 BpH 调至 6.57.5 的培养基可培养放线菌 C培养自生固氮菌的培养基中不需添加氮源 D发酵工程一般用半固体培养基或液体培养基 解析：选 C 在配制固体培养基时，可加入琼脂作为凝固剂，但琼脂并不是唯一的凝固剂； 放线菌生长适宜的 pH 为 7.58.5，细菌生长适宜的 pH 为 6.57.5；发酵工程应用于生产实践一 般用液体发酵，可以连续培养，提高产量；自生固氮菌能够将空气中的 N2还原为 NH
2、3，因此培养 基中不需加氮源。 2某同学用牛肉膏蛋白胨固体培养基进行大肠杆菌纯化培养，下列说法错误的是( ) A蛋白胨可为大肠杆菌的生长提供氮源和维生素等营养 B牛肉膏蛋白胨培养基需经高压蒸汽灭菌后调节 pH C倒平板操作中，待平板冷却凝固后将平板倒过来放置 D大肠杆菌纯化培养可以采用平板划线法或稀释涂布平板法 解析：选 B 培养基应先调节 pH 后灭菌，若先灭菌后调节 pH，调节 pH 时会污染培养基。 3微生物培养是微生物工程中的基础技术，下列相关叙述正确的是( ) A病毒和细菌的培养基成分相同 B平板划线法中的“线”是连续的、不分区域的 C微生物培养基中并不是都必须添加碳源或氮源 D在微
3、生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行消毒 解析：选 C 病毒必须寄生在活细胞内才能进行生命活动，如可用活鸡胚培养病毒；平板划 线法每次划线前都要灼烧接种环，划线是分区域的；微生物种类不同，对营养物质的需求不同， 应根据所培养微生物的需要确定培养基的成分；对培养基和培养皿要进行灭菌，而不是消毒。 4稀释涂布平板法是微生物培养中的一种常用的接种方法。下列相关叙述错误的是( ) A操作中需要将菌液进行一系列的浓度梯度稀释 B需将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基表面 C不同浓度的菌液均可在培养基表面形成单个的菌落 D对培养基和涂布器等均需进行严格灭菌处理 解析：选 C 只有菌
4、液稀释到一定程度后，在固体培养基表面才能形成单个的菌落，否则可 能会出现两个或两个以上的细菌共同形成一个菌落，或菌落出现重叠。 5某学者欲研究被石油污染过的土壤中细菌的数量，并从中筛选出能分解石油的细菌。下列 操作错误的是( ) A利用平板划线法对细菌进行计数 B用以石油为唯一碳源的培养基筛选 C采用稀释涂布平板法分离菌种 D称取和稀释土壤样品时应在酒精灯火焰旁 解析：选 A 分离细菌常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法，但平板划线法不能对细 菌进行计数；筛选能分解石油的细菌，要以石油作为培养基中唯一的碳源；筛选细菌的整个操作 过程都需要在无菌条件下进行，所以称取、稀释土壤样品应在酒精灯火焰
5、旁进行。 6下表为某培养基的配方，有关叙述正确的是( ) 成分蛋白胨葡萄糖 K2HPO4 伊红美蓝蒸馏水 含量 10 g10 g2 g0.4 g0.065 g1 000 mL A.从物理性质看该培养基属于液体培养基，从用途看该培养基属于选择培养基 B培养基中属于碳源的物质主要是葡萄糖，属于氮源的物质是蛋白胨 C该培养基缺少提供生长因子的物质 D该培养基调节合适的 pH 后就可以用于接种菌种 解析：选 B 此培养基中没有琼脂等凝固剂，因此为液体培养基；伊红、美蓝能对大肠杆菌 起鉴别作用。糖类(尤其是葡萄糖)是最常用的碳源；蛋白胨主要用作氮源，也提供生长因子，或 作为异养型微生物的碳源。该培养基调
6、节 pH 并灭菌后才能接种使用。 7下列关于微生物培养和利用的叙述，错误的是( ) A利用稀释涂布平板法既能分离微生物也能对微生物进行计数 B接种时连续划线的目的是将聚集的菌种逐步分散获得单个菌落 C以尿素为唯一氮源且含酚红的培养基可选择和鉴别尿素分解菌 D选择培养基作用的原理是显现某微生物的特征，以区别于其他微生物 解析：选 D 稀释涂布平板法能分离纯化微生物也能对微生物进行计数；连续划线是将聚集 的菌种逐步分散，以获得单菌落；尿素分解菌的分离可以选用以尿素为唯一氮源，且含酚红的培 养基；选择培养基是在培养基中加入某一化学物质或改变某一理化性质，使某一微生物正常生长， 而其他微生物则被杀灭或
7、生长受到抑制，从而选出所需要的微生物。 8下列有关分解纤维素的微生物分离的叙述，错误的是( ) A在加入刚果红的培养基中，当纤维素被纤维素分解菌释放的纤维素酶分解后会出现透明圈 B在用刚果红染色时只能先培养微生物再加入刚果红，不能在倒平板时加入 C纤维素酶的发酵方法有液体发酵法和固体发酵法 D纤维素酶的测定方法，一般是对所产生的葡萄糖进行定量的测定 解析：选 B 刚果红染色有两种方法，一种是先培养微生物再加入刚果红，另一种是在倒平 板时就将刚果红染液加入培养基中，然后再培养微生物，两种方法各有优缺点，但都可以应用。 9微生物(除病毒外)需要从外界吸收营养物质并通过代谢来维持正常的生长和繁殖。下
8、列有 关微生物营养的说法，正确的是( ) A乳酸菌与硝化细菌所利用的碳源物质是相同的 B微生物生长中不可缺少的一些微量的无机物称为生长因子 C培养基中的营养物质浓度越高对微生物的增殖越有利 D生长因子一般是酶或核酸的组成成分，微生物本身合成这些生长因子的能力往往不足 解析：选 D 微生物的营养物质包括碳源、氮源、水、无机盐和生长因子。乳酸菌的碳源是 有机物，而硝化细菌可以利用无机物作为碳源；生长因子是微生物体内不能合成的，需要量很小 的一些有机物；培养基中营养物质浓度过高会造成微生物细胞失水，不利于微生物的生长、繁殖。 10农田土壤的表层，自生固氮菌的含量比较多，将用表层土制成的稀泥浆，接种到
9、特制的 培养基上培养，可将自生固氮菌与其他细菌分开，对培养基的要求是( ) 加抗生素 不加抗生素 加氮素 不加氮素 加葡萄糖 不加葡萄糖 37 恒温箱培养 2830 温度下培养 A B C D 解析：选 C 自生固氮菌是异养菌，生长繁殖需要有机碳源；自生固氮菌能利用空气中的氮 气，培养基中不需要加氮源，固氮菌能生长繁殖，不能固氮的菌不能生长繁殖；自生固氮菌生长 繁殖的最适温度是 2830 ；自生固氮菌对抗生素敏感，培养基中不能加抗生素，所以从土壤 浸出液中分离出自生固氮菌对培养基的要求是不加抗生素、不加氮素、加葡萄糖、 2830 温度下培养。 11下表表示在不同培养基中细菌的生长繁殖情况(A、
10、B、C、H、I、J、K、M 为培养基的成 分， “”表示生长， “”表示不生长)，请分析细菌不能合成下列哪种物质( ) 培养基 成分 A、B 、C A、B、 C I、M A、B、C H、K A、B、C M、J A、B、C I、K A、B、C H、J A、B、C K、M 生长状 态 AH BI CK DM 解析：选 C 凡添加了物质 K 的培养基，细菌都能生长，反之则不能生长，说明物质 K 是细 菌不能合成的。 12现有两种固体培养基，已知其配制时所加的成分和含量如下表，用这两种培养基分别去 分离土壤中的两种微生物，你认为它们适于分离( ) 成分 KH2PO4MgSO47H2ONaCl CaSO
11、4 2H2O CaCO3 葡萄糖纯淀粉 甲培养基 0.02%0.02%0.02%0.01%0.5%0.5%2% 乙培养基 0.02%0.02%0.02%0.01%0.5% A.甲培养基适于分离自养型自生固氮菌；乙培养基适于分离异养型自生固氮菌 B甲培养基适于分离异养型自生固氮菌；乙培养基适于分离自养型自生固氮菌 C甲培养基适于分离酵母菌；乙培养基适于分离真菌 D甲培养基适于分离自养型共生细菌；乙培养基适于分离异养型共生固氮菌 解析：选 B 固氮菌中能独立生存的是自生固氮菌，需和其他生物结合在一起才能生存的是 共生固氮菌，甲培养基中含有的葡萄糖和淀粉是有机物，由此推出该培养基适于分离异养型的自
12、生固氮菌；乙培养基中不含有机碳源，所以可用来分离培养自养型的自生固氮菌。 二、非选择题(共 52 分) 13(17 分)为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进 行了细菌分离等工作。回答下列问题： (1)该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的 空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是_；然后，将 1 mL 水样 稀释 100 倍，在 3 个平板上用涂布法分别接入 0.1 mL 稀释液；经适当培养后，3 个平板上的菌落 数分别为 39、38 和 37。据此可得出每升水样中的活菌数为_个。 (2)该小组采用平板划线法分离水样中
13、的细菌，操作时，接种环通过_灭菌，在第二次 及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线，这样做的目的 是 _。 (3)示意图 A 和 B 中，_表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。 (4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振 荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：振荡培养能 提高培养液中_的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高_的利用率。 解析：(1)为了检测培养基平板灭菌是否合格，可在涂布接种前，随机取灭菌后的空白平板先 行培养一段时间。0.1 mL 稀释液中平均有(393837)/338(个)活
14、菌，则每毫升稀释液中活菌 的数目为 38/0.1380(个)，则稀释前每毫升水样中活菌数目为 3801003.8104(个)，则每 升水样中活菌数目为 3.81041 0003.8107(个)。(2)接种环、接种针等金属用具可直接在 酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，以达到迅速彻底灭菌的目的。在第二次及以后的划线时，总是从 上一次划线的末端开始划线，其目的是将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落。(3)比较图 A 和 图 B 可以看出：A 培养基中细菌的分布呈线形，是用平板划线法接种培养后得到的结果；B 培养基 中细菌均匀分布，是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。(4)振荡培养可以提高培养液中溶
15、解氧的含量，还可以使菌体与培养液充分接触，提高了营养物质的利用率，因此振荡培养的细菌 比静置培养的细菌生长速度快。 答案：(除标明外，每空 2 分，共 17 分)(1)检测培养基平板灭菌是否合格(3 分) 3.8107(3 分) (2)灼烧 将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落(3 分) (3)B (4)溶解氧 营养物质 14(17 分)类胡萝卜素中的胡萝卜素是一种常用的色泽鲜艳、对人体有益的天然色素类食品 添加剂，且类胡萝卜素可从微生物体中获取。下图为筛选获得高产红酵母菌菌种的过程，下表为 筛选培养过程中获得的部分数据(表中细胞生物量是指培养期间单位体积内所含的生物个体总量)。 请分析回答下列问题： 红酵母菌在不同的培养基中类胡萝卜素产量 菌 种 培养基 成分 细胞生 物量(g/L) 类胡萝卜素 含量(mg/g) 类胡萝卜素 产量(mg/L) 葡萄糖 2.426.0162.4 甘蔗汁 9.21.917.5 泥炭 提取物 4.81.2616.03 (1)酵母菌不具有的结构有_(填“拟核” “芽体” “叶绿体”或“细胞壁” )。 (2)图中过程的目的是_。为
