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1、,实验诊断学实验1 全血细胞计数及血细胞形态检查,静脉真空采血（示教） 白细胞计数 红细胞计数 血红蛋白测定 血涂片制备及染色 白细胞分类计数 网织红细胞（示教） 血沉测定（示教） 目前实验室血细胞测定方法,内 容,真空采血过程,血球计数板的结构,白细胞计数(显微镜法) 试剂冰醋酸 2.0ml,蒸馏水 98ml,10g/L亚甲蓝溶液3滴 操作 取一小试管，加白细胞稀释液0.38ml。 用微量吸管采血20ul加入试管底部，用上清液吸洗23次，摇匀。 充池后静置23分钟待白细胞下沉后用低倍镜计数4个大方格内的白细胞数。 计算 白细胞数/L=4个大方格内的白细胞数41020106,参考范围 成人：4
2、 10109/L（400010000/ul）2013年行业标准：3.5-9.5109/L 儿童：5 12109/L（500012000/ul） 新生儿：1520109/L（1500020000/ul） 临床意义 增高：生理性：新生儿、剧烈运动、妊娠晚期、极度恐惧与疼痛。 病理性：大部分细菌性感染、尿毒症、烧伤、手术后、传染 性单核细胞增多症、白血病等。 减少：病毒性感染、伤寒、副伤寒、疟疾、再生障碍性贫血、放疗、 化疗、非白血性白血病。 注意事项 1.一些贫血患者血液中出现有核红细胞会影响白细胞计数，应校正排除。 2.加全血时，应檫去吸管外周血液，再将标本吹入试管底部，再吸上清液回洗几次。 3
3、.滴入计数室内的混悬液，液量要适当，不得外溢或混有气泡；计数室内的细胞分布均匀。 4.计数室边线的白细胞，可数上不数下，数左不数右，避免重复或漏计。,试剂 (可用生理盐水) 操作 取一小试管，加红细胞稀释液1.99ml。 用微量吸管采血10ul加入试管底部，用上清液吸洗23次，摇匀。 充池后静置23分钟待红细胞下沉后用高倍镜计数5个中方格内的红细胞数。 计算 5个中方格内红细胞数5 10 106 200=红细胞数/L 注意事项 红细胞在计数池内分布不均匀时应重新充池,红细胞计数(显微镜法),试剂血红蛋白稀释液(文-齐氏液) 原理血红蛋白中的亚铁离子（Fe2+)被高铁氰化钾氧化为高铁(Fe3+)
4、血红蛋白,再与氰结合成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白,在540nm波长和液层厚度条件下,具有一定的吸光系数，根据吸光度，即可求得血红蛋白浓度。 操作 取一试管，加血红蛋白稀释液5.0ml。 用微量吸管采血20ul加入试管，用上清液吸洗2-3次，摇匀后静置5-10分钟待比色。,血红蛋白测定(手工比色法),由于仪器的差异,用吸光系数的方法已改为用高铁血红蛋白参考标准液相对比较的方法.即用一组已知浓度的HiCN参考液,在应用的分光光度计上,分别测定其吸光度(A)。以A为衷纵坐标，血红蛋白值为横坐标，绘制标准曲线。,OD,血红蛋白（g/L) 20 40 60 80 100 120 140 160 180
5、,0.5,0.4,0.3,0.2,0.1,血红蛋白测定(手工比色法),参考范围 RBC 男：4 5.51012/L 2013年行业标准4.3-5.81012/L 女：3.5 5.01012/L 3.8 5.11012/L HB 男：120-160g/L 130-175g/L 女：110150 g/L 115150 g/L 红细胞计数和血红蛋白测定的临床意义 生理性增高：新生儿、高原居民、缺氧的应急反应等。 病理性增高：真性红细胞增多症、心脏病、脱水等。 减少：临床各类贫血、白血病、手术后、产后、月经期等。,外周血片制作,各种血膜比较,瑞氏染色,原 理,瑞氏染色液主要染料由碱性美蓝和酸性伊 红两
6、种成分组成,它们与细胞内的嗜酸性和嗜碱 性的各种物质既有物理的吸附作用，又有化学 的亲和作用,各种细胞成分化学性质不同，对各 种染料的亲和力也不一样，因此使细胞呈现出 不同的色彩。,1. 取1/3滴血于洁净的玻片上推制成长约3 4cm的薄血片，要求头、体、尾清晰可见。 2. 室温中自然干燥. 3. 瑞氏染色：加染液15滴于血膜上，待覆盖全部血膜后加15滴缓冲液，15-20分钟后用水冲洗干净待干。 4. 选择体尾交界的区域，用油镜计数100个白细胞，根据形态特征分类并计算出百分比。,瑞氏染色方法,外周血正常细胞形态 （显微镜观察）,大小约6-9um,双面微凹，染粉红色，中央有小淡染区，无细胞核，
7、溶贫、白血病、MDS、骨纤或缺铁贫、巨幼贫治疗期会出现幼红细胞。,正常红细胞形态,1为嗜中性分叶核，细胞胞体圆形，约10-13um，胞质丰富，染粉红色，含较多细小均匀的淡粉红色中性颗粒，核2-3叶居多，核间核丝相连。2为杆状核 核呈弯曲杆状,1为嗜中性杆状核 2为嗜酸性分叶核，细胞胞体圆形，一般分两叶，约13-15um，胞质内充满粗大的橘黄色颗粒。,嗜碱性粒细胞，细胞胞体圆形，约10-12um，胞质紫红色，内有少量粗大但大小不均的黑色嗜碱性颗粒，常覆盖于核上。,淋巴细胞，可分为大淋巴和小淋巴，前者直径10-15um，圆形，胞浆丰富，内含少量嗜天青颗粒。后者直径6-10um，胞体呈圆形，胞浆量少
8、，染色质较固缩。,1为单核细胞，胞体大，直径14-20um，圆形或不规则形，胞质较多，灰兰色，胞核大，核形不规则。2为嗜中性分叶核粒细胞。,中性杆状核粒细胞: 05.0% 中性分叶核粒细胞:50.070.0% 嗜酸性粒细胞：0.55.0% 嗜碱性粒细胞：01.0% 单核细胞:3.08.0% 淋巴细胞:20.040.0%,外周血白细胞分类正常值,正常血小板,形如圆盘状，直径2-4um。功能正常的血小板在外周血片上常可聚集成团或簇。,网织红细胞 网织红细胞是未成熟的红细胞,红细胞由骨髓进入外周血，尚需2448小时合成最后20%的血红蛋白,其胞浆中残存嗜碱性物质RNA,经碱性染料染色后，可分为4型：
9、 型：丝球型，无核红细胞中央有浓密的兰色网状物。正常为0% 型: 网型，无核红细胞中央有疏松大孔眼的网状物。正常为 0.08% 型: 破网型,网状物减少,由点状颗粒形成残破不全的网状.正常为0.15% 型: 点粒型,只有少数兰色点状颗粒或极小的网状残余,散布与红细胞内,正常人为0.56% 正常值:0.51.5%,各种网织红细胞,各种网织红细胞包括丝球型、网型、破网型、点粒型网织红细胞。A、B为煌焦油蓝染色。C为煌焦油蓝染色后瑞氏染液复染。,原理：红细胞沉降的速率受两种相反方向力量 的作用，即红细胞的下沉力与血浆的阻力. 离体抗凝血置于特制刻度测定管（魏氏法血沉管）内，垂直立于室温中，60分钟时
10、观察上层血浆高度的mm数报告之。,血沉试验,标本混匀，插入血沉管,吸取血标本至刻度。垂直竖立在血沉架上，室温静置h，观察红细胞沉降毫米数。 器材：魏氏血沉管，血沉架。 标本采集： 取血沉试剂管抽取静脉血2.4ml，混匀。,操作方法,注意事项： 血液与抗凝剂比例为：，充分混匀； 血沉管应垂直，管架平稳； 观察结果必须准确掌握在1h末。有些患者血沉先慢后快，有的先快后慢，因此不允许只观察30分钟沉降率乘以而作1h的沉降结果。,正常参考值： 男 15mm/1h 女 20mm/1h,临床意义 生理性增快 病理性增快 1）各种炎症性疾病 2）组织损伤及坏死 3）恶性肿瘤 4）各种原因所致的高球蛋白血症
11、5）其他：贫血、高胆固醇血症等 ESR属非特异性试验，不能单凭检验结果作为确定任何疾病诊断的依据，但与其他资料一起分析，可有重要参考价值。临床上一般用于：1）动态观察病情变化2）良恶性肿瘤鉴别的参考 3）反映血浆中球蛋白增高，考虑一些与此有关疾病的诊断和鉴别诊断,ESR,血细胞分析仪分析,白细胞 中性粒细胞百分数 淋巴细胞百分数 单核细胞百分数 嗜酸细胞百分数 嗜碱细胞百分数 红细胞 血红蛋白 平均红细胞体积 平均血小板体积 血小板 网织红细胞百分数,红细胞压积 平均血红蛋白量 平均血红蛋白浓度 中性粒细胞绝对数 淋巴细胞绝对数 单核细胞绝对数 嗜酸细胞绝对数 嗜碱细胞绝对数 红细胞分布宽度
12、血小板压积,检测项目,负压,血细胞 悬液,外电极,内电极,小孔,小孔管,小孔电流,样品杯,小孔近观,细胞悬液在负压的 驱使下恒定流经小 孔； 不良导体血细胞通 过小孔时引发瞬间 电阻变化； 将电阻变化转化为 脉冲记录。 脉冲的数量表示细 胞数量，脉冲的大 小表示细胞大小。,库尔特原理三要素：小孔、负压、电极 检测：细胞大小和数量,当一个不良导体颗粒，例如血细胞，通过两个电极之间时，导致电路的电阻抗发生变化。,白细胞计数库尔特原理,检测区域,白细胞,白细胞通过小孔,库尔特原理,示波镜,一般的血细胞分析仪,原理与仪器法计数白细胞雷同,红细胞计数(血细胞分析仪法),血标本在溶血素的作用下破坏红细胞并释放血红蛋白与试剂中的氰化物和季胺盐结合成稳定的衍生物，在540nm左右有固定的吸收波峰，溶血标本在流经比色池时仪器根据吸光度计算出HGB的含量,血红蛋白测定(血细胞仪法),运用V、C、S三种探针,在流式通道的某一位点,对通过的单列白细胞，进行逐个的、同时的、三重的检测，以及三维分析,以确定其亚群性质。 V-低频波，分析细胞体积； C-高频波，分析细胞核型； S-激光，分析细胞的颗粒特性。,V.C.S.三维分析原理,八千多个白细胞逐个、直接、同时地接受VCS三重检测，得到各自的三维座标值,V C S,VCS检测,综合以上处理, 可以得到如下三张分类散点图,十种异常细胞的报警提示,实验报告,
