《化妆品32种禁限用染料成分的检测方法和编制说明》由会员分享，可在线阅读，更多相关《化妆品32种禁限用染料成分的检测方法和编制说明（36页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、- 1 - 附件 2： 化妆品中 32 种禁限用染料成分的检测方法 1 范围 本方法规定了测定染发类化妆品中 32 种禁限用染料成分（见附录 A）的高效液相色谱 法。 本方法适用于染发类化妆品中 32 种禁限用染料成分的含量测定。本方法无法区分所涉 及染料成分的游离态、硫酸盐和盐酸盐，化妆品中各种形态同时存在时，应换算成一种形 态，以总量表示。 2 原理 用无水乙醇+水=1+1 的混合溶液提取染发类化妆品中的 32 中禁限用染料成分，用高效 液相色谱仪进行分析，以保留时间和紫外吸收光谱定性，峰面积定量。本方法中 32 种禁限 用染料成分的检出限、定量下限及取 0.5g 样品时的检出浓度及最低定
2、量浓度见表 1。 表 1 32 种禁限用染料成分的检出限、检出浓度、定量下限、最低定量浓度 序号 附录 A 中编号物质名称 检出限/ g 检出浓度 /（g/g） 定量下限/ g 最低定量浓度 /（g/g） 131,5-萘二酚5.010-3201.510-260 251-萘酚3.010-3121.010-240 382,4-二氨基苯氧基乙醇 HCl8.010-3322.510-2100 4102,6-二氨基吡啶1.510-2605.010-2200 5132,7-萘二酚3.010-3121.010-240 6152-氨基-3-羟基吡啶1.310-2524.010-2160 7212-氯-p-苯二
3、胺硫酸盐1.510-2605.010-2200 8242-甲基雷琐辛1.310-2524.010-2160 9252-硝基-p-苯二胺5.010-3201.510-260 - 2 - 序号 附录 A 中编号物质名称 检出限/ g 检出浓度 /（g/g） 定量下限/ g 最低定量浓度 /（g/g） 10314-氨基-2-羟基甲苯6.510-3262.010-280 11324-氨基-3-硝基苯酚6.510-3262.010-280 12334-氨基-m-甲酚8.010-3322.510-2100 13344-氯雷琐辛5.010-3201.510-260 14364-硝基-o-苯二胺1.510-2
4、605.010-2200 15406-氨基-m-甲酚1.010-2403.010-2120 16426-羟基吲哚3.010-3121.010-240 1761氢醌3.010-3121.010-240 1867m-氨基苯酚6.510-3262.010-280 1970m-苯二胺8.010-3322.510-2100 2072N,N-双(2-羟乙基)-p-苯二胺硫酸盐2.510-21007.510-2300 2173N,N-二乙基-p-苯二胺硫酸盐2.510-21007.510-2300 2274N,N-二乙基甲苯-2,5-二胺 HCl2.010-2806.010-2240 2378N-苯基-p-
5、苯二胺2.510-3108.010-332 2481o-氨基苯酚6.510-3262.010-280 2583p-氨基苯酚6.510-3262.010-280 2685苯基甲基吡唑啉酮2.010-2806.010-2240 2787p-甲基氨基苯酚硫酸盐1.010-2403.010-2120 2888p-苯二胺1.210-2483.510-2140 2991间苯二酚8.010-3322.510-2100 - 3 - 序号 附录 A 中编号物质名称 检出限/ g 检出浓度 /（g/g） 定量下限/ g 最低定量浓度 /（g/g） 3095甲苯-2,5-二胺硫酸盐2.010-2806.010-22
6、40 3196甲苯-3,4-二胺8.010-3322.510-2100 32OPDo-苯二胺8.010-3322.510-2100 3 试剂 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为超纯水。 3.1 无水乙醇。 3.2 甲醇，色谱纯。 3.3 乙腈，色谱纯。 3.4 亚硫酸氢钠。 3.5 磷酸溶液（1+9）：吸取磷酸（20=1.69g/mL）10mL，加水 90mL。 3.6 磷酸盐混合溶液：称取十二水合磷酸氢二钠 1.8g、磷酸二氢钾 2.8g 和庚烷磺酸钠 （C7H15SO3Na）1.0g，用水稀释至 1L，混匀，配制成含庚烷磺酸钠（1g/L）的磷酸盐缓冲液， 加入磷酸溶液（3.5） ，调节
7、 pH 至 6.0 左右，0.45m 微孔滤膜过滤。 3.7 染料类化合物标准储备溶液（染料成分）=10g/L）：称取染料对照品约 100mg（精确至 0.1mg）于 10mL 容量瓶中，以 2g/L 亚硫酸氢钠水溶液 + 无水乙醇（3.1） =1+1 的混合溶液定容至 10mL，配成约 10g/L 的单标溶液。以下几种物质在上述溶剂中的溶 解性较差，分别采取如下措施：甲苯-2,5-二胺硫酸盐和 2-氯-p-苯二胺硫酸盐 2 种物质直接 用 2g/L 亚硫酸氢钠水溶液溶解并定容；甲苯-3,4-二胺直接用无水乙醇（3.1）定容；2-硝基- p-苯二胺和 4-硝基-o-苯二胺需将称样量减至 25m
8、g，再用无水乙醇（3.1）定容，配成约 2.5g/L 的单标溶液。储备液保存于 04冰箱中，最多使用 2 天。 4 仪器和设备 4.1 高效液相色谱仪，具有二极管阵列检测器。 4.2 pH 计。 4.3 超声波清洗器。 4.4 离心机。 - 4 - 5 分析步骤 5.1 样品预处理样品预处理 称取样品约 0.5g（精确至 1mg）于 10mL 具塞比色管中，加无水乙醇（3.1）+ 水=1+1 的混合溶液至刻度，超声提取 15min。超声过程中，若水温高于 40应停置降温，冷却后 继续超声，直至样品溶液完全均一化。浑浊溶液可取适量高速离心，取上清液经 0.45m 微孔滤膜过滤，滤液作为待测溶液，
9、并尽快测定。 5.2 测定测定 5.2.1 色谱参考条件 色谱柱：Supelco DISCOVERY RP-AMIDE C16柱（250mm4.6mm，5m）或等同柱； 色谱保护柱：Supelco DISCOVERY RP-AMIDE C16保护柱（20mm4.0mm，5m）或等同 柱； 流动相 1：乙腈（3.3）+ 磷酸盐混合溶液（3.6）=10 + 90； 流动相 2：甲醇（3.2）+ 磷酸盐混合溶液（3.6）=10 + 90； 流动相 3：乙腈（3.3）+ 磷酸盐混合溶液（3.6）=40 + 60； 流量：1.0mL/min； 检测器：二极管阵列检测器； 检测波长：280nm； 柱温：2
10、5。 5.2.2 校准曲线的制备 参照色谱图 1色谱图 3，对 32 种禁限用染料成分进行分组，并根据分组情况，分别移 取适量染料类化合物标准储备溶液（3.7）于 10mL 容量瓶中，用无水乙醇（3.1）稀释至刻 度，配成 500mg/L 的混合标准溶液。各取混合标准溶液适量，用无水乙醇（3.1）稀释，配 成 10mg/L、25mg/L、50mg/L、100mg/L、250mg/L、500mg/L 共 6 个浓度的混合标准系列。 标准系列应于使用前配制。 取各标准系列 5L 注入高效液相色谱仪，分别采用 3 种流动相进行分析，记录各色谱 峰面积，绘制校准曲线。32 种禁限用染料成分在流动相 1
11、 和流动相 2 中的保留时间参考附 录 B。 5.2.3 样品测定 在设定色谱条件下，取待测溶液 5L 注入高效液相色谱仪，分别采用 3 种流动相体系 - 5 - 进行分析。色谱图检出的物质，经与该物质对照品的保留时间和紫外光谱图比较确证后， 根据峰面积，从校准曲线上查得相应组分的质量浓度。若待测溶液中染料成分的质量浓度 超过了校准曲线线性范围的上限，需对待测溶液进行适当稀释。 注：实际操作过程中，可参考附录 B 中 32 种禁限用染料成分在流动相 1 和流动相 2 中的保留时间， 并结合色谱分离情况和样品中染料成分的不同，对 32 种染料成分进行合理分组，使各染料成分获得完全 分离。 6 平
12、行实验 按以上步骤，做两份样品的平行测定。在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝 对差值不大于这两次测定值的算术平均值的 10%。 7 结果计算 D V w（染料成分）= 100 （1） m 106 式中：w（染料成分） 染发类化妆品中染料成分的质量分数，%； 从校准曲线上查得的待测样液中染料成分的质量浓度，mg/L； V 样品定容体积，mL； m 样品取样量，g； D 稀释倍数（不稀释则取 1） 。 8 回收率和精密度 32 种禁限用染料成分的提取回收率在 82% 115%之间，方法回收率在 86% 114%之间， 相对标准偏差在 1.1% 9.9%之间。 9 色谱图 - 6 - min0
13、510152025 mAU 0 50 100 150 200 DAD1 D, Sig=280,8 Ref=off (RFJ20110808RFJ20110808 2011-08-08 09-06-15RFJ00007.D) 3.808 4.958 5.471 6.213 6.694 7.268 8.391 9.166 10.848 11.149 13.547 14.072 16.359 17.915 21.117 24.136 25.506 图 1 第一组染料混合标准溶液色谱图，流动相 1 1：p-苯二胺；2：p-氨基苯酚；3：甲苯-2,5-二胺硫酸盐；4：m-氨基苯酚；5：o-苯二胺；6：2
14、-氯-p-苯 二胺硫酸盐；7：o-氨基苯酚；8：间苯二酚；9：2-硝基-p-苯二胺；10：甲苯-3,4-二胺；11：4-氨基- 2-羟基甲苯；12：2-甲基雷琐辛；13：6-氨基-m-甲酚；14：苯基甲基吡唑啉酮；15： N,N-二乙基甲 苯-2,5-二胺 HCl；16：4-氨基-3-硝基苯酚 min05101520253035 mAU 0 10 20 30 40 50 DAD1 E, Sig=280,16 Ref=off (RFJ20110713RFJ20110712 2011-07-13 14-25-18RFJ00026.D) 5.710 7.296 8.745 10.217 11.447
15、 12.618 15.010 22.369 23.385 图 2 第二组染料混合标准溶液色谱图，流动相 2 1：m-苯二胺；2：2,4-二氨基苯氧基乙醇 HCl；3：氢醌；4：4-氨基-m-甲酚；5：2-氨基-3-羟基吡啶； 6：N,N-双(2-羟乙基)-p-苯二胺硫酸盐；7：p-甲基氨基苯酚硫酸盐；8：4-硝基-o-苯二胺；9：2,6-二氨 基吡啶；10：N,N-二乙基-p-苯二胺硫酸盐 - 7 - min02.557.51012.51517.52022.5 mAU 0 2 4 6 8 10 12 DAD1 E, Sig=280,8 Ref=off (RFJ20110801RFJ201108
16、01 2011-08-01 10-55-31RFJ00021.D) 4.012 5.361 6.454 7.482 8.589 11.781 12.541 22.142 图 3 第三组染料混合标准溶液色谱图，流动相 3 1：N,N-二乙基甲苯-2,5-二胺 HCl；2：苯基甲基吡唑啉酮；3：6-羟基吲哚；4：4-氯雷琐辛； 5：2,7-萘二酚；6：N-苯基-p-苯二胺；7：1,5-萘二酚；8：1-萘酚 - 8 - 附录 A 32 种禁限用染料成分信息表 编号INCI 名中文名称 31,5-Naphthalenediol1,5-萘二酚 51-Naphthol1-萘酚 82,4-Diaminophenoxyethanol HCl2,4-二氨基苯氧基乙醇 HCl 102,6-diaminopyr
