罗氏方法学评价与性能验证方案

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1、定量检测方法线性评价定量检测方法线性评价 (EP6(EP6- -A)A) 1.1. 操作流程操作流程 1.1.1.1. 时间要求（时间要求（Time requirementsTime requirements） 包括对仪器设备熟悉时间，线性实验应在短时间完成。理论上所 有数据应在一天内完成。 1.2.1.2. 实验条件的评估（实验条件的评估（Evaluating Experimental ConditionsEvaluating Experimental Conditions） 实验室只是验证线性范围，那只要在该范围内使用 5-7 个浓度，每个浓 度做 2 个复管。 如果是新方法要建立线性范围

2、，就要在预期测量范围内使用 7-11 个水 平。或者设定比预期水平更宽（20%-30%）的浓度水平，来确定线性范围。 要求每个水平做 2-4 个复管。 本实验采用的多项线性回归至少需要 5 个浓度水平。测试浓度越多，能 更好描述线性及说明更宽的线性范围。 本操作建议通过高值和低值混合血清以不同比例混合，等距离划分各水 平间浓度。当然也可以是各浓度不是平均划分。注意：准确吸样可以减少误差。 1.3.1.3. 基质的选择：按下例顺序选择理想基质基质的选择：按下例顺序选择理想基质 1） 患者血清是最理想的基质。即选择患者高值血清以及低值血清，将高值与低 值按比例进行线性稀释。 2） 用推荐稀释液稀释

3、患者血清：用厂商指定的或者由实验室证实的推荐稀释液 对患者高值血清进行线性稀释。 3） 在患者血清中增加分析物：如果加入物中不含有干扰物质，则对加入的分析 物无需高纯度级别。如果存在干扰物质，那么就必需在报告中注明如来源、 纯度、预期效应等。如果是使用的高浓缩液体分析物，则加入混合血清的量 要越少越好（0.05。回归系数bi=0。根据 P 值确定 b2 和 b3 是否 有意义，是否具有统计学上的非线性。 2.3.4 2.3.4 非线性度的估计非线性度的估计 如果统计检测发现 b2 和 b3 回归系数有意义，我们就要根据回归标准误 （Sy.x）来确定使用 2nd 还是 3rd 模型。哪个模型 S

4、y.x 小的，我们就选择哪个 模型。 计算每个水平下相对线性的偏离度 DL（deviation from linearity） DLi=p(xi)-(b0+bixi) 即在xi水平下，2 nd或 3rd 的检测值与 1st 检测值（线性）的差值。DL i可表示为 绝对量，也可表示为相对量，表示相对量时DLi = DLi / xi*100%。DL 只能在各 个水平的点上进行计算，不能在各点间的连续区间进行计算。 将每个水平的 DL 与每个水平预设的允许误差标准比较，如果 DL预设误 差标准，那么在该水平上可能存在非线性问题，遇到非线性问题，有以下两个处 理办法： 1） 试着找出造成非线性的原因如

5、样本准备、干扰、仪器校正等，可与厂商 专家联系。 2） 如果非线性是存在两端，那么去除两端，缩短线性范围。 2.3.5 2.3.5 随机误差的估计随机误差的估计 本操作主要通过计算重复性（repeatablity）来估计随机误差。 比较 SDr 与预设的允许误差水平，如果发现 SDr 明显大于允许误差 SD，那么 实验结果精密度很差，线性结果不可靠，需校正仪器或方法等寻找原因并纠正。 如果发现在校正后，SDr 仍和先前所测结果差不多，那么就要增加复管检测数， 这样可以减少大概 40%左右的均值标准误。 某些情况下，我们发现每个水平下的重复性差异都很大，这时候需要用到加 权线性回归模式，此模式运

6、用统计方式复杂，需统计学家帮助。 定量检测方法线性评价定量检测方法线性评价 ( (简便的统计处理简便的统计处理) ) 1.1. 操作流程操作流程 1.1.1.1. 时间要求（时间要求（Time requirementsTime requirements） 包括对仪器设备熟悉时间，线性实验应在短时间完成。理论上所 有数据应在一天内完成。 1.2.1.2. 实验条件的评估（实验条件的评估（Evaluating Experimental ConditionsEvaluating Experimental Conditions） 实验室只是验证线性范围，那只要在该范围内使用 5-7 个浓度，每个浓 度

7、做 2 个复管。 如果是新方法要建立线性范围，就要在预期测量范围内使用 7-11 个水 平。或者设定比预期水平更宽（20%-30%）的浓度水平，来确定线性范围。 要求每个水平做 2-4 个复管。 本实验采用的多项线性回归至少需要 5 个浓度水平。测试浓度越多，能 更好描述线性及说明更宽的线性范围。 本操作建议通过高值和低值混合血清以不同比例混合，等距离划分各水 平间浓度。当然也可以是各浓度不是平均划分。注意：准确吸样可以减少误差。 1.3.1.3. 基质的选择：按下例顺序选基质的选择：按下例顺序选择理想基质择理想基质 1） 患者血清是最理想的基质。即选择患者高值血清以及低值血清，将高值与低 值

8、按比例进行线性稀释。 2） 用推荐稀释液稀释患者血清：用厂商指定的或者由实验室证实的推荐稀释液 对患者高值血清进行线性稀释。 3） 在患者血清中增加分析物：如果加入物中不含有干扰物质，则对加入的分析 物无需高纯度级别。如果存在干扰物质，那么就必需在报告中注明如来源、 纯度、预期效应等。如果是使用的高浓缩液体分析物，则加入混合血清的量 要越少越好（40）。 另外，非恒定离散存在情况下，有标准统计方法可供人们选择，纠正回归分 析。这些方法包括转换数据（如对数回归和权数回归）。 6.6. 计算预期偏倚及其置信区间计算预期偏倚及其置信区间 6.1.6.1. 线性回归步骤（当数据范围合适，且为均匀恒定离

9、散的情况）线性回归步骤（当数据范围合适，且为均匀恒定离散的情况） 所谓残差是指在 y 轴方向，实测值与预期值的差。标准误估计（Sy.x）是残 差的标准差，描述了这些点离回归线的分散程度。： 对于（ ）图，残差： 对于（ ）图，残差： 对于（ ）图，标准误： 对于（ ）图，标准误： 在医学决定水平 Xc 处的预期偏倚 Bc： Xc 处预期偏倚 95%的置信区间： 使用第 4 节步骤来解释统计结果。 6.2.6.2. 用部分偏倚步骤计算平均偏倚（当数据范围不适合时）用部分偏倚步骤计算平均偏倚（当数据范围不适合时） 以 X 数值递增的顺序将数据列表，然后将数据分成低、中、高三组，使每组 内数据点大概

10、相同。以每个数据对的 X 值为基础进行分组，我们可以通过偏倚图 2N/3 末端点来确定这三个组的边界。标记这些数据点，并将这些点归到相应组 中做好记录。然后分别计算每组的平均偏倚： Nk：表示第 K 组中有多少个数据点 Ym:表示评价方法某一标本检测两次结果之和 Xm：表示比较方法某一标本检测两次结果之和 计算公式计算了组中每一配对点的差异以及这些差值的标准差。 表示表示每组浓度范围内预期（平均）偏倚。如果三组的平均偏倚都是相同的， 可以用三组偏倚的平均数（ ）表示。 医学决定水平并不依赖于数据通过何种方式被分解进入哪个范围内。如果医 学决定水平位于两个组之间界限， 那么移动分界线避免偏差估计

11、中的不连续性就 很有帮助。（或者选择较大的一个） 对于 Xc 选择合适的 K， 运用下面公式就可以给出预测偏差的 95%可信区间 （在 Xc 浓度医学决定水平）。 6.3 部分残差步骤计算偏倚（当数据出现非稳定离散） 如 6.2 节一样分三组，每组内含数据点大致相同。分组计算： Nk：表示第 K 组中有多少个数据点 Ym:表示评价方法某一标本检测两次结果之和 Xm：表示比较方法某一标本检测两次结果之和 在医学决定水平 Xc 处偏倚的估计： 偏倚 95%的置信区间 7.7. 结果解释，与可接受标准的比较结果解释，与可接受标准的比较 与实验室设定的性能要求比较， 一般以 CLIA88 允许误差的

12、二分之一或以生物学变异导出的分析质量目标作为可接受标准。 如果预期偏倚的 置信区间包含了允许偏倚， 那么实验数据就表明候选方法偏倚与允许偏倚无明显 差别。当置信区间没有包含允许偏倚，那么有两种情况： 1） 如果允许偏倚低于置信区间下限，那么就可以得出结论： 有很大的可能性（97.5%）预期偏倚大于允许偏倚，候选方法与现行方 法检测结果不等价，候选方法不能替换现行方法。 2）如果允许偏倚大于置信区间上限，那么就可以得出结论： 有很大的可能性（97.5%）预期偏倚小于允许偏倚，候选方法与现行方 法检测结果等价，候选方法能替换现行方法。 如果发现不等价，但仍然认为候选方法更特异，而不排斥新方法，那么

13、新方 法在投入临床常规检测前，要获得新方法的临床资料如参考范围。同时记住要对 两方法间的差值定义允许误差。仅是对精密度误差作出规定是不适合的，用个体 内的生物学变异做为误差判断限更适合。 用患者血清进行方法学比较和偏倚估计用患者血清进行方法学比较和偏倚估计 1.1. 方法对比实验方法对比实验 1.1.1.1. 评价样品评价样品 根据实验室可接受操作和厂商的推荐方法来收集和处理患者标本。 每份标本 用评价方法和比较方法各检测 2 次，尽可能标本选择 50%在参考范围外，50%在 参考范围内。 如果从一个患者样品中得不到足够量， 那么可以将两个 （不是多个） 患者的样品进行混合，这两个患者的被检物

14、质有相似水平以及患者有相似病史。 如果样品是全血，需要血清兼容才能混合。 1.2.1.2. 储存储存 储存时间和条件取决于分析测量物的稳定性。如果可能，要避免储存样品。 1.3.1.3. 剔除样品剔除样品 如果某样品被剔除排除不进行测量，记录排除原因。 1.4.1.4. 分析测量范围分析测量范围 比较方法的范围应该至少与检验方法的范围一样宽， 这样在分析测量范围内 评价方法与比较方法的偏倚可以进行比较。 1.5.1.5. 样品数量样品数量 至少分析 40 个样品。样品数越多就越能增加统计估计的置信度，并能增加 检出未知干扰物质影响的机会。 1.6.1.6. 样品检测顺序样品检测顺序 安排所选标

15、本顺序连续检测， 第二次检测复管时把先前的顺序颠倒过来再检 测。 顺序颠倒检测可以减少标本携带污染率和一批内复管平均值漂移的影响。尽 最大努力做到样品检测顺序随机化。例如：样品可以按 1，2，3，4，5，6，7， 8 及 8，7，6，5，4，3，2，1 顺序检测。 1.7.1.7. 时间和持续时间时间和持续时间 比较方法和检验方法应该在一个时间跨度范围内进行， 这个时间跨度不应该 超过 2 个小时。 2.2. 质量控制质量控制 在实验中要遵循实验室和/或厂商规定的质量控制程序，保存控制图，并且 用任一方法重新检测出现失控批的标本，直到检测数达到文件要求的样品数。 3.3. 记录剔除点记录剔除点

16、 仔细记录任何情况下的剔除数据，并写明引起原因和问题。 4.4. 检验检验 X X 取值范围是否适合取值范围是否适合 假设 X 变量是已知无误差。而在临床实验室中并不是这样，因为每个测 量都有内在固有误差。但是，如果数据范围足够宽，这种误差对回归估计的影响 就可以忽略。相关系数（r）可作为粗略估计 X 范围是否合适，从而确定范围是 否足够宽来克服 X 变量误差对回归估计的影响。 如果 r0.975（或 r20.95）时，X 的范围可以为是合适的。如果数据得 到的 r 值满足这个要求，X 的误差就足可以被数据的范围补偿，简单的线性回归 就可以被用来估计斜率和截距。 如果 r3S空白，则 该浓度为该方法检测该物质的 BLD。 4.3. 求功能灵敏度(FS)：根据多个近于检测限浓度的样品作无间断重复检测扣除空 白响应量后的样品检测响应量的