《石蜡切片(三)、染色(四)》由会员分享，可在线阅读，更多相关《石蜡切片(三)、染色(四)（27页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、实验三 石蜡切片法(三) 切片、贴片,一、实验原理,切片就是把包埋好的材料块用切片机切成所需要的厚度的切片带。 贴片是用粘贴剂把切片平铺贴在载玻片上，以便于染色。,二、实验用品,(一) 器材 切片机，切片刀，磨刀机或磨刀石，单面刀片，展片台，酒精灯，温度计，蜡铲，台木，毛笔，蜡带盘，载玻片，镊子。 (二) 试剂 粘片剂，氯仿。 (三) 材料 已包埋好的蜡块。,三、实验程序,(一) 切片 (二) 贴片 附：常用的粘片剂 1蛋白甘油亦称为梅氏蛋白(Mayers albumen) 蛋白 50mL 甘油 50mL 水杨酸钠(防腐剂) lg,2郝普特氏明胶粘片剂(Haupts gelatine fixa
2、tive) 明胶 l g 蒸馏水 100ml 石炭酸 2g 甘油 15mL,实验四 石蜡切片法(四) 染色、封藏,一、实验原理 1染色的一般原理 细胞和组织的不同结构之所以能被染成各种不同颜色，是由于染料对它们所起的物理或化学的综合作用。 (1) 物理作用：渗透、 吸收、吸附 (2) 化学作用,2封藏的原理 封藏是使已经透明的材料，保存在适合折光率的封藏剂中(如封藏剂加拿大树胶的折光率为1.52，它与玻璃的折光率1.51很接近)，使材料能在显微镜下清晰的显示出来，并能长期保存。,二、实验用品,(一)器材 染色缸，酒精灯，树胶，树胶瓶，镊子，盖玻, 显微镜。 片, (二)试剂 酒精(30、50、
3、70、80、95、100)。 染色液(0。5苏木精)，4铁明矾，2铁明矾。 (三)材料 已切好的石蜡切片。,下面以海登汉铁矾苏木精染色法为例介绍如下。,(1) 将用二甲苯脱蜡的切片放入二甲苯和纯酒精的混合液中浸10min。 (2) 用纯酒精处理510min。 (3) 放入95、90、80、70、50、30的酒精中各25min。 (4) 水洗1min。 (5) 用2或4铁明矾水溶液媒染0.52 h。 (6) 水洗5min。 (7) 蒸馏水中更换数次约35min。 (8) 0.5苏木精中染色1-24 h。,(9) 在清水中冲洗5min。 (10) 2铁明矾水溶液分色(在显微镜下观察是否适度)。 (
4、11) 流水冲洗1030min。 (12) 入30、50、70、80、90、95、100的酒精中顺次脱水，每级35min。 (13) 放入纯酒精和二甲苯的混合液(1:1)中5min。 (14) 入二甲苯5min。 (15) 用加拿大树胶封藏。,附：常用的染料的性能及其配制方法,生物学上用的染料，按其来源可分为两大类，一类是天然染料，一类是人工染料。 天然染料是从动植物体中提取出来的，日常用的有苏木精、洋红、地衣红、靛青等。 最早的人工染料是由苯胺制成的，所以常称为苯胺染料。但以后多数的人工染料是由煤焦油中提取出来的。下面介绍常用的染料的性能及其配制方法。,一、天然染料,1苏木精 苏木精是由洋苏
5、木中提取出来的物质，氧化后形成苏木红，加入媒染剂(各种明矾)具有良好的染色作用，为最常用的染料之一。配成的苏木精溶液必须放置一定时间促其氧化(成熟)，成熟过程所需要的时间较长(至少4周)，如果急用，可往溶液中加入过氧化氢或碘酸钠等氧化剂，使之加速氧化，然后才能使用。,常用的苏木精配方有：,(1)海登汉(Heidenhain)氏铁苏木精 甲液(媒染剂) 铁明矾(即硫酸铁铵) 24 g 蒸馏水 100ml (甲液必须在用时配制，保持新鲜) 乙液(染液) 苏木精 0.5g 纯酒精或95酒精 10mL 蒸馏水 90mL 苏木精溶于酒精中，然后加蒸馏水混合，置于广口瓶内，用纱布缚住瓶口，静置使其氧化，4
6、周成熟后使用。,(2)埃利希(Ehrlich)氏苏木精：,苏木精 1g 纯酒精(或95酒精) 50ml 冰醋酸 5ml 甘油 50ml 钾矾(硫酸铝钾) 约5g(饱和量) 蒸馏水 50ml,配法： 将苏木精溶于约15mL的纯酒精中，再加冰醋酸后搅拌。 当苏木精溶解后即将甘油倒入并摇动容器，同时加入其余的酒精。 将钾矾在研钵中研碎并加热，然后将它溶解于水中。 将温热的钾矾溶液一滴一滴地加入上述染液中，并随时搅动。 此液混合完毕，将瓶口用一层纱布包着小块棉花塞起来，放在暗处通风的地方成熟时间约34周。若加入02g碘酸钠，可立刻成熟。 此液稳定而染色均匀，染核效果良好，不会发生沉淀，长期贮备无妨。
7、此液可分别与伊红(enosin曙红)，橙黄G，番红进行二重染色。,(3)哈里斯(Harris)氏苏木精：,甲液： 苏木精 0.5g 95酒精 5ml 乙液： 钾矾或铵矾 10g 蒸馏水 100ml 氧化汞 0.25g 冰醋酸 几滴 配法： 将0.5g苏木精溶解于5ml 95%酒精中。 溶解10g钾矾或铵矾于100ml的蒸馏水中，并加热煮沸。 将上述两液混合煮沸0.5min，并加入氧化汞。 移入冷水中冷却。 冷却液过夜后用双层滤纸过滤，并加入几滴冰醋酸。,2洋红(Carmine),洋红又称卡红。是从一种热带昆虫胭脂虫的雌性虫体中提取的。 洋红为核的优良染料，染色标本不易褪色，用作切片或组织块染色
8、均适宜，特别适宜于小形材料的整体染色。,常用的有下列几种配方：,(1)硼砂洋红： 洋红 3g 70%酒精 100mL 硼砂 4g 蒸馏水 100mL 先将洋红溶于酒精中，硼砂溶于蒸馏水中，然后将两液充分混合，加热至沸腾，放置冷却，12d后过滤使用。,(2) 明矾洋洋红：,洋红 lg 铵明矾(硫酸铝铵) 10g 蒸馏水 100mL 先将铵明矾溶于蒸馏水，再将洋红加入铵明矾水中煮沸，用玻棒充分搅和使洋红溶解，冷却过滤后，加入少许防腐剂。,(3) 醋酸洋红,洋红 45g 冰醋酸 45ml 蒸馏水 55ml 将洋红粉加入水及醋酸中，在小火焰上加温，煮沸用玻棒搅和使其溶解，冷却后过滤，用时加入99ml蒸
9、馏水稀释。,二、人工染料,人工染料种类甚多，下面仅介绍几种常用的。 1碱性染料 (1) 番红(safranin)：在植物制片中可以说是应用最广的一种染料，尤其对于高等植物中木质化细胞及角质化组织的染色。对核分裂染色体的染色以及花粉和孢子的染色都可以收到良好的效果。而且这种染料，几乎可以与其他任何染料配合在一起，用作双重、三重或四重染色。,(2) 碱性品红(basic fuchsin)：碱性品红为强力的细胞核染料，对粘液、弹性纤维、轮藻、原球藻及细菌等的染色都有较好的效果。碱性品红可溶于酒精和水，在酒精中的溶解度大。 (3) 美蓝(亚甲蓝methyleneblue)：美蓝的染色范围很广，是重要的
10、生物染料之一，美蓝可用于神经组织和核仁的活体染色，也是最常用的血液染色剂。,(4) 结晶紫(crystal violet)：结晶紫应用范围较广，动物、植物、微生物方面的材料都可使用。结晶紫溶于水和酒精，配制方法可因用途而异。,2酸性染料,(1) 固绿(fast green)：固绿是植物制片上最常用的染料之一。能溶于水和酒精，但在酒精中的溶解度比水大。通常多与番红对染，并可以加进橙黄G成三重染色，再加入结晶紫成四重染色等。,(2) 酸性品红(acid fuchsin)：酸性品红广泛地应用于动物材料的染色，可染动物细胞的细胞质、细胞核。也可染植物组织，对髓部薄壁细胞的染色具有良好的作用。还可染胚囊、花粉以及寄生于动、植物组织中的霉菌等。,(3) 伊红(曙红) (eosin)：伊红是最优良的动物细胞染料，常与苏木精对动物组织进行对比染色。 伊红能溶于水和酒精。 (4) 苏丹III(sudan lll)，苏丹IV(sudan lV)：这两种染料专染脂肪组织，染后呈新鲜的橙红色或红色。两者的结构只差两个甲基，性质基本相同，但苏丹IV所染的颜色比苏丹III深，效果优于苏丹III。两种染料也可染植物角质和树脂等部分。,
