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1、医学细胞生物学实验,细胞生物学与遗传学教研室,第二次实验, 细胞内酸性蛋白和碱性蛋白的原位显示 细胞内DNA和RNA的原位显示,实验目的,1.掌握酸、碱性蛋白以及DNA和RNA在细胞内的分布情况； 2.了解酸、碱性蛋白以及DNA和RNA显色反应的原理和方法。,实验原理,由于不同蛋白质分子所带酸性基团和碱性 基团数量不同，生理条件下，整个蛋白质 带负电荷多则为酸性蛋白，带正电荷多则 为碱性蛋白。可用不同pH值的固绿染色， 即可显示细胞内酸性蛋白或碱性蛋白。 核酸的存在会影响实验结果 用三氯醋酸处理,甲基绿和派洛宁是互不混淆、互不影响的两种染色剂，由于其自身分子结构的特点，它们可与两种聚合程度不同
2、的核酸竞争性结合，从而同时显示细胞内DNA和RNA的分布部位。,实验用品,95%乙醇 三氯醋酸 甲基绿-派洛宁 0.1%酸性固绿 0.1%碱性固绿,操作流程,氯仿麻醉,取心脏血,晾干,20min,90 三氯醋酸,95%乙醇，5-10min,2张,1张,(3张),0.1%酸性固绿 5min,0.1%碱性固绿 45min,晾干,镜检,洗涤,晾 干,洗 涤,甲基绿-派洛宁 10min,染 色,洗涤,1 min,两人一组，每组制3张血涂片 其中只有2张血涂片需经过三氯醋酸处理（为什么？）,注意事项,结果观察,酸性蛋白,碱性蛋白,DNA和RNA的显示,请回答细胞化学法在本次实验中的应用。 通过本次实验学
3、到哪些基本操作技能？ 请描述本次实验的显微观察结果。,作业,评价本次实验的得失 本次实验需要巩固的概念 细胞化学法 本次实验需要掌握的实验技能 1. 血涂片制作方法 2. 染色的规范操作方法 3. 洗涤方法（流水冲洗） 4. 正确的镜检方法（显微观察技术）,小结,欢迎同学们提问！,1. 完成实验报告； 2. 将动物尸体送到实验室门口动物尸体篓； 3. 清洗并检查自己桌面上的器材（弯盘、镊子等是否齐全）； 4. 做好显微镜使用登记，盖好防尘罩； 5. 将用过的载玻片刷洗干净后放入回收盆中; 6. 盖玻片、吸水纸等扔到垃圾桶中。 （弃入水槽中会引起下水道堵塞）,镜检后作业与工作,值日生工作： 1、检查显微镜 2、清点检查器材 3、清洁公共实验区、打扫卫生 4、送交动物尸体 5、检查水电门窗安全,
