流式细胞仪中文手册

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1、 仪器操作手册 仪器操作手册 本手册根据标准配置的 CyFlow Space 编写而成，具体内容根据实际配置 可能有所偏差，手册内容应以实际配置为准。 CyFlow Space 仪器操作手册 CyFlow Space 仪器操作手册 页码 页码 3 内 容 内 容 CyFlow Space 介绍4 典型分析步骤5 基本操作6 CyFlow Space 介绍4 典型分析步骤5 基本操作6 启动 CyFlow Space6 多激光测量7 开始检测8 关闭 CyFlow9 液量绝对计数（定量）-概述10 如何执行液量绝对计数12 光路几何示意图13 光路图标准设置-参数14 仪器设置15 参数设置对话

2、框：脉冲信号高度、面积和宽度16 触发17 光电倍增管（PMT）电压，增益和对数放大18 样本进样速度19 阈值：L-L（低值）和 U-L（高值）20 附录21 附录21 安装要求21 仪器安装-概要22 仪器安装-顺序23 流动室精细校准24 流动室25 维护和服务26 运输和储存26 污染物处理26 安全使用激光器的说明27 CyFlow Space 技术规格表28 Partec 推荐使用体外诊断试剂 IVDPartec 推荐使用体外诊断试剂 IVD Partec CyFlow Space 型流式细胞仪符合欧洲 98/97/EC 标准，已经取得欧 洲 CE 认证。 Partec CyFlo

3、w Space 型流式细胞仪符合欧洲 98/97/EC 标准，已经取得欧 洲 CE 认证。 C C2007 Partec GmbH Otto-Hahn-Str.32 D-48161 2007 Partec GmbH Otto-Hahn-Str.32 D-48161 Germany Germany CyFlowCyFlow Space 仪器操作手册 Space 仪器操作手册 页码 4 页码 4 CyFlow Space 介绍介绍 Partec CyFlow Space 是什么？是什么？ CyFlow Space 有哪些用途？有哪些用途？ 本手册涉及内容？本手册涉及内容？ 其他要用到的说明书？其他

4、要用到的说明书？ 操作操作 CyFlow Space 前应该具备哪些知识？前应该具备哪些知识？ Partec CyFlow Space是一台配臵全面的桌面式/ 便携式流式细胞仪（FCM） 。它的特色即设计理 念是可以配备 3 个激光光源， 和 1 至 9 个光学通 道（参数） ，通过简单地更换光学滤片或镜片可 以满足任何实验的需求。 CyFlow Space 在台式电脑或笔记本电脑下运 行，数据采集、仪器控制和数据分析均由 FloMax软件控制并执行。 CyFlow Space 免费配套软件，提供常规的自动 化操作， 并能灵活应用在任何流式细胞术的各种 研究过程中。 这些用途包括： 免疫分型的

5、常规和科研应用 血细胞分析、HIV 监测 白细胞计数、比例分析 微生物分析 发酵控制 浓度分析绝对计数定量分析 细胞大小和荧光分布分析 CyFlow Space 仪器操作说明书包括 CyFlow Space 仪器的基本操作和维护。但不包含与软 件相关的细节， 不同仪器的配套软件的使用方法 也不同。 FlowMax 数据获取和仪器控制，涉及仪器控 制和多参数数据获取。 FlowMax 数据分析，涉及在线和离线数据分 析的各个方面。 用途注解、指导和维修手册用于学习起步，包 括如何达到最佳结果的提示。 阅读本手册将使您掌握了流式细胞仪的基本知 识。 但最好有熟练的流式细胞仪操作人员在旁随 时辅助您

6、。 另外， 从流式细胞仪的基本书籍中也 可获得帮助。（例如： Howard M. Shapiro, Practical Flow Cytometry. Wiley 2002） CyFlowCyFlow Space 仪器操作手册 Space 仪器操作手册 页码 5 页码 5 Partec 分析过程的典型步骤分析过程的典型步骤 1. 细胞在悬浮液中通过不同的荧光标记染色而 被分离。 细胞在悬浮液中通过不同的荧光标记染色而 被分离。 2. 激光器发出来的光照到细胞表面，细胞被照 射后散射出荧光和散射光。 激光器发出来的光照到细胞表面，细胞被照 射后散射出荧光和散射光。 3. 荧光信号显示在直方图和散

7、点图中，并在每 个图中进行分析。 荧光信号显示在直方图和散点图中，并在每 个图中进行分析。 1. 制备和染色制备和染色 对于流式细胞仪分析， 细胞必须在悬浮液中彼此 离散。 一般， 如果他们自身不能产生足够的光信 号， 则需要一种或更多荧光染色剂对其标记， 荧 光分子被目标细胞物质吸收，如 CD4-,CD45-抗 体与白细胞表面抗原结合。 荧光染料结合率与细 胞表面抗原的多少成正比。 充分准备适合的试剂 是准确分析的必要条件。 通过检查荧光显微镜的 染色情况可以解决准备过程中出现的问题。 2. 流式细胞仪分析流式细胞仪分析 细胞逐一经过流动室时，单独接受激光的照射。 由于激发效应， 荧光分子发

8、出有独特波长的荧光 （发射波长谱） 。通过滤光片，该荧光束分解成 不同波长范围范围。 针对细胞个体分析其波长范 围的强度。 除荧光外，还同时测量每个细胞的物理光强度。 散射光在光源前向角（FSC）和侧向角测量 （SSC） 。散射光强度代表细胞的大小和形态。 散射光用于荧光分析前确认细胞， 但细胞也可于 散射光特性分析前由荧光确认。 3. 实时数据处理和结果实时数据处理和结果 每一参数的光强度， 以及伴随的目标颗粒数可在 1216或 65536 个通道中被收集， 当细胞经过流 动室时， 其信息将被软件实时收集。 单参数直方 图将显示光通道内的细胞数。 双参数点图将显示 两种细胞特性间的关联程度。

9、 4. 细胞绝对计数细胞绝对计数 由于 CyFlow Space 可以分析到细胞悬液中的 所有细胞， 并能同时精确监控样本流体积， 它能 完成分析过程中的体积计数， 即测定任意细胞亚 群浓度， 并定义细胞亚群， 其浓度可在后期从文 件夹载入数据后再进行分析 （即进行离线分析） 。 CyFlowCyFlow Space 仪器操作手册 Space 仪器操作手册 页码 6 页码 6 基本操作基本操作启动启动 CyFlow Space 注意：注意： 关于鞘液，您可以使用 Patec 生产的原装鞘液，也可以使用 自己制备的鞘液。 制备鞘液，将蒸馏水注入玻璃 瓶或三角瓶，同时用小孔径 （0.2m）滤网过滤

10、，然后 用真空泵（如水泵）抽去水中 气体。将瓶中液体摇匀约 15 分钟。 记住：您分析的颗粒越小，越 要求严格清洁鞘液。 注意：要至少每周或每次使用 前更换一次鞘液。 怎样在 Windows下工作，请 参考手册微软 Windows 介 绍或相关书籍。 1. 检查鞘液和废液瓶检查鞘液和废液瓶 确认鞘液瓶已充满不超过 1600ml 清洁鞘液。该 鞘液已过滤， 并且与鞘液瓶相连的管路内无气泡 存在。最后将鞘液瓶密封。 确认废液瓶已经排空。 2. 开机开机 CyFlow Space 可在 100240V 交流电下操作。 打开仪器左侧的主电源开关， 并随后打开 488nm 激光器开关， 488nm 激光

11、器开关在主电源开关旁 边。 其它激光器开关均由软件控制 （细节请参考下一 页） 。 3. 调整调整 488nm 激光器的输出功率（仅限于激光器的输出功率（仅限于 200mw 激光器） 。激光器） 。 200mw激光器的功率调节范围在50200mw之 间，如需调整功率，请双击如左侧显示的图标 （488200） 改变功率请输入： P=功率数值，然后按确认键 查询当前功率值请输入： ？P，然后按确认键 4. 打开附属装臵打开附属装臵 打开打印机。 5. 打开计算机打开计算机 最后打开计算机电源开关。 大约几十秒钟后， 出 现 Windows桌面。 6. 启动仪器操作软件启动仪器操作软件 移动鼠标按钮

12、至 FloMax, 或其他仪器控制图 标。 鼠标左键双击图标。 几秒钟后， 显示Flomax Welcome Window (FloMax欢迎窗口)。此时， CyFlow Space 开始进行初始化，并自动读取上 次使用的仪器设臵。 点确定，显示空直方图。 7. 清洗清洗 将运行速度调到 4。运行 1.6ml partec 原厂绿色 清洗液（Cleaning Slolution） ，再运行 1.6ml 蒸 馏水，最后依次点击 4 次清洗（Clean）按钮。 现在 CyFlow Space 已完成标本运行的准备。 CyFlowCyFlow Space 仪器操作手册 Space 仪器操作手册 页码 7 页码 7 危险危险 警告：生物安全性警告：生物安全性 多激光测量多激光测量 注意注意 激光器的调整必须由激光器的调整必须由 partec 工程师或您所工程师或您所 在地经销商完成。在地经销商完成。 CyFlow Space 根据用户的需求可以最多安装 3 个激光光源。 因此， 您目前使用的设备可能与其