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1、实验五 培养基的制作,(一)实验目的要求,1、掌握培养基的制作程序; 2、熟悉常用培养基的种类及用途; 3、掌握培养基的消毒灭菌技术。,(二)培养基的成分、种类和用途,1、培养基的概念:是指人工配制的适合细菌生长繁殖的综合营养基质。 2、培养基的营养物质:蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖醇类、血液、鸡蛋和动物血清、生长因子、无机盐类、水 3、培养基的其它成分:凝固剂、抑制剂、指示剂,4、培养基的种类和用途,基础培养基:培养营养要求不高的细菌,如普通平板 营养培养基:能满足营养需求较高细菌的生长,如血平板 鉴别培养基:含有某些特定的底物,用于鉴别细菌,如克氏双糖培养基(KIA) 选择培养基:具有选择性
2、抑制作用,用于选择性的培养目的菌,如SS平板; 增菌培养基:促进目的菌的生长,适用于含菌量较少的标本,如葡萄糖肉汤; 厌氧培养基:用于培养厌氧菌,(1)按用途分类:,(2)按物理性状分类:,液体培养基:不含凝固剂,用于增菌和接种纯种细菌。 半固体培养基:含0.30.5琼脂,用于观察细菌的动力。 固体培养基:含22.5琼脂,多用于细菌的分离培养。,(三)实验器材,常用玻璃器材:培养皿、试管、烧杯、三角烧瓶、玻棒等。 培养基的成分:普通琼脂培养基、蛋白胨、牛肉浸膏、NaCl、琼脂粉等。 称量工具:普通天平、电子天平。 灭菌器材:高压蒸汽灭菌锅等。 培养基的制作:无菌室、超净工作台。,高压蒸汽灭菌锅
3、(121.3 15-20min),干烤箱,用途: 1、适用于玻璃器皿、粉剂等的灭菌; 温度160170,时间2h。 2、用作烘干。 高压蒸汽灭菌后的某些物品如平板的烘干 温度 60 ,超净工作台,(四)实验方法,玻璃器材的清洗 新购置的玻璃器材:12盐酸浸泡清水清洗 用过的无污染器皿:洗涤剂洗刷清水清洗 细菌污染的器材:消毒灭菌后再洗刷 盛培养基试管和平皿:高压灭菌趁热倒出洗涤剂洗刷清水冲洗; 吸管:3来苏浸泡清水冲洗; 玻片和盖玻片:3来苏和清洁液浸泡清水冲洗;染色后的玻片,应肥皂水煮沸10min再洗涤; 含油脂的器皿:单独灭菌。,1、常用玻璃器材的准备,玻璃器皿灭菌前的准备,玻璃器皿在清洗
4、、干燥后必须经正确的包裹和加塞后才能进行灭菌处理。 灭菌方法:干烤灭菌法,2、培养基制备的一般程序,称量,溶化,分装,灭菌,倒平板,培养基灭菌方法, 基础培养基:121.3高压蒸汽灭菌15分钟, 含糖培养基:113 灭菌15分钟, 鸡蛋、血清培养基:间歇灭菌3天3次, 不耐高温的液体成分:滤过除菌,保存,成分: 牛肉浸膏(0.2g) 蛋白胨(0.5g) 氯化钠(0.25g) 50mldH2O等。 程序: 称量;熔化;分装(试管);灭菌;保存,(1)液体培养基的制作,2.半固体培养基:在肉汤中加入0.2%0.5%的琼脂即成。25ml肉汤中0.1g琼脂粉。,程序:称量;熔化;分装(试管);灭菌;保存,3.固体培养基: 在肉汤中加入2%3%的琼脂即成;或直接用营养琼脂粉配置。,平板制作程序:称量3.5g营养琼脂粉配100ml固体培养基。 称量;熔化;分装(三角烧瓶);灭菌;倒平板;保存,试管斜面制作程序: 称量;熔化;分装(试管);灭菌;斜置;保存,要求配置的培养基量(每组),6人一小组,每组需配培养基: 液体培养基:30ml/2人,溶解,试管6根 半固体培养基:30ml/2人,溶解,试管6根 固体培养基:120ml/2人,溶解, 试管6根制备斜面,余下灭菌后倒平板(6个) (中午1点10分,来几位同学倒平板) 完成实验报告一份,