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1、药学实验教学中心 伍小波,药理学实验,实验一 药理实验基础知识 实验二 不同给药途径对药物效应的影响 实验三 药物的协同作用和拮抗作用 实验四 硝酸士的宁LD50的测定 实验五 利尿药对家兔尿量的影响,实验一 药理实验基础知识,一、目的 1.掌握基本操作,锻炼动手、动脑能力; 2.更好地掌握药理学基本理论知识; 3.培养科学思维,二、 基本要求 1. 实验前:预习实验内容并复习相关理论知识; 2. 实验时 实验器材要妥善保管; 实验操作按步骤进行,仔细观察实验中出现的现象,实事求是地做好记录; 注意节约实验药品; 维持良好的课堂纪律。 3. 实验后 各组同学将实验动物处死,实验台擦干净,将实验
2、方盘送回准备室; 值日生搞好实验室卫生,将死亡动物送至指定场所; 书写实验报告。,三、实验报告的书写 1.题目 2.目的 3.原理 4.材料:实验动物,器材,药品 5.方法:用自己的语言简单扼要描述出来; 6.结果:要求真实、清楚; 7.讨论:将实验结果进行比较、分析;实验中有哪些不足之处;结果异常或失败的原因; 8.结论:将实验结果进行归纳总结,应带有提示性质。,四、实验设计基本原则 1.随机原则 使每一实验对象都有同等的机会抽到实验组或对照组中,除处理因素外其他因素尽可能均衡一致,从而抵消非实验因素的影响。 2.对照原则 组间对照:阴性对照,阳性对照,同因素不同水平对照; 自身前后对照 3
3、. 重复原则,五、实验动物 1.动物的选择 小白鼠:适用于需大量动物的实验,如某些药物的筛选,半数致死量的测定。也较适用于避孕药实验、抗炎镇痛药实验、中枢神经系统药实验、抗肿瘤药及抗衰老药实验等。 大白鼠:比较适用于抗炎药物实验,血压测定、利胆、利尿药实验,也可用于进行亚急性和慢性毒性实验。, 豚鼠:因其对组胺敏感,并易于致敏,故常被选用于抗过敏药、平喘药和抗组胺药的实验。也常用于离体心脏、心房、肠管实验。又因它对结核敏感,常用于抗结核病药的实验。 家兔:常用于观察研究脑电生理作用,药物对小肠的作用。由于家兔体温变化敏感,也常用于体温实验,用于热原检查。 狗:狗是记录血压,呼吸最常用的大动物。
4、还可利用狗做成胃瘘、肠瘘,以观察药物对胃肠蠕动和分泌的影响。在进行慢性毒性实验时,也常采用狗。,2.实验动物的编号 狗、兔等较大的动物可用特制的铝质号码牌固定在颈部或耳上。大鼠、小鼠如为白色可用黄色苦味酸在不同的体表标志上标记。,3.麻醉药的选择 局部麻醉:常采用2普鲁卡因做皮下浸润注射,可用于局部手术。 全身麻醉: 吸入麻醉:可将乙醚蘸在棉球上放入玻璃罩内,利用乙醚挥发的性质,经肺泡吸收,作用较快,适用于小鼠、大鼠短时间麻醉。 注射麻醉:常用戌巴比妥钠和乌拉坦。,4.动物捉拿及固定方法 小白鼠 右手抓住其尾部放在鼠笼盖铁纱网上,用左手拇指及食指沿其背部向前抓起颈背部皮肤,并以左手的小指、无名
5、指固定其尾部,便可将小鼠固定在手上。 大白鼠 用右手提起尾部,放在粗糙面上,左手的拇指和食指捉其头部,其余三指夹住背腹部即可固定。, 豚鼠 豚鼠性情温和不咬人,用手握住躯干即可。 家兔 可用一手抓住家兔颈背部皮肤,将兔提起,另一手托其臀部,使兔呈坐位姿势。在进行仰位手术操作时,可用绳带将其四肢仰位捆绑在兔手术台上。头部用兔头固定夹固定。,5. 动物的给药方法 小白鼠 灌胃法(i.g.):以左手固定小鼠后,使其腹部朝上,颈部伸直。右手持配有灌胃针头的注射器,自口角插入口腔,再从舌面沿上腭进入食道。小鼠灌胃容量一般为0.1-0.3m110g。 腹腔注射(i.p.):以左手固定小鼠,方法同灌胃,右手
6、持注射器,取30度角将针头从下腹部向头端刺入腹腔。进针部位不宜过高,刺入不宜太深,以免伤及内脏。小鼠腹腔注射量一般为0.1-0.3mll0g。, 皮下注射(s.c.):用左手固定小鼠后,右手持注射器于拇指和食指捏起的皮肤处进针即可。 静脉注射(i.v.):将小鼠置于特制的固定筒内或倒置的大漏斗下,让其尾部露出。用酒精或二甲苯涂擦尾部,或将鼠尾在50C热水中浸泡半分钟使血管扩张。左手拉尾端,右手持注射器将针头刺入尾静脉,推入药液。, 家兔 灌胃:需两人合作进行。一人取坐位用两腿夹持兔身,左手握家兔双耳,右手抓住两前肢。另一人将木制开口器横插家兔口内,压住舌头并固定之。取8号导尿管从开口器中部小孔
7、插入食道。插管时如误入气管会出现动物的挣扎和呼吸困难。也可将导尿管的外端浸入水中,如有气泡吹出,表示插在气管内,此时应拔管重插。当判明导尿管在食道以内后,用注射器接通导尿管将药液推入。, 皮下、腹腔注射:给药方法基本上同小鼠,唯针头可稍大,给药量可稍多。皮下与肌内为0.5-1.0/mg,腹腔为1.0-5.0ml/mg。 静脉注射:将家兔置固定箱内,拨去耳壳外缘的毛,选择一条比较明显的耳缘静脉,用酒精棉球涂擦皮肤,使血管显露。用左手拇指和中指捏住兔的耳尖部,食指垫在兔耳注射处的下面,右手持注射器,将针头从近耳尖处刺入,当确认针头在血管中后,将药液推入。,6.动物的处死:大、小鼠通常用颈椎脱臼法处
8、死。,实验二 不同给药途径对药物效应的影响,一、实验目的 观察不同给药途径对药物效应的影响。,二、实验材料 lml注射器、针头、小鼠灌胃针头、烧杯、普通天平、3.5硫酸镁溶液,三、观察指标 动物活动增加情况、呼吸急促、反射亢进、震颤、惊厥及死亡时间、炭末推进率等。,四、实验方法 取禁食12h的昆明种小鼠3只,称重,分别标为对照组、灌胃组和腹腔注射组按以下给药: A:对照组:灌胃给生理盐水0.2ml/10g; B:灌胃组:灌胃给3.5硫酸镁溶液0.2ml/10g; C:腹腔注射组:腹腔注射给3.5硫酸镁溶液 0.2ml/10g。,给药后注意观察动物的活动情况,是否有肌肉松弛的表现。15min后每
9、只小鼠均灌胃给予5%炭末阿拉伯胶混悬液0.2ml。炭末灌胃后15min,将小鼠脱臼处死,剖开腹腔,取出胃肠道。剪去附着在肠管上的肠系膜,将肠管不加牵引地轻轻地平铺在玻璃板上(玻璃板上滴少许盐水)。以幽门为起点,测量炭末在肠管内的移动距离和小肠(自幽门至回盲部)的全长,计算每只小鼠炭末的移动距离占小肠全长百分率,比较3组动物的活动状况和胃肠炭末推进率有何不同。,五、实验结果 实验结果填入下表中 不同途径对药物效应的影响,六、思考讨论题 1、灌胃和腹腔注射给硫酸镁的效应有哪些不同?为什么? 2、本次实验结果对临床用药有何提示?,实验三 药物的协同作用和拮抗作用,目的 观察激动剂与拮抗剂之间的相互作
10、用 材料 兔子只,0.05%硫酸阿托品注射液,0.1%盐酸肾上腺素注液,0.2%硝酸毛果芸香碱注射液,方法 、取兔放于兔固定箱内固定,避免阳光直射眼睛,用毛剪剪去兔两眼睫毛,然后用瞳孔量尺测量瞳孔大小,连续三次,取平均值。 、在兔左眼滴入.2%毛果芸香碱3滴,滴药时用姆指和食指将下眼睑提起,使成囊状,再用中指压住鼻泪管开口处,防止药液流入鼻泪管而不起作用,再用右手滴入药液。15分钟后再测量瞳孔大小,连续三次,取平均值,并进行比较。,3、滴入毛果芸香碱20分钟后,分别在两眼滴入0.1%肾上腺素3滴,15分钟后测量两瞳孔大小,连续3次,取平均值并进行比较。 4、滴入肾上腺素15分钟后,分别于两眼滴
11、入0.05%硫酸阿托品注射液3滴,15分钟后观察两眼瞳孔变化,并测量其大小,连续3次,并取平均值。,记录,讨论题 从实验结果中如何说明药物的协同作用和拮 抗作用?,实验四 硝酸士的宁LD50的测定,一、毒理学实验方法 1.急性毒性实验:一次性大剂量给予药物后观察药物的作用; 2.慢性毒性实验:长期连续多次给予中、小剂量的药物,观察动物一些器官的慢性受损程度; 3.特殊毒性实验:致癌,致畸,致突变,过敏反应等。,二、LD50的测定 1.优点:方法简单易行,所用动物小白鼠价廉易得; 2.方法 简化机率单位法:要求每组动物数相同,每组剂量呈等比关系,数据不能出现倒置; bliss法:计算准确 改进寇
12、氏法、目测法等。,三、具体实验(以硝酸士的宁为例),目的通过实验学习测定LD的方法、步骤和计算过程,了解急性毒性实验的常规方法。 材料 1.动物:昆明种小白鼠(体重18-22g,雌雄各半) 2.器材:注射器、鼠笼、天平 3.药品:0.008硝酸士的宁溶液,苦味酸溶液。 硝酸士的宁是较强的致惊剂,它为脊髓抑制性神经递质甘氨酸受体的拮抗剂。它的作用快,中毒30min内即可导致动物惊厥,窒息死亡。,实验方法 1、预实验:取小白鼠8-10只,以2只为一组,分为4-5组,选择一系列剂量,分别按组腹腔注射士的宁溶液,观察出现的症状并记录死亡数,找出引起10和90死亡率剂量的所在范围。 在预备实验所获得的1
13、0和90致死量的范围内,选用几个剂量,0.10ml/l0g、0.12ml/l0g、0.14ml/10g,0.17ml/10g、0.20ml/10g、0.24ml/10g (剂量按等比级数排列,剂量间的比例一般用1:0.7-1:0.85),使一半组数反应率在10-50,另一半组数反应率在50-90之间,各组的动物数应相等,一般每组可用10-20只,动物的体重和性别要均匀分配。,2、正式实验 每组取12只小鼠,称重,标记,随机分为6个计量组,每组2只,分别i.p.0.008硝酸士的宁0.10ml/l0g、0.12ml/l0g、0.14ml/10g,0.17ml/10g、0.20ml/10g、0.2
14、4ml/10g; 3、给药后观察并记录中毒症状,30分钟后记录各组的死亡小鼠数。,实验结果 全班结果汇总,计算硝酸士的宁的LD50、LD50的可信限和可信限率。 ()结果处理 实验资料按下表列出:,讨论题 什么叫?测定的意义和根据是什么?,实验五 利尿药对家兔尿量的影响,一、利尿药 1.定义:是作用于肾脏,增加电解质和水的排出,使尿量增多的药物。 2.分类:根据利尿药的作用部位,可分为高效、中效和低效利尿药 3.呋塞米为高效利尿药 利尿作用特点 作用机制 临床应用 不良反应,二、利尿药的实验方法 1.动物选择 可用大白鼠、小白鼠、家兔、猫和狗,其中以大白鼠较为常用。 2.实验方法 代谢笼实验法
15、:适用于大、小白鼠; 直接自输尿管或膀胱收集尿液:适用于较大动物(家兔、猫、狗)。,三、具体实验 目的 1. 了解急性利尿的实验方法; 2. 观察速尿对麻醉兔的利尿作用。 材料 1. 动物:家兔 2. 器材:兔手术台、量筒、注射器、手术 器械 3. 药品:25乌拉坦,1速尿,方法 1.麻醉:取家兔一只,称重,耳缘i.v. 25乌拉坦4ml/kg; 注意:注射速度要缓慢,随时观察角膜反射,反射消失即停止注射。 2.水负荷:麻醉后i.g.给自来水40ml/kg; 注意:避免灌至气管,将灌胃管外端浸入水中,若有气泡立即拔出。 3.手术:背位固定后剪去下腹部毛,于耻骨联合上方切开皮肤约45cm,并沿腹白线剪开肌肉,暴露膀胱,在少血管区做荷包缝合后行膀胱插管; 注意:膀胱插管需注满生理盐水,4.记录正常尿量(ml2分钟),连续记录10min; 5.耳缘i.v.1速尿4mg/0.4ml/kg,记录给药后2、4、6、8、10、12、14、16、18、20min尿量毫升数(ml2分钟)。 结果 结果汇总,计算不同时间尿量的均值,以尿量毫升数(ml2分钟)为纵坐标,给药后不同时间为横坐标作直方图。,