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1、临床免疫学检查,上海交通大学医学院 季育华 教授,范畴(category)：,1、感染性疾病(infection disease) 2、自身免疫性疾病(autoimmune ) 3、超敏反应性疾病(hypersensitivity ) 4、免疫缺陷/增殖性疾病 (immunoabnormal deficiency/proliferation) 5、肿瘤(tumour) 6、移植(transplantation),手段(measure)与目的(objective)：,应用免疫学的理论(theory)与技术 (technique)，研究疾病的病因(致病) (pathogenesis)、发生(occ
2、ur)、发展 (develop)和转归(turn)，并对疾病进行 诊断(diagnosis)、疗效监测(curative effect monitor)和预防(prevent)。,内容(content)：,1、体液免疫检测(humoral) 2、细胞免疫检测(cellular ) 3、相关临床疾病的免疫检测 感染性疾病 自身免疫性疾病 超敏反应性疾病 免疫缺陷/增殖、肿瘤与移植,一、体液免疫检测(test),（一）血清免疫球蛋白检测 (human serum immunoglobulin ) （二）血清补体检测 (human serum complement ) （三）体液免疫相关其他检测 (
3、others ),（一）血清免疫球蛋白检测,免疫球蛋白（Immunoglobulins, Ig） 是具有抗体活性或化学结构与抗体相似 的球蛋白。 可分为分泌型和膜型两种，前者主要 存在于血清等体液中，如Ab；后者称膜 型免疫球蛋白（membrane Ig，mIg）， 是B细胞膜上的抗原受体(receptor)。,抗体（antibodies, Ab）是B细胞识别 抗原后增殖分化为浆细胞所产生的，能 与相应抗原特异性(specific)结合 (recognize antigen and binding)并 发挥免疫功能(antigen and antibody reaction)的球蛋白。,所有抗
4、体都是免疫球蛋白， 但免疫球蛋白不都是抗体。,临床检测的血清免疫球蛋白,健康人血清主要Ig含量(content)（g/L）,年 龄 IgG IgM IgA 新生儿 6.617.5 0.010.06 0.060.21 6个月 2.66.9 0.080.57 0.261.00 1 岁 3.09.5 0.140.91 0.371.50 2 岁 4.712.3 0.211.45 0.411.75 8 岁 6.315.0 0.462.51 0.472.20 12岁 7.015.5 0.582.91 0.492.40 18岁 7.315.5 0.703.21 0.512.61 成人 7.016.0 0.7
5、03.00 0.402.80,检测手段(method)：,(Precipitation Reaction),(In fluid phase),(In agar),（ring、immune-turbidity、et al）,（diffusion）,（electrophoresis）,(In fluid phase ) 絮状沉淀试验：,Ag,Ab,环状沉淀试验,透射免疫比浊：,（turbidimetry）,在直射角度上测定光的透射强度，以吸收光单位（A）表示， A值与复合物量呈正比。,散射免疫比浊（终点散射/速率散射）：,（nephelometry） 在光路的5-95角的方向上测量散射光强度和被测
6、溶液中微粒浓度关系的一种方法。 散射光：一定波长的光线沿水平轴通过复合物的混合液时导致光散射，散射光的强度与复合物量呈正比。 测定抗原抗体反应达平衡时 ，终点（end） 测定单位时间内抗原抗体形成最大量时，速 率（rate）,临床意义（significance）：,1.血清多克隆Ig水平增高 患者血清中各型Ig均升高，常见于各种 感染特别是慢性(chronic)细菌感染，如肺结 核、慢性支气管炎、慢性肝病自身免疫性 (autoimmune)疾病。SLE患者以IgG、IgA升高 较多见，类风湿性关节炎IgM增高为主。,多克隆抗体(polyclonal antibody): 由不同的B细胞克隆产生
7、的抗体. 单克隆抗体(monoclonal antibody): 由一个细胞克隆所产生的只识别单一 抗原决定簇的纯的抗体.,2.血清单克隆Ig水平增高 患者血清中出现异常增多的单克隆蛋白 （monoclonal protein，MP（即M蛋白）达 30g/L以上，而正常Ig包括与MP同类Ig的含量 则显著降低。此类异常增多Ig多无免疫活性, 主要见于免疫增殖性(immunoproliferative) 疾病，如多发性骨髓瘤(multiple myeloma, MM),原发性巨球蛋白血症(primary macro- globulinemia)、重链(heavy chain)病、轻 链(ligh
8、t chain)病等。,新生儿、婴幼儿由于体液免疫功能尚不成 熟，免疫球蛋白的含量较成人低，需按年 龄组进行分析与判断。 关于血清IgE和IgD的测定： 血清总IgE为0.130.92mg/L; 血清总IgD为0.62.0mg/L; IgE值升高多见于超敏反应性疾病,骨髓瘤 IgD值升高多见于骨髓瘤等。,异常免疫球蛋白检测：,M蛋白/（Monoclonal immunoglobulins ） 由一种单克隆B淋巴细胞异常增殖时产生的 具有相同结构和电场移动率的Ig分子或分子片段，一般不具有抗体活性,又称副蛋白（paraprotein）。 冷球蛋白（cryoglobulin） 指血清中一种蛋白，4
9、不溶解，30易于 凝聚，37便溶解。存在于多种疾病，参 与炎症或免疫复合物引起的疾病。,M蛋白的检测（免疫固定电泳） (immunofixation lectrophoresis),操作：待检血清 + 抗血清IgG IgA IgM 链 链 I 抗原抗体对应沉淀 并被固定，染色等,结果(result)：,与M蛋白检测相关(related)疾病：,1、多发性骨髓瘤（multiple myeloma） 2、巨球蛋白血症（macroglobulinemia） 3、重链病（heavy chain disease） 4、轻链病（light chain disease） 5、半分子病（half-molecu
10、le immunoglobulin disease） 6、恶性淋巴瘤(malignant ) 7、良性M蛋白血症(benign ),例:,多发性骨髓瘤 （multiple myeloma,MM） 是浆细胞异常增殖的恶性肿瘤，也称浆细胞瘤（plasmocytoma）。是IPD中最常见的一种类型。1873年由Butzky首先并命名。,MM的主要临床特征：,进行性的骨质破坏，如骨质疏松和溶骨性病变， 常有骨痛、易骨折，为MM最典型特征； 大量的M蛋白导致血液粘度增高,呈高粘血症或沉积 于肾小管中，肾小管上皮细胞淀粉样变性，发生肾病 综合征。损害中枢神经系统，可出现神经功能障碍； 骨髓损伤可引起贫血、
11、粒细胞和血小板减少； 浆细胞浸润其他组织，如脊髓和神经根受压时引起 运动功能障碍等； 男性多发，平均发病年龄46岁左右； 恶性程度高，预后不良； 易感染。,MM的主要免疫学特征：,血清中出现大量的M蛋白：IgG35g/L, IgA20g/L, IgM15g/L, IgD2.0g/L，IgE 2.0g/L；或尿中有本周蛋白（1.0g/24h 尿）； 血清中正常Ig 水平明显降低； 骨髓中有无限扩增的异常浆细胞 （15%）为主要病理特征，组织证实有浆 细胞瘤； 有溶骨性损害。,不同类型的多发性骨髓瘤:,类 型 发生率（%） 本周蛋白尿阳性（%） 临 床 特 点 IgG 5060 5070 典型症状
12、 IgA 2025 5070 高粘综合征较多见 IgD 12 90 骨髓外病变、溶骨病 变多见，44%淀粉样变 IgE 0.01 少见 IgM 1 90 高粘综合征最常见 非分泌型 15 无 溶骨病变较少，神 经系统损害较多见,MM的发病机制,发病机制不明，与下列因素有关。 （1）是遗传与环境因素综合作用的结果。主要发生 在1号、11号、14号染色体，使浆细胞可发生永生化 （2）造血干细胞的异常 。形成浆细胞瘤。 （3）细胞因子的异常 。MM患者可有IL-6异常增高， 体外内实验证明IL-6可促使MM细胞增殖、生长和存 活，使MM细胞增多。IL-6增高直接效应是抑制IL-4的 产生，从而抑制了
13、正常的体液免疫功能。 （4）与粘附分子、IL-6等信号传递受体和B细胞12 等抑制凋亡的受体高表达有关。,本周蛋白（bence-jones protein）: 1847年由Bence-Jones在病人的尿液中检出而命名。已知M蛋白不具有免疫活性，无正常免疫球蛋白的功能，其轻链分子小可通过肾小球滤过从尿排除。 （本周蛋白是从尿中检出的M蛋白轻链）,冷球蛋白的检测(定性)：,冷球蛋白的定量分析 鉴定沉淀中蛋白质类型，可将沉淀用冷缓冲 液洗涤后，再溶于巴比妥缓冲液中，固定电 泳或免疫电泳鉴定。 冷球蛋白检测的注意事项 采血过程要保温，用品用预温，4下放置时 间要一周，正常人血清也可含有冷球蛋白， 多
14、数在80g/L 以下。,（二）血清补体检测,补体（complement）是指血清中具有酶活性的一组不耐热球蛋白。 A. C1C9(C1q、r、s)； B. B因子、D因子、P因子、H因子； C. C1抑制物、C4结合蛋白、促衰变因子 等。,溶血程度与补体含量的关系:,补体相关的实验室检测：,1、总补体溶血活性测定（CH50） 反映主要补体C1C9成分的综合水平。 试管法：正常参考值范围 50 100U/ml 脂质体免疫法：其范围23 46U/ml 测得值高：急性炎症、损伤、恶性肿瘤 测得值低：补体消耗相关疾病 补体合成降低（肝病） 先天性缺陷,2、补体单个成分检测（C3、C4、C1q） 方法:
15、免疫比浊法、单向免疫扩散法,补体单个成分检测的意义:,若血清C3含量增高，由于C3是急性时相反应蛋 白，在急性炎症、传染病早期、急性组织损伤、恶 性肿瘤、移植物排斥反应时增高。但是补体含量增 高的临床意义不大。 若血清C3含量降低，见于合成能力低下，如慢性 肝病；合成原料不足，如营养不良；补体消耗或丢 失增多，如系统性红斑狼疮活动期、白血病化疗 后、大量失血、大面积烧伤。 血清C4含量降低，见于多发性骨髓瘤、遗传性血 管性水肿、遗传性C4缺乏症等。,二、细胞免疫(cellular)检测,参与机体细胞免疫反应的细胞 T淋巴细胞 B淋巴细胞 NK细胞（自然杀伤） 中性粒细胞 针对细胞的数量(amount)、活性（功 能 function）、表面标志物(membrane molecules )表达(express)程度。,T细胞表面标志物(主要):,1、羊RBC受体(E花环) 2、T细胞抗原受体（T cell receptor,TCR) 3、CD3,CD4/CD8；CD28,152,154和CD2等 （Cluster of differentiation；CD） 4、丝裂原受体（PHA/ConA） 5、MHC分子（MHV-类分子） 6
