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1、第七节 肝细胞损伤时 常用的生化试验,长征医院 于嘉屏,一、绪论 1. 重要性 2. 目的 (1)了解损害程度 (2)判断预后 (3)疗效观察 (4)体检,耐受能力,3. 分类 蛋白质代谢的试验 脂类代谢的试验 维生素代谢的试验 糖类代谢的试验 酶类代谢的试验 免疫功能试验 胆红素代谢的试验 色素的排泄试验 药物转化功能试验 激素代谢的试验 胆汁酸代谢的试验,二、蛋白质代谢试验,(一)血清总蛋白、白蛋白与球蛋白测定 1. 原理 总蛋白-双缩脲比色法 白蛋白-溴甲酚绿比色法 2. 参考值 3. 临床意义,白蛋白测定的临床意义,较少见：严重腹泻、呕吐引起的脱水，广泛性烧伤，急性大出血 1.蛋白质摄
2、入不足：慢性胃肠道疾病，营养不良，妊娠后期，哺乳期 2.白蛋白合成功能不全：肝硬化，肝功严重损伤，慢性感染，恶性贫血 3.蛋白质消耗太多：甲亢，糖尿病，慢性消耗性疾病，恶性肿瘤 4.蛋白质丢失增多:肾病综合征,严重烧伤,1. 肝肾疾病：慢肝，肝硬化，肾病综合征 2. 自身免疫病：风湿热，系统性红斑狼疮 3. 恶性肿瘤及某些血液病：多发性骨髓瘤，淋巴细胞性白血病 4. 感染性疾病：疟疾，丝虫病，血吸虫病 1. 球蛋白减少或缺乏症 2. 使用大量网状内皮系统抑制后，如6-巯基嘌呤等化疗后,球蛋白测定的临床意义,（二）血清蛋白电泳 1. 原理 2. 参考值 3. 临床意义 （三）前白蛋白 （四）血氨
3、,急性 1 亚急性 慢性或早期肝硬变 中期 Alb 晚期 ,几种疾病的蛋白电泳变化, 病名 白蛋白 1 2 肾病 肝硬化 -桥 原发性肝癌 AFP 多发性骨髓瘤 慢性炎症 无-球蛋白血症 双白蛋白血症 双峰 ,(五)甲胎蛋白,胚胎期由卵黄囊、胎儿肝合成，胃肠道也能产生少量，肝癌细胞也可重现的癌胚蛋白质。 70kD，pI4.75，590aa，单链，含4糖，包括甘露糖、半乳糖、乙酰氨基葡萄糖和岩藻糖，形成寡糖链。,-球蛋白区 调节渗透压、抑制细胞免疫反应和体液免疫反应、结合或转运激素以及作为血清蛋白的前体。 孕后第六周开始合成，1315周龄含量最高，40周时仅为最高含量的10.1。 检测方法：琼脂
4、双向扩散、琼脂对流免疫电泳、间接反向血球凝集试验、放射火箭电泳自显影和放射免疫分析。,对原发性肝癌的诊断意义 1早期诊断： 升高数十倍至数万倍。500g/L者，均可诊为肝癌。 我国自1971年普查，无症状体征的亚临床癌在肝癌病人中占44.771.2，58.8为直径5cm的小肝癌。,2准确诊断： ALT正常，排除妊娠与生殖腺胚胎性肿瘤，AFP呈持续阳性一个月，诊断肝癌的准确性可达100. AFP200g/L持续2个月者，准确性达97.7。 3对肝癌患者病情和预后判断： AFP含量与肿瘤大小成正相关。与恶性程度相关。 手术或药物治疗有效时，AFP含量多下降，复发或恶化时，又上升。,4局限性： 占原
5、发性肝癌3040的胆管细胞癌，多为阴性，即使是肝细胞癌也有10左右阴性。 一些良性肝病、新生儿、孕妇及胃癌等，出现假阳性的百分率也相应升高。 AFP异质体：根据对刀豆凝集素ConA和小扁豆凝集素（LCA）结合能力的不同，AFP可分为结合型或非结合型，特别是LCA能识别肝癌AFP糖链的岩藻糖基。,三、胆红素代谢试验,（一）基本概念 1. 胆红素来源 (1)衰老红细胞 (2)幼红细胞 (3)肌红蛋白 2. 间接胆红素 3. 直接胆红素,珠蛋白，Fe（代谢池） 衰老红细胞血红蛋白血红素胆绿素 胆红素（游离/非结合/间接胆红素） （不溶于水，不能由肾脏排出） 肝脏 葡萄糖醛酸基转移酶 葡萄糖醛酸-胆红
6、素（结合/直接胆红素） （溶于水，可由肾脏排出）,4. 胆红素的正常代谢,(二)黄疸时胆红素代谢异常 1.溶血性黄疸 2.肝细胞性黄疸 3.阻塞性黄疸 (三)检测方法,血清黄疸指数测定,目测：以1:10000稀释度的重铬酸钾为一个单位 2-6 单位: 正常 7-15单位: 隐性黄疸 15 单位: 巩膜染黄 结果受 溶血、脂血症、药物 的影响,测定胆红素的价值在于: (1)发现隐性黄疸 (2)了解黄疸的发展和转化 (3)鉴别黄疸种类,血清胆红素定量试验,尿中直接胆红素可被碘液氧化成绿色的胆绿素，而被检出。,尿中胆红素定性试验,碘,在酸性溶液中，尿中尿胆原与对二甲氨基苯甲醛发生反应，形成樱红色化合
7、物。 正常人阴性或弱阳性。,尿胆原定性试验,四、血清酶学检查,1.肝细胞内酶生成亢进或低下 2.肝细胞膜通透性增高 3.肝细胞变性坏死 4.酶排出的障碍 5.激活剂、抑制剂的影响,（一）血清酶活性变化机制,1. 肝细胞实质性损害：AST、ALT、GDH、LDH 2. 胆道疾患：ALP、GGT、5-NT 3. 肝脏实质纤维化：MAO、-NAH 4. 肝脏肿瘤：5-NPDase、ACT,(二)诊断肝胆疾病常用酶的分类,1.转氨酶 丙氨酸氨基转移酶 Alanine aminotransferase, ALT Glutamic pyruvic transaminase, GPT 天冬氨酸氨基转移酶 A
8、spartate aminotransferase, AST Glutamic oxaloacetic transaminase, GOT,(三)酶学检查,丙氨酸氨基转移酶, ALT 谷丙转氨酶, GPT,丙氨酸酮戊二酸 ALT 丙酮酸谷氨酸 丙酮酸NADH LDH 乳酸NAD,天冬氨酸氨基转移酶, AST 谷草转氨酶, GOT,天冬氨酸-酮戊二酸 AST 草酰乙酸+谷氨酸 草酰乙酸NADH MDH 苹果酸NAD,Aspartate Transaminase, AST, GOT, EC 2.6.1.1 天冬氨酸:-酮戊二酸氨基转移酶 天冬氨酸 + -酮戊二酸 草酰乙酸 + 谷氨酸 ASTs,
9、ASTm,天冬氨酸氨基转移酶同工酶,天冬氨酸 + -酮戊二酸 草酰乙酸 + 谷氨酸 草酰乙酸 + 固蓝B紫红色 酶带确定: ASTs球蛋白区 ASTm球蛋白区 参考值: 仅见非深染的ASTs酶带,AST同工酶电泳法测定原理,ASTs(或ASTm)抗ASTs(或抗ASTm)PEG 参考值: ASTm 4.5 2.6 U/L， ASTs 22.9 4.1 U/L,离心沉淀,测上清液AST,AST同工酶免疫沉淀法测定原理,1. AMI: 总AST 68h4860h45d ASTm: 亚细胞水平损害 晚5h 37d: ASTm/总AST 25.7% 我院: ASTm: 12h36h120h 死亡: A
10、STm 84.9 57.8 U/L 存活: 24.7 16.3 U/L 2. 肝病: 急、慢性肝炎, 活动性肝硬变 ASTm，评价 预后 3. 肿瘤: 局灶性肝恶性变 ASTs:ASTm=1:1 4. 肌营养不良,AST同工酶临床评价,转氨酶测定的临床意义,急性肝炎: 早期诊断, 预后 AST/ALT比值 ALT与黄疸分离: 重症肝炎 ALT与AFP关系: 肝炎: AFP, ALT 肝硬化: AFP低水平升高 肝癌: AFP进行性升高,器官或组织 AST ALT 心肌 7800 450 肝脏 7100 2850 骨骼肌 5000 300 肾脏 4500 1200 胰腺 1400 130 脾脏
11、700 80 肺 500 45 红细胞 15 7 血清 1 1,AST，ALT在人体组织中的相对活性,AST/ALT比值 AST/ALT 正常人 1.15， 急性病毒性肝炎早期 或轻型肝炎时 0.56（3.0,转氨酶测定的临床意义,急性肝炎: 早期诊断, 预后 AST/ALT比值 ALT与黄疸分离: 重症肝炎 ALT与AFP关系: 肝炎: AFP, ALT 肝硬化: AFP低水平升高 肝癌: AFP进行性升高,乳酸脱氢酶同工酶,Lactate Dehydrogenase, LDH, LD, EC 1.1.1.27 L-乳酸:NAD氧化还原酶 pH89.8 乳酸 + NAD+ 丙酮酸 + NAD
12、H + H+ pH7.47.8 LDH 15 H, M, MW 140,000. LDH 1,2: 心肌, 肾, 红细胞 LDH 3: 肺, 脾, 胰, 甲状腺, 肾上腺, 淋巴结 LDH 4,5: 骨骼肌, 肝 LDH x: 睾丸, 精子,LDH同工酶电泳法测定原理,乳酸 NAD 甲 (紫蓝色) LDH PMS 丙酮酸 NADH NBT,琼脂糖电泳法参考值,LDH1 28.4 5.3% LDH2 41.0 5.0% LDH3 19.0 4.0% LDH4 6.6 3.5% LDH5 4.6 3.0%,1,6-己二醇能特异地抑制乳酸脱氢酶中的M亚基, 在控制1,6-己二醇的浓度和抑制时间的条件
13、下,可将LDH25全部抑制灭活,而直接测定LDH1活力。,抑制法测定 LDH1 原理,将待测血清与抗LDH5抗体温育, 抗体与血清中含有M亚基的LDH25结合,沉淀免疫复合物,测定上清液中的LDH1活力。,免疫沉淀法测定 LDH1 原理,1. AMI: 总LDH: 1218h3d714d LDH1: 6h24h LDH1/LDH2=1 24h 轻症: 总LDH正常, 同工酶有变化 同时有心衰、心源性休克, LDH5% 总LDH: 敏感性 95.8%, 特异性 89.3% LDH1: 敏感性 86%, 特异性 91.3% LDH1/LDH2: 敏感性 91.6%, 特异性 92.7%,LDH同工酶临床评价,2. 肝病: 急肝: LDH1,2, LDH5 肝硬化: LDH2, LDH5
