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1、专题2,课题1,课前预习巧设计,名师课堂一点通,重点突破,创新演练大冲关,知识清单,案例师说,课堂强化,每课一练,了解 培养基的种类、营养要素、配制原则 理解 微生物培养过程中的无菌操作、接种 操作要求,无菌技术的操作,1概念 人们按照微生物对 的不同需求，配制出供其生长繁殖的 。 2种类(按照培养基的物理性质划分) (1)液体培养基：配制成的 状态的基质。 (2)固体培养基：配制成的 状态的基质，是实验室中最常用的培养基之一，微生物在其上面生长，可形成肉眼可见的 。,营养物质,营养基质,液体,固体,菌落,3营养要素 各种培养基的具体配方不同，但一般都含有 、 、 、 ，此外培养基还需要满足微
2、生物生长对pH、 以及 的需求。,水,碳源,氮源,无机盐,特殊营养物质,氧气,二、无菌技术 1避免杂菌污染的措施 (1)对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行 和 。 (2)将用于微生物培养的 、 和 等器具进行灭菌。 (3)为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在 附近进行。 (4)实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与 相接触。,清洁,消毒,器皿,接种用具,培养基,酒精灯,火焰,周围的物,品,2消毒和灭菌 (1)消毒： 概念：使用 的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体 (不包括芽孢和孢子)。 常用方法： 消毒法、 消毒法、 消毒法。 (2)灭菌： 概念：使用 的理化因素杀死
3、 的微生物(包括芽孢和孢子)。 常用方法： 灭菌、 灭菌、 灭菌。,较为温和,有害的微生物,煮沸,巴氏,化学药品,强烈,物体内外所有,灼烧,干热,高压蒸汽,三、分离纯化大肠杆菌的实验操作 1制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的一般步骤 计算称量溶化灭菌倒平板。 2纯化大肠杆菌 微生物接种的最常用方法是 和 。 (1)平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面 的操作，将聚集的菌种逐步 到培养基的表面。 (2)稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的 ，然后将不同稀释度的菌液分别 到琼脂固体培养基的表面，进行培养。,平板划线法,稀释涂布平板,法,连续,划线,稀释分散,梯度稀释,涂布,3结果分析 (1)如果接种
4、了大肠杆菌的培养基上生长的菌落颜色、形状、大小基本一致，说明 操作符合要求。 (2)若培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中被 。 (3)未接种大肠杆菌的空白对照的培养基在培养过程中若 ，则说明灭菌不彻底，实验失败。,接种,杂菌污染,长出菌落,四、菌种保存 1临时保藏法 适用于 使用的菌种。 (1)过程： 将菌种接种到试管的 培养基上，合适温度下培养。 保藏：菌落长成后，放于 冰箱中。 转移：每隔36个月，将菌种从旧的培养基上转移到 的培养基上。 (2)缺点：菌种容易被 或产生 。 2菌种的长期保存 对于需要长期保存的菌种，可采用 的方法。,固体斜面,频繁,4,新鲜,污染,变异,甘油管藏,1
5、读教材P14基础知识培养基，归纳并回答下列问题。 (1)微生物营养要素有哪些？碳源的主要来源有哪些？ 提示：各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源、氮源、无机盐和生长因子。 主要来源：无机化合物有CO2、Na2CO3等；有机化合物有糖类、脂肪酸、花生饼、石油等。,(2)结合微生物物质组成分析碳源、氮源、生长因子在微生物体内有哪些作用？(完成下表),2读教材P15无菌技术的相关内容，归纳并回答下列问题： (1)实验室常用的消毒、灭菌方法有哪些？ 提示：,(2)试从消毒、灭菌的条件和结果方面进行比较分析二者的区别并填写下表。,3读教材P16实验操作制备牛肉膏蛋白胨固体培养基相关内容，思考并
6、讨论下列问题： (1)分析配制培养基之前，对所需要的各种营养物质要计算称量的原因。 提示：保证培养基中的各种营养物质比例协调，有利于微生物的生长。 (2)在配制培养基时，各组分溶化后是否立即进行灭菌？为什么？ 提示：配制的培养基除满足微生物的营养物质需求外，还需满足微生物对pH、氧气等的要求，所以培养基各组分溶化后需调pH后再进行灭菌。,(3)倒平板时，应注意哪些问题？ 提示：培养基灭菌后，需冷却至50左右时才能倒平板；整个操作在酒精灯火焰旁进行；倒平板时，培养基若溅到培养皿盖和皿底之间的部位，该平板应丢弃；平板冷凝后要倒置。,(4)平板划线操作时，需要对接种环灼烧灭菌，填表比较下列灼烧灭菌的
7、目的。,4读教材P20结果分析与评价内容，根据你自己的实验操作，分析交流下列问题： (1)如何判断培养基的制作是否合格？ 提示：将未接种的培养基在恒温箱中保温12 d，无菌落生长，说明培养基制备成功。 (2)如何判断接种操作是否符合无菌要求？ 提示：根据培养基上生长出的菌落的颜色、形状、大小等特征判断，若菌落特征符合大肠杆菌的特点，则说明接种操作符合要求，若培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作未达到要求。,某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验，实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数。请回答与此实验相关的问题。 (1)培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培
8、养提供了_和_。除此之外，培养基还必须含有的基本成分是_和_。 (2)对培养基进行灭菌，应该采用的方法是_ _。,(3)为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于_中培养，培养的温度设定在37。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种_作为对照实验。 (4)培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这说明湖水样品中有_种细菌。一般说来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越_。 (5)如果提高培养基中NaCl的浓度，可以用于筛选耐 _细菌，这种培养基被称为_。,解析 (1)蛋白胨可提供碳源、氮源、维生素，而淀粉可提供碳源，除此之外，微生物的生长还需无机盐
9、和水。 (2)对培养基的灭菌，在实验室内常用高压蒸汽灭菌法。 (3)在实验的过程中，除实验变量以外其他各变量均应适宜且相同，以利于更好的实现实验目的。 (4)不同的菌落具有各自的菌落特征(如硬度、颜色、透明度、光滑度等)。 (5)培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长，称为选择培养基，可以培养、分离出特定微生物。,答案 (1)氮源(碳源不作要求) 碳源 无机盐 水 (2)高压蒸汽灭菌 (3)恒温培养箱 无菌水 (4)多 高 (5)盐(或NaCl) 选择培养基,微生物的培养和应用相关题目的解题策略 对于有关微生物的培养和应用的题目，在解答时应注意从以下几个
10、方面把握： (1)培养基的营养构成，包括碳源、氮源、无机盐和水以及生长因子，其中各种成分由哪种有机物提供应根据其化学元素组成来推断。 (2)无菌操作技术，区别消毒和灭菌，以及各自常用的方法和优点。 (3)在实验过程中，必须设置对照实验，明确设置对照的方法。,培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌、消毒方法依次是( ) 化学消毒 灼烧灭菌 干热灭菌 紫外线消毒 高压蒸汽灭菌 巴氏消毒法 A B C D,解析 培养基用高压蒸汽灭菌；培养皿能耐高温，需用干热灭菌；接种环可用灼烧灭菌达到迅速彻底的灭菌效果；实验操作者的双手可用化学药剂进行消毒，如用酒精擦拭双手；空气可用紫外线消毒；牛奶为不破坏其营养成分可采用巴氏消毒法。答案为A。 答案 A,点击下图进入“课堂强化”,点击下图进入“每课一练”,
