纯水-超纯水在实验室中的应用分析与机型选配

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1、默克密理博 市场专员 朱文峰 W,纯水/超纯水在实验室中的应用分析与机型选配,什么是合适的实验室用水?,纯水/超纯水在实验室中的应用分析与机型选配,样品前处理及常规理化分析实验的水质需求? HPLC/LC-MS有机物分析的水质需求? IC/ICP-MS元素分析的水质需求? 分子生物学相关实验的水质需求?,常规理化分析实验室,样品前处理,三级/二级纯水的用途 相关试剂的配制:消解液、萃取的水相溶液、微生物培养基 直接用水:水浴、蒸汽灭菌、实验动物喂饲、植物水育、老化、玻璃等实验容器清洗、组织清洗,水质的影响 离子积垢导致堵塞和表面腐蚀 实验容器的洁净度 动植物对水中污染物的敏感性 试剂与水中污染

2、物的反应 水相中的有机污染物在液-液萃取过程中进入有机相 微生物、有机物等污染待检或实验组织,常规试验(pH/TOC/浊度/凯式定氮/色值/旋光度),纯水需求:二级高纯水(电阻率5 M.cm25;TOC30ppb;细菌 0.1cfu/ml) 纯水用途:试剂和缓冲液配制、实验容器的清洗和润洗、样品的稀释或溶解、电极冲洗,E-POD,Flexible Water Delivery 3 E-PODs,E-POD,E-POD,Elix Advantage 3,5,10,15 L/h,Tank 30,60,100 L,Elix Advantage纯水系统,TOC5M.cm 细菌0.1cfu/ml 颗粒(

3、0.22m)1个/ml,二级高纯水,Rios纯水系统流路特点,Elix纯水系统流路特点,Elix Advantage纯水系统流路特点,独特的高回收率下的恒流设计,1、T P ,保证在7 到 35C范围内,系统流量保持不变 2、废水回收路径,保证低浓度废水有效回收及高浓度废水排放 3、三相阀设计,保证高质量RO水才能进入下游EDI,RO Flow,Feed water C,T effect,P effect,Result,专利的EDI阴极活性炭涂层技术,RO Feed Water,环保 高效 稳定 无需再生 运行费用低 无需软化剂 使用寿命长,有机分析室,常用实验室用水分析,Merck Mill

4、ipore超纯水,双蒸水,瓶装水,去离子水,ESI + from 200 to 600 m/z,同时满足TOC5ppb & 电阻率=18.2 M.cm的超纯水才能确保LC-MS对痕量(ppb级别)有机物的测量需求,反相色谱柱中的固定相表面,固定相与流动相中的疏水有机污染物结合,有效结合位点被污染物占据,待分析物与固定相的结合受到制约,水中有机污染物对反相色谱柱影响的原理,流动相水质对色谱柱柱效和柱寿命的影响,第 1 次进样,第1950次进样,使用DNA分离柱分析不同长度的寡核苷酸,以瓶装水作为流动相,相同条件下进样1950次后,柱效明显下降:分离度降低,峰形严重变差。,使用瓶装水,使用DNA分

5、离柱分析不同长度的寡核苷酸,以Merck Millipore超纯水作为流动相,相同条件下进样6400次后,柱效基本没有下降,分离度和峰形保持不变。,使用Merck Millipore超纯水,第6400次进样,Conditions Water samples : 60 mL trace enrichment by accumuluation on C18 column at 1 mL/min Column : C18 SymetryWaters, 4.6x150mm, 3.5mm Gradient : Linear 95%Water to 100% ACN in 30 min, then 100

6、% ACN Wavelength : 214nm System : Waters Alliance 2695 Detection : UV via Waters Photodiode Array 2996,有机污染物的影响提高背景,Mabic S., Regnault C., Krol J. The misunderstood laboratory solvent : reagent water for HPLC”. LCGC North America 2005, 23 (1), 74-82.,Water: Ultrapure water, 18.2 M.cm, 3 ppb TOC,有机污染

7、物的影响基线漂移、鬼峰,每小时采集一次基线的信号!,Water: 10 M.cm, approximately 200 ppb TOC,离 子,实验用水水质对HPLC/LC-MS的影响,有机物,细 菌,颗粒物,实验用水中的污染物,降低色谱柱的柱效,严重减短色谱柱寿命 与待分析物相结合或反应,影响保留时间 基线漂移、提高背景噪音、杂峰、峰型劣化 影响检出限、重现性、痕量分析(ppb-ppt),离子遇有机试剂形成结晶盐,堵塞管路磨损泵 离子造成质谱检测出现离子加合峰 离子与待分析物结合改变质荷比 部分特殊离子具有紫外吸收能力,用途 空白样 标准曲线配制 流动相配制 容器清洗/润洗 进样器等配件清洗

8、,最佳水质 TOC0.22m 的颗粒1个 电阻率=18.2M.cm,堵塞色谱柱,裂解产生有机物和离子污染 形成菌膜,持续增殖并产生有机分泌物,堵塞管路和色谱柱,造成柱内涡流 磨损色谱泵和进样器 释放表面吸附的各种有机物和离子,污染进样口和质谱,Milli-Q Advantage/Reference超纯水系统,电阻率=18.2M.cm TOC5ppb 细菌0.1cfu/ml 颗粒(0.22m) 1个,一级超纯水,超纯水系统流路及特点,Q-POD,循环流路,Q-Gard纯化柱&Quantum精纯化柱,主要成分人造活性炭、离子交换树脂 主要纯化技术活性碳吸附、离子交换 优势特点: 1、核子级离子交换

9、树脂,无杂质,不容易破损,离子交换容量高,极低有机物析出 2、镀银人造活性炭(高温溶解苯乙烯),高效吸附小分子有机物,极低离子析出 3、适应不同进水条件的Q-Gard和不同应用需求的Quantum,Q-gard 纯化柱,Quantum 精纯化柱,人造活性炭,离子交换树脂,单/双波长紫外灯,主要纯化技术紫外光氧化 主要功能通过双波长紫外光线氧化低浓度有机物成为CO2或使其成为带电物质从而被离子交换树脂吸附去除 优势特点: 1、超长寿命(2年) 2、低压超长设计,超纯石英外壁,316L不锈钢外壳,稳定获得强大的氧化能力,双波长紫外灯,单双波长紫外灯的作用,254 nm单波长紫外灯 杀菌作用 185

10、 + 254 nm双波长紫外灯 氧化有机物,紫外照射技术(UV)去除细菌和有机物原理,100%,80%,60%,40%,20%,0%,240,260,280,300,320,254nm,相对影响,UV灯波长 (nm),紫外杀菌原理,有机物去除原理,设计满足USP ( 643)要求的TOC 检测仪,采用 Anatel TOC 分析技术, 专门用于高纯水中 TOC 的测量 检测限1-999ppb 检测时间3-6min 只有在电阻率 2 MW.cm (纯水/超纯水)的情况下方能正常工作 出厂校验证书,符合USP并可提供校验的超纯水电导率仪,多样化的个性终端精制器选择-一机两水,超纯六水,VOC-Pa

11、k 去除挥发性有机物,EDS-Pak 内分泌干扰物分析,LC-Pak TOC1ppb,Bio-Pak 有效去除热源、核酸酶及蛋白酶,Millipak 去除颗粒的无菌水,根据专业需求选择不同的终端精制器,Element POD 超痕量元素分析,Cool!,元素/环境分析实验室,离子色谱,测量指标及限量:苯并(a)芘(ppb);硫酸盐(ppm)等无机非金属指标;溴离子(ppb)等消毒副产物 纯水需求:电阻率18.2M.cm25的超纯水,TOC5ppb 纯水用途:空白样品、标准品配制、试剂配制、淋洗液配制,表面被氧化物和有机物包覆的阴离子树脂,表面被油脂包覆的阴离子树脂,原子吸收分光光度仪/ICP-

12、MS,测量指标及限量:各种金属指标(ppb-ppt); 纯水需求:电阻率18.2M.cm25的超纯水,TOC5ppb 纯水用途:空白样品、标准品配制、试剂配制、容器的清洗和润洗,水纯化系统与分析仪器的离子水平对比,Milli-Q Advantage,Milli-Q Reference,超痕量元素分析,Q-POD Element剖析图,Quantum ICP,Optimizer LW Final Filter,POD Base,P0DC0VER1 protection against agressive chemicals,Tubing for Water Delivery,Outlet Sol

13、enoid Valve,Water to loop (outet) Water from loop (inlet),Milli-Q Integral + Q-POD Element + E-POD,分子生物学相关实验室,PCR/RT-PCR/定量PCR实验用水需求,离子,特别是Fe/Zn/Cd等重金属离子会影响DNA聚合酶作用,无外源DNA影响复制效果或造成复制错误,无微生物&核酸酶污染,低有机物含量,特别是腐殖酸和棕黄酸 ,防止有机物与 DNA的缔合或者干扰酶,需要满足的条件:,最佳水质: TOC(总有机碳)5ppb 电阻率=18.2 M.cm 细菌0.1cfu/ml RNases0.01g

14、/ml DNases4pg/ml,超纯水结果最接近理想曲线,核酸酶作用引致的差异,核酸酶、有机物、离子引致的差异,大量的各种污染物引致实验失败,实验用水对于核酸电泳分析的重要性,经超滤一级超纯水 配制的胶体&buffer,纯水中的核酸酶在电泳过程的降解作用 纯水中离子、有机物、颗粒对泳动速度和分离效果的影响 纯水中微生物引入的多种污染物的综合影响 电泳水质需求 电阻率=18.2 M.cm TOC(总有机碳)5ppb RNases0.01ng/ml DNases4pg/l,一级超纯水配制的胶体&buffer,UFUP UP Tab,自来水配制 的胶体&buffer,实验室纯水应用对于2D电泳的重

15、要性,瓶装水,Milli-Q 水,瓶装水体系发 现206个检测,超纯水发现407个 检测点,而且更灵敏,纯水水质对于动物细胞培养的重要性,不同水质溶解无血清培养基对细胞培养的影响,TM3: mouse Leydig cells TR-1: rat endothelial cells M2R: mouse melanoma cells,1,2,3,神经干细胞培养 经超滤的一级超纯水 无超滤的一级超纯水 二级纯水去离子处理,脑细胞培养 经超滤的一级超纯水 无超滤的一级超纯水 二级纯水去离子处理,1,2,3,细胞培养用水重点! 超滤去除痕量核酸酶和热原 超纯水确保有机物、离子、微生物的有效去除,无酶水的最佳选择!,我该选择哪一个?,终端超滤器,活性层 (1m) 支撑层 (100m),主要纯化技术超滤膜过滤 主要功能通过超滤,有效截流分子量大于13,000道尔顿的分子,截流率99% 优势特点(外置式) 1、整合到取水终端,可根据应用需求进行升级和拆卸 2、无需清洗,节约超纯水 3、有效去除核酸酶和热原,(超)纯水系统纵览,纯水系统,离子交换树脂及活性碳,UV185/254nm,连续电去离子,水箱,预处理柱,反渗透,自来水,超纯水系统,一级超纯水,自来水,三级水,水箱

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