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1、食品安全突发事件样品采集及实验室检验,（微生物部分） 本溪市疾控中心郭振坤,疾控中心微生物检验室面临的形势,随着突发公共卫生事件处理条例的实施，各级各部门对突发公共卫生事件引起了高度重视，特别是涉及人数多的，大型活动期间的，发生在托有机构，学校的，社会影响较大的，更受到各级领导及社会各界的关注，这给我们疾控中心的检验能力提出了更高的要求，也给我们微生物实验室增加了压力,迫切需要提高食物中毒检验专业技术水平。,概述,食物中毒是指人摄人了含有生物性、化学性有毒有害物质后或把有毒有害物质当作食物摄入后所出现的而非传染性的急性或亚急性疾病，属于食源性疾病的范畴。食物中毒既不包括因暴饮暴食而引起的急性胃
2、肠炎、食源性肠道传染病(如伤寒)和寄生虫病(如囊虫病)，也不包括因一次大量或者长期少量摄入某些有毒有害物质而引起的以慢性毒性为主要特征 。,细菌性食物中毒实验室检验的意义,细菌性食物中毒，有易发性和发病普遍性的特点，它全年皆可发生，对人类的健康构成危害 细菌性食物中毒实验室诊断资料是判定是否为细菌性食物中毒的重要依据。实验室诊断是为确定中毒病因，查明中毒原因，控制中毒事件蔓延；对食物中毒事故责任人的确定及处罚提供证据的。,细菌性食物中毒,定义： (1)细菌性食物中毒：指因摄人被致病菌或其毒素污染的食物引起的急性或亚急性疾病，是食物中毒中最常见的一类。 （2）特点：发病率较高而病死率较低，有明显
3、的季节性，不具传染性。与食物有关，停止食用就不再有病例。血清学：微生物性食物中毒可有双相血清抗体凝集价上升；非微生物性食物中毒血清抗体凝集价不升高。 无论从国内还是从国际的资料都表明，微生物污染食品是最重要的食品卫生问题，细菌性食物中毒无论从发生的起数人数都是占第一位的。我们每年发生的细菌性食物中毒事件约占所有食物中毒事件的3040%，人数约占整个中毒人数的6090%。 在各类食物中毒中，细菌性食物中毒最多见，占食物中毒总数的一半左右。细菌性食物中毒具有明显的季节性，多发生在气候炎热的季节。细菌性食物中毒发病率高，病死率低，其中毒食物多为动物性食品。2001年，卫生部共收到重大食物中毒事件报告
4、185起，15715人中毒，死亡146人，其中第三季度报告的重大食物中毒起数、中毒人数、死亡人数最多。报告的重大食物中毒中，细菌性食物中毒人数最多，化学性食物中毒发生起数最多，且死亡人数最多。按就餐形式分类，集体食堂中毒人数最多，家庭食物中毒死亡人数最多。在餐馆或家庭厨房内常见是细菌性食物中毒。之所以发生细菌性食物中毒，是因为首先是食品被细菌污染；其次是细菌在适宜的条件下，在被污染的食品中大量繁殖或产生毒素；最后是未对食品加热或加热处理不彻底，未能杀死细菌或破坏细菌毒素。,细菌性食物中毒分类,1）感染型：是指食入含有大量活菌的食物导致的食物中毒。其前提是食物被致病菌污染，并且有一定的时间和条件
5、使细菌在食品中大量繁殖达到可引起发病的数量，如沙门氏菌属中的某些细菌，蜡样芽胞杆菌等。 （2）毒素中毒型：是由于食品受到细菌污染后，在食品中繁殖并在适宜的条件下产生大量的外毒素所引起的中毒。常见的有葡萄球菌肠毒素，肉毒梭菌素毒引起的食物中毒。,世界公认的8种细菌性食物中毒病原菌,沙门氏菌属、金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌、付溶血性孤菌、产气荚膜梭菌，肉毒梭菌、致病性大肠菌等，椰毒假单胞菌。,我国常见食物中毒病原菌,除以上8种外，还有变形杆菌，小肠结肠炎耶尔森氏菌，空肠弯曲菌，溶血性链球菌，粪链球菌，志贺氏菌，气单胞菌，类志贺氏邻单胞菌，溶藻弧菌，麦氏弧菌，不凝集弧菌。,我市近年来引起食物中毒细菌
6、,变形杆菌，蜡样芽孢杆菌，沙门氏菌，致泻大肠埃希氏菌，副溶血性弧，志贺氏菌，弗尼斯杆菌。,我市食物中毒情况,我市2002-2010年共实验室诊断检测食物 中毒26起，中毒人数454人。引起食物中 毒常见原因是食品受到细菌污染，共发生 细菌性食物中毒18起，中毒人数299人。,食物中毒病原检验情况,2009 西湖区慧海幼儿园 20 蜡样芽孢,标本采集,样品质量对微生物检验有非常重要的作用，样品的采集应在边调查边分析的基础上确定，这样可采集到典型的样品。同时在调查分析时，检验人员与流调人员的密切配合可确定更合理的检验样品和检验方法。,样品采集的关键因素（1）,样品采集的数量与质量直接关系到治病物质
7、的判定，要查明食物中毒的治病子，必须采集与中毒相关的所有样品，并根据病人的临床症状，结合流行病学调查资料，有重点，有目的地采集。这些样品包括剩余食物，患者便样，从业人员便样，血液，呕吐物，工具容器涂抹物。特别是剩余食物，便样，血液（初期，恢复期）,样品采集的关键因素（2）,采样的及时准确是查明食物中毒致病物质的重要环节。不同采样时间与食物中毒的确证率有很大关系，由于采样不及时，导致可疑食物被处理，中毒现场被打扫干净，即使采到剩余食物，检出致病菌，也可能与来至病人的样品不符合，因此，及时准确采样致关重要。,食物中毒现场采样常备用品,注射器 止血带 消毒棉签 75%酒精棉球 碘酒棉球 灭菌空试管
8、酒精灯 火柴 消毒纱布 调匙 勺子 夹子 镊子 剪刀 记号笔 记录 无菌广口瓶 灭菌玻璃试管 灭菌粪便盒 无菌塑料袋 肛拭棉棒 工作衣 口罩 帽子 手套 灭菌生理盐水 无菌平皿 胶布 胶水 无菌干棉球 其他根据需要培养基。,细菌性食物中毒病原菌检验 方法选择,食物中毒是突发事件，在食物中毒事件过程中检验时间要求，所以实验室为了尽快出具报告，要根据具体情况，选择正确的检验方法。引起食物中毒的细菌种类繁多，临床症状和潜伏期各不相同，检验人员要了解各种食物中毒的机理，了解食物中毒的治病环节进行分析寻找食物中毒的污染来源和可能感染途径。以确定原因食品，判定检验方向，当临床症状不明显，原因食品不明确时，
9、有针对性的选择会顾此失彼而漏检，而且目前发生的食物中毒，已由单一的菌转为两种或两种以上共同引起，在开始检测时，就要多选几个项目。,几种常用方法,经典方法：常规标准的检验方法，包括形态观察，培养特征，生化特性，血清学试验，噬菌体应用，抗体测定，毒力试验。 新的快速检验方法：自动鉴定仪器，手工API方法，一些特殊显色培养基，纸片法。经典方法准确性高，稳定性也较好，但时间较长：快速方法时间短，但准确性差，食物中毒检验中，应采用多种方法，快速方法灵敏性高，可以用于初筛，用其他方法同时验证，进行确认。,食物中毒检验的物资准备,（1）合成培养基：一些选择性培养 基。 新鲜羊血，一些涉及到的抗菌素。 （2）
10、光电两用双目显微镜。 （3）诊断用品：血清。 （4）消耗性材料。 （5）根据情况储备一些新的快速检验材 料。,常见中毒细菌在食品中的分布,食物中毒的诊断标准,食物中毒诊断标准及技术处理总则 中华人民共和国卫生行业标准 1.沙门氏菌食物中毒诊断标准及处理原则 ws/T 13一1996 2.变形杆菌食物中毒诊断标准及处理原则 ws/T 9一1996 3.蜡样芽孢杆菌食物中毒诊断标准及处理原则 ws/T 82一1996 4.副溶血性弧菌食物中毒诊断标准及处理原则 ws/T 81一1996 5.葡萄球菌食物中毒诊断标准及处理原则 ws/T 80一1996 6病原性大肠埃希氏食物中毒诊断标准及处理原则
11、ws/T 8一1996 7肉毒梭菌食物中毒诊断标准及处理原则 ws/T 83一1996 8产气荚膜梭菌食物中毒诊断标准及处理原则 ws/T 7一1996 9椰毒假单胞酵米面亚种食物中毒诊断标准及处理原则 ws/T 12一1996,中华人民共和国国家标准食物中毒诊断标准及技术处理总则（GB 14938-94）,4.2 细菌性和真菌性食物中毒诊断标准总则 食入细菌性或真菌性中毒食品引起的食物中毒，即为细菌性食物中毒或真菌性食物中毒，其诊断标准总则主要依据包括； 4.2.1 流行病学调查资料； 4.2.2 病人的潜伏期和特有的中毒表现； 4.2.3 实验室诊断资料，对中毒食品或与中毒食品有关的物品或
12、病人的标本进行检验的资料。,4诊断标准总则 41食物中毒诊断标准总则食物中毒诊断标准主要以流行病学调查资料及病人的潜伏期和中毒的特有表现为依据，实验室诊断是为了确定中毒的病因而进行的。 4。11中毒病人在相近的时间内均食用过某种共同的中毒食品，未食用者不中毒。停止食用中毒食品后，发病很快停止。 412潜伏期较短，发病急剧，病程亦较短 413所有中毒病人的临床表现基本相似。 414一般无人与人之间的直接传染。 415食物中毒的确定应尽可能有实验室诊断资料，由于采样不及时或已用药或其他技术、学术上的原因而未能取得实验室诊断资料时，可判定为原因不明食物中毒，必要时可由三名副主任医师以上的食品卫生专家
13、进行评定,。 42细菌性和真菌性食物中毒诊断标准总则食入细菌性或真菌性中毒食品引起的食物中毒，即为细菌性食物中毒或真菌性食物中毒，其诊断标准总则主要依据包括： 42。1流行病学调查资料； 422病人的潜伏期和特有的中毒表现： 423实验室诊断资料，对中毒食品或与中毒食品有关的物品或病人的标本进行检验的资料。,几种常见食物中毒的检验程序,副溶血性弧菌食物中毒诊断标准及处理原则WS/T 811996,1主题内容与适用范围 本标准规定了副溶血性弧菌食物中毒的诊断标准、判定原则和处理原则。 本标准适用于副溶血性弧菌食物中毒。 2 引用标准 GB 4789.794 食品卫生微生物学检验 副溶血性弧菌检验
14、 GB 1493894 食物中毒诊断标准及技术处理总则 3 诊断标准 3.1 流行病学特点 3.1.1 主要引起中毒的食品为海产品(鱼、虾、蟹、贝类等及其制品)和直接或间接被本菌污染的其他食品。 3.1.2 本菌引起食物中毒多发生在夏、秋季节(69月)。,3.2 临床表现 3.2.1 发病急，潜伏期短。 3.2.2 主要症状为腹痛、腹泻(大部为水样便，重者为粘液便和粘血便)、恶心、呕吐、发烧，其次尚有头痛、发汗、口渴等症状。 3.3 实验室诊断 3.3.1 由中毒食品、食品工具、患者腹泻便或呕吐物中检出生物学特性(见GB 4789.7)或血清型别一致的副溶血性弧菌。 3.3.2 动物(小鼠)试
15、验具有毒性或与患者血清有抗体反应。 3.3.3 按GB 4789.7进行检验。,4 判定原则 4.1 符合本菌的流行病学与临床表现。 4.2 实验室检验各项指标的检定结果符合 3.3.1的要求。有条件时做3.3.2。,沙门氏菌食物中毒诊断标准及处理原则WS/T 131996,1 主题内容与适用范围 本标准规定了沙门氏菌食物中毒的诊断标准、判定原则和处理原则。 本标准适用于沙门氏菌引起的食物中毒。 2 引用标准 GB 4789.4 食品卫生微生物学检验 沙门氏菌检验 GB 4789.28 食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂 GB 14938 食物中毒诊断标准及技术处理总则 3 诊断标准 3
16、.1 流行病学特点 3.1.1 中毒食品多为动物性食品。 3.1.2 中毒患者均食用过某些可疑原因食品。出现的临床症状基本相同，潜伏期多为448h。 3.2 临床表现 主要症状有：恶心、头晕、头痛、寒战、冷汗、全身无力、饮食不振，呕吐、腹泻、腹胀、腹痛、发烧，重者可引起痉挛、脱水、休克等。急性腹泻以黄色或黄绿色水样便为主，有恶臭。以上症状可因病情轻重而反应不同。 3.3 实验室诊断,3.3.1 由可疑食品、病人呕吐物或腹泻便中检出血清学型别相同的沙门 氏菌。如无可疑食品，从几个病人呕吐物或腹泻便中检出血清学型别相同的沙门氏菌也可。 3.3.2 有必要时可观察分离出的沙门氏菌与病人血清的凝集效价，恢复期应比初期有所升高(一般约升高4倍)。 3.3.3 沙门氏菌检验方法按GB 4789.4进行。 4 判定原则 4.1 符合本菌的流行病学特点与临床表现。 4.2 实验室检验结果应符合3.3.1或3.3.2的要求(如均未检出相同的细菌时，可用食品中检出的沙
