轮虫的培养

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1、轮虫的培养,必需小型：作为鱼类的开口饵料； 形状简单，容易被破碎； 富有营养，容易消化； 不使水质恶化； 容易制备（培养）； 能适应养殖幼体的摄食生态条件。,一、动物性生物饵料必须具备的条件,轮虫的培养,第一节 生物饵料的应用概述,常见种类 牡蛎担轮幼虫：受精卵 担轮幼虫:大约饵用13-14小时； 藤壶无节幼虫、期：大约饵用3-4小时； 轮虫：S、L、M型，有鳍鱼类开口饵料； 卤虫：幼体和成体，商品化； 枝角类：大部分淡水种； 桡足类：海水种； 糠虾、颤蚓、黄粉虫、沙蚕。 个体大小： 颤蚓、沙蚕、糠虾黄粉虫卤虫成体桡足类 枝角类卤虫幼体轮虫牡蛎担轮幼虫和 藤壶无节幼虫、期。,四、轮虫的概况,（

2、一）轮虫特点 生命力强，繁殖快，营养丰富，大小适宜， 易培养。 （二）简史 1960年日本伊藤发现褶皱臂尾轮虫作为仔鱼饵料的价值，并进行大量培养技术的探索；1964年日本开始大量培养褶皱臂尾轮虫； 1965年Hirata and Mori发现面包酵母是轮虫的合适饵料；70年代广泛使用面包酵母；随后发现酵母轮虫缺乏鱼类必需的高度不饱和脂肪酸，造成仔鱼大量死亡。因此研究轮虫的营养强化技术；,我国60年代初，傅素宝等（1962）研究壶状臂 尾轮虫；70-80年代，解承林、郑严、王育、何 进金、何连金、张道南、陈世杰等研究褶皱臂 尾轮虫； 90年代，研究轮虫品系的选育，如大轮虫品系、 小轮虫品系（中国

3、科学院海洋研究所）和低温 轮虫品系（15，张学武）； 至今，褶皱臂尾轮虫已经成为一种极为重要的 生物饵料，在世界范围内广泛培养和应用。,（三）应用情况 在60种海洋有鳍鱼类和18种甲壳动物幼体的培育 中应用。 （四）存在问题 探明轮虫两性繁殖的机制； 开发轮虫高密度培养系统； 选育、引进优良的轮虫品系； 如：100um小轮虫和500-1000um大轮虫； 探讨室外土池稳定生产轮虫的技术措施； 进一步探讨轮虫培养过程中增殖率突然 下降的原因和机制。,第二节 轮虫生物学 一、分类 欧美国家：袋形动物门，轮虫纲、真轮毛虫 亚纲、 单生殖巢上目、臂尾 轮虫 目、臂尾轮虫科，臂尾轮虫属。 我国分为：轮虫

4、门，单生殖巢纲，游泳目，臂 尾 轮虫科，臂尾轮虫属。,培养种类：,褶皱臂尾轮虫（Brachionus plicatilis)L型 圆型臂尾轮虫（Brachionus rotundiformis）-S型 壶状臂尾轮虫（B. bennini） 萼花臂尾轮虫（B. calyciflorus） 钩状狭甲轮虫（ Colurella uncinata）：小型。,二、形态特点 轮虫的三大特征 轮 盘：摄食、运动； 咀嚼器：磨碎食物； 原肾管：肾的雏形，内有焰细胞。 雌雄异体、异形 雌性：常见，大小196-250150-202um，结构完整； 雄性：少见，个体小：80-130um，结构简单，只 有轮盘、精巢和

5、阴茎，不摄食；只在不良 环境下看见出现，游泳快，只为了交配。,1、外部结构 被甲：透明、前缘有片状棘（背面6个、腹面4个）； 轮盘部：由棒状突、纤毛环（打动水流）和触毛（感觉 作用）组成； 足部：足趾、足腺；与头部均能缩进。 2、内部结构 消化系统：口（漏斗状） 口腔 咀嚼器 食道（短） 胃（大，消化腺1对） 肠 泄殖腔 肛门 排泄系统：原肾管（焰细胞） 膀胱 泄殖腔,呼吸：靠纤毛打动的水流通过体壁进行气体交换。 神经：脑（咽上N节）和咽下N节 各器官。 另外：眼点（红色）、背触手和侧触手（刺毛为 应激反应）。 生殖系统： 雌体：卵巢（卵黄腺） 输卵管 泄殖腔 肛门。 雄体：发达的精巢和阴茎，

6、遇到雌性就交配。,三种臂尾轮虫的区别, 被甲前端 被甲后端 被甲后 被甲形状 被甲长（ ） 棘刺 （对） 棘刺 （对） 端开口 萼花臂 2 1 园钝形 椭圆形 300-350 尾轮虫 壶状臂 3 0 园钝形 宽钝形 190-240 尾轮虫 褶皱臂 3 0 腹面三角形 椭圆形 S： 80-180 尾轮虫 背面正方形 L：196-250,褶皱臂尾轮虫 Brachionus plicatilis,萼花臂尾轮虫 B. calyciflorus,壶状臂尾轮虫 Brachionus urceus,龟甲轮虫 Keratella,矩形龟甲轮虫,螺形龟甲轮虫,水轮虫Epiphanes,疣毛轮虫 Synchaet

7、a,旋轮虫 Philodina,晶囊轮虫 Asplanchna,三、轮虫的变异 水温变化、饵料质量和培养密度等是引起 轮虫形态和大小变化的主要原因。,S型轮虫（ B. rotundiformis ）：100-190um，适合较高水温下培养；有两个亚种，SS型（高盐）、 SM型（低盐）。 L型轮虫（ B. plicatilis ）：140-290um，适合较低水温下培养的，广盐性种类。,四、生殖习性 单性生殖 即孤雌生殖，某些水生动物在适宜的环境条件下， 雌性个体产生的卵无需受精直接发育成雌性小个 体，如轮虫、枝角类，卤虫等。 在良好环境下：冬卵 （非混交）雌性夏卵（无需受精，挂在足 基部）雌性

8、小个体。褶皱臂尾轮虫大约4h产卵1次，21个卵/雌，持续时间6.7d。,有性生殖 即混交生殖，不混交雌体产生混交雌体，混交雌 体经过减数分裂产生单倍体混交卵（需精卵）。 若混交雌体在年轻时不与雄体交配，不论以后有 无交配混交卵均不受精，发育为单倍体的雄体； 若混交雌体交配了，混交卵受精，精和卵结合为 双倍体的受精卵，再形成壳厚的休眠卵。 在不良环境下，如饥饿、缺氧、密度过高、种 群本身产生化学物质累积和生态环境（水温、盐 度、PH等)突变等，非需精卵混交雌体混交卵 休眠卵（冬卵）。,夏卵 非需精卵，壳薄而 光滑，卵形，个体小；长 56-130，宽48-96 ，挂在 母体上，2-14个。 冬卵（

9、休眠卵） 需精卵 受精 冬卵。 壳厚，个体大，弓形，卵 一端有较大空隙，卵黄呈 橘红色长约130，宽88， 不挂卵。,生活史,诱发两性生殖的因子 （1）外源性因素 生育酚：维生素E直接作用于胚胎发育后期而诱 发混交雌 体的形成； 种群密度：种群密度的控制； 食物：食物的组成、丰度和成分对混交雌体的形 成具有诱发作用；,温度：温度高（30）或低（25）混交 雌体的比例增大； 盐度：在褶皱臂尾轮虫培养中，盐度35，无 产生混交生殖，盐度为2和30，有低水 平的混交生殖，盐度4-20，有高的混交 生殖； pH：较高的pH（8.5）产生的混交生殖越多。,（2）外源性因素 遗传因子：与不同的品系有关；

10、母体的年龄：年龄与混交雌体的比例成负相关； 孤雌生殖的累积时代数：时代数的积累对混交雌 体的产生具有诱导作用。 影响休眠卵形成效率的因素 遗传因素、温度、食物种类和浓度、培养液的盐度、 pH值等。,五、培养环境 温度：适宜2535，低于5不能存活，高于40死亡， 繁殖临界点10和40。 S型：高温下（ 30）繁殖快，个体小； L型：低温下（20-25 ）繁殖快，个体大。 盐度：广盐性，250，适宜1030，最适15-25（海水稀 释培养）； S型：在盐度15-25下，含n-3HUFA最高； L型：在盐度30下，含n-3HUFA最高。 轮虫对盐度突变适应能力差。低盐培养的轮虫投喂时要进行24小时

11、驯化（20 40）,光照：间接影响。对藻类和光合细菌有利，且抑制原生 动物生长。研究认为：适宜440010000lx。 pH： 6-9范围内无不良影响，适宜7.58.1。 溶解氧：保持1.5mg/l以上，耐低氧能力强。L型轮虫缺 氧状态下，经6h有半数存活。0.9mg/L时，生殖率开始下降。 直接影响：轮虫增殖、活力。 间接影响：共存微生物的生物相；投喂酵母时，溶氧保 2mg/l时，细菌生长良好，产生足够VB12供轮虫 增殖用；高溶氧则影响细菌生长。,非离子氨（游离氨）：不超过1mg/L， （一般鱼类的安全值为0.025mg/L）可容纳6-10mg/LNH3+ NH4+ 。 氨氮 NH3+H2

12、O NH4+ + OH- 蛋白质分解 尸体、残铒、粪便 种群密度：（1）密度大：怀卵量少，繁殖慢； （2）密度小：怀卵量多，繁殖快。 间疏采收：轮虫达到一定密度时（200个/ml），繁 殖力下降，必需稀疏密度，才能正常生长。,悬浊物：主要由细菌、粪便、残饵构成；量多时 影响收获作业，并可能把病源性细菌带入饲育池； 可用过滤网垂放于培养槽去除悬浊物。 细菌 细菌相：弧菌属（ Vibrio ）、不动杆菌属 （ Acinetobacter）、假单胞菌属（Pseudomonas） 占 优势时，增殖快。色素生产菌，如黄杆菌属 （Flavobacterium）和解藻朊酸弧菌（Vibrio alginoly

13、ticus ）占优势时，增殖受阻碍。可添加有益 菌保持轮虫培养的稳定性。 维生素V12生产菌：对轮虫增殖有明显的促进作用。,原生动物及其他大型生物 原生动物 鞭毛虫（滴虫 Monas和波豆虫Bodo） 纤毛虫（游仆虫Euplotes 和尾丝虫Uronema） 原生动物的增加，一方面消耗有益轮虫增殖的细菌， 另方面又与轮虫竞争生存空间，对轮虫的增殖非常 不利。 太阳虫（Oxnerella maritima）：分泌毒物刺杀轮虫。 其他大型生物 桡足类、卤虫：捕食轮虫，粪便堵塞收获网目并带入培育池粘附在仔鱼身上。,轮虫培养槽中食物链关系图,六、轮虫培养的饵料,食性：滤食性，靠轮盘部的纤毛打动水流。

14、饵料大小：5-25 m，15 m以下较适合。上限由食道直径决定，下限由咀嚼器 大小决定。 饵料种类：细菌、酵母、微藻、小型原生动物、有机碎屑、微生物团絮、微颗粒饲料等。,七、生长与繁殖 生长 重1-3 ug/只。 夏卵（挂在雌性足基部） 小轮虫 成虫（生物学最小型 ）产卵期 死亡。 个体发育（席贻龙、黄祥飞） 胚胎发育期：卵产出-幼体孵出。 生殖前期：幼体孵出-产出第一个卵。 生殖期：产卵期间（第一个-最后一个）。 生殖后期：最后一个卵产出-死亡。,0.52d,3d,4-5d,生殖量 几-10多个/次，一般为2-4个/次，周期4-5天， 雌性一生平均产卵21个。 寿命 7-10天。与水温成反比

15、；环境好时，寿 命长。,第三节 轮虫的分离和培养,一、种源 分离：水温15时出现，用250-300目的浮游生物网捞取，用眼或在解剖镜下吸出。 休眠卵孵化 产品：600美元/克； 原培养轮虫池排掉旧水（留10-20cm），纳入新水和微藻，池底休眠卵即可孵化。 索取或购买 科研、教学、生产单位的轮虫种。,二、培养方式 一次性培养（batch culture）：水体在10m3以内，先培养藻类接种投喂达到一定密度 一次性收集，需4-7天。S型轮虫（高水温、高密度、高给饵率） 半连续培养（semi- continuous culture ） 间收培养，水体10-40m3，藻类培养接种投喂间疏采收（虹吸法）注入藻液。每天采收， 15-30天移池。L型轮虫（低水温、低密度、低给饵率）,连续培养（continuous