湿热灭菌原理和常用灭菌设备-

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1、湿热灭菌原理和 常用灭菌设备介绍,内容,范围 湿热灭菌基础 灭菌法选择的基本原则 灭菌方法的开发及选定 记录仪表 几种常用的湿热灭菌设备介绍,范围,蒸汽-湿热灭菌具备无残留，不污染环境，不破坏产品表面，易于控制和重现性好等优点，被广泛应用于注射剂的除菌过程之中。 GMP的产生和发展（包括理论和实践）都与药物制剂的灭菌过程有关。对无菌产品的制造厂而言，没有什么比灭菌更为重要,为什么我们的产品需要无菌？,我们讲无菌，涵意是什么?,在生产过程中要做到没有活的微生物是不可能的，因为有： 人员； 原辅料 / 包装材料； 接触产品设备的表面； 用于清洗/淋洗的液体； 环境,物料,人员,设备的表面,清洗液,

2、接种的纸质载体,在革兰氏阴性菌的 细胞壁中脂多糖 这是细菌内毒素 也叫热原,细菌内毒素,革兰氏阴性菌,革兰氏阳性菌,106 105 104 103 102 101 100,灭菌剂量 (时间),对数表示 1 x 103 = 1000 1 x 101 = 10,微生 物数,杀灭微生物,无菌保证水平 达到 10-6,106 105 104 103 102 101 100 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6,微生物数 以恒定的 速率下降 (D value),我们想提高灭菌的“概率” 提高无菌信心的安全限度 无菌保证的水平要优于百万分之一!,杀灭微生物,灭菌剂量 (时间),继续灭

3、菌 以提高无菌保证的水平,106 105 104 103 102 101 100 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6,我们可以检验微生物数的下降情况,杀灭微生物,微生物数 以恒定的 速率下降 (D value),继续灭菌 以提高无菌保证的水平,灭菌剂量 (时间),我们可计算可信度增加 的程度/无菌保证水平,无菌保证水平 达到 10-6,原料的 质量检验,内包装料 的质量检验,对接触产品表面消毒并控制生物负荷,灌封操作。 最终密封容器,内包材料清洗、消毒去热原,全过程强化环境控制,热原控制一直到最后一步,在密封的容器中最终灭菌,SIP,设备消毒,隧道灭菌器,最终灭菌,过程

4、控制示意,湿热灭菌基础,空气 蒸汽 水 细菌 内毒素 过度杀灭 残存概率 其他,过热,潜热,显热,100oC,0oC,热 (能量),温度,蒸汽,压力的测试,表 压,绝 对 压 力,最高 真空,大气压 （约1巴绝压值，表压为0）,最佳真空 （0 巴绝压值）,绝压值=表压值+1个大气压,通常的 压差值,bar a = 绝压值 g = gage的缩写， bar g=表压值， 绝压值与表压 值相差1个大气压,压力沸点表,表压,绝压值,沸点,表压,绝压值,沸点,对灭菌柜及SIP而言 Dryness/干度 潜热的量 Superheat/过热 超过的温度 NCG/不凝气体 不凝气体的 % Condensat

5、e Quality 冷凝水质量 GB 18278-2000 医疗保健产品灭菌确认和常规控制要求工业湿热灭菌.pdf A5.2.2.1 HTM2010HTM2010-31.pdf 9.0 湿热灭菌工艺验证指南-08-12-08.doc 附录 对密封容器中的液体而言 冷凝水质量 (根据风险分析确定),蒸汽的质量,灭菌工艺 (灭菌柜的SIP),不凝气体 测试点,干度和过热 测试点,蒸汽温度 参考点,不凝性气体,造成不凝性气体的原因： 蒸汽发生器的供水温度低(建议 80) 在蒸汽分配系统中滞留空气 (不良的系统设计，疏水器出故障) 蒸汽启动程序不当 (没有将分配管路中的空气吹除掉),蒸汽干度,蒸汽干度

6、是蒸汽中潜热的量度 最理想是100%潜热，有最大的能量来加热装载 限度标准 一般多孔性装载：0.90 (90%) 金属装载：0.95 (95%),蒸汽干度,干度为 0.9 = 90% 的潜热 干度为 1.0 = 100% 的潜热,蒸汽的特性,冷凝水的管理,冷凝水是以下任何一个地方都需要加以管理的问题 蒸汽发生器 蒸汽分配系统 灭菌柜管路 灭菌柜腔室 冷凝水始终不断地产生,冷凝水的管理,蒸汽流动的方向应有斜坡,冷凝水跟着蒸汽流动,冷凝水的管理,冷凝水比蒸汽重， 它会向下流动,湿热灭菌基础,湿热灭菌的机理 细胞繁殖的最终停止 蛋白质变性 湿热灭菌工艺验证指南-08-12-08.doc PDA_TR

7、-1-Technical_Report_No.1.pdf,湿热灭菌基础,影响芽孢耐热性的因素 物理/化学条件 湿度 能量转移 传导 对流 辐射,湿热灭菌基础 微生物杀灭的数学模式,实验表明，在恒定的灭菌条件下，微生物（只指芽孢）的死亡遵循一级动力学规则。 芽孢的杀灭率（体现为残存曲线）是耐热性的函数，与芽孢的数量无关。 采用内生芽孢（生物指示剂BI）的悬浮液或放在载体形式的芽孢进行灭菌试验的结果表明，在湿热灭菌中，半对数规则适用于芽孢的灭活过程。,湿热灭菌基础 微生物杀灭的数学模式,残存曲线可用如下的一级方程式来描述： Log NF = Log No -F(T,z)/DT,湿热灭菌基础 微生物

8、杀灭的数学模式,湿热灭菌基础 微生物杀灭的数学模式,残存曲线的半对数模式必须满足二个先决条件： 挑战菌应是均一的（没有其它杂类芽孢） 挑战菌的灭菌条件相同，或能折算成相同的灭菌条件，例如，折算标准灭菌时间,D VALUE D值,在基础温度下减少一个Log菌数所需的时间。就是在一定温度下，将微生物杀灭90（即下降一个对数单位）所需的时间。,6,5,4,3,2,1,0,-1,-2,-3,-4,-5,-6,1 2 3 4 5 6 7 8 9 10,Log # of Survivors 残存物Log数,Minutes at 121.1 oC 在121.1 oC 时的分钟,D value = 1 D值

9、= 1,Thermal death curve 热杀死曲线,D VALUE D值,微生物名称 温度 介质 D值（分） 嗜热芽胞杆菌 105 5葡萄糖 87.8 嗜热芽胞杆菌 110 5葡萄糖 32.0 嗜热芽胞杆菌 115 5葡萄糖 11.7 嗜热芽胞杆菌 121 5葡萄糖 2.4 嗜热芽胞杆菌 121 5葡萄糖乳酸液 2.1 嗜热芽胞杆菌 121 注射用水 3.0 嗜热芽胞杆菌 105 5葡萄糖 1.3 嗜热芽胞杆菌 105 注射用水 13.7 嗜热芽胞杆菌 115 注射用水 2.1,D 值的测试,低热力程序 或单独测试D值 欧洲药典要求 “确认BIs在121 (+/- 1) 灭菌仍有存活孢

10、子” 用至少106 及D为1.5计算存活时间，得到： 存活时间 (Log No -2) D 值 存活时间 4 x 1.5分 = 6 分钟,对微生物数的说明,BI 的每单元的最低数量 USP 104 EP 5 105 ISO 11138 1 105 通常 106 以获得6个对数下降单位的证据,D 值标准,D 值及第一单元 (BI) 的数量 USP 104 D121 = 1.5 至 3分钟 EP 5 105 D121 1.5 ISO 11138 1 105 D121 1.5 通常 数量 1 106 D121 1.5 分钟,106 105 104 103 102 101 100 10-1 10-2

11、10-3 10-4 10-5 10-6,无菌保证水平 达到10-6,灭菌时间,可测试部分,计算部分,无菌保证水平,活微生物以 恒定速度 /D下降数,继续灭菌 以提高无 菌保证水平,Z VALUE Z值,Z值是指使某一种微生物的D值下降一个对数单位时，灭菌温度应升高的度数。,Z值对于比较不同灭菌过程温度的标准灭菌时间F0值计算是必须的,10,121.1,111.1,131.1,1,0.1,Log of D Value D值的Log数,Z Value = 10 oC Z 值 = 10 oC,Temperature oC 温度,Z VALUE Z值,嗜热芽胞杆菌在不同溶液中的Z值 溶液 Z值（） 5

12、葡萄糖水溶液 10.3 注射用水 8.4 5葡萄糖乳酸液 11.3 PH7磷酸盐缓冲液 7.6 平均 9.4,灭菌方法的开发和选定,过度杀灭法。 假设： N0106 D1211分钟 Z10 将数据代入公式，得L=1，再按计算，达到微生物残存概率为一百万分之一所需的物理及生物杀灭力如下： 物理杀灭力FPHY为12分钟， 生物杀灭力 FBIO D121（LogN0Log NF）12分钟,灭菌方法的开发和选定,残存概率法 假设产品的生物负荷测试中： N0102 D1211分钟 Z10 经灭菌后，微生物残存概率NF小于10-6 利用上面的数值，可以计算出微生物残存概率小于10-6所需的FPHY和FBI

13、O如下： F0FPHYFBIOD121（LogN0Log NF）8分钟,灭菌方法的开发和选定,装载类型的界定 考虑到装载的特性及特定装载的方式。例如，多孔/固体物品通常包括但不局限于以下物品： 过滤器（薄膜式过滤器、筒式过滤器、预过滤器等） 胶塞和其它聚合物密封件 管道和软管 工作服、口罩 清洁用具 设备更换部件，如药液灌装 液体装载通常包括但不局限于以下物品： 已灌装入最终容器（如小瓶、软包装、玻瓶或安瓿）的产品（溶液、混悬剂或乳剂） 已检验或加工后剩下的可能含有致病菌的废液。 灭菌-方法-设备-确认-练习.doc,灭菌策略,决策树 湿热灭菌工艺验证指南-08-12-08.doc PDA_T

14、R-1-Technical_Report_No.1.pdf 如何制定灭菌策略？ 湿热灭菌选择与策略.ppt,湿 热 灭菌,湿热比干热快. 与干热灭菌相比，湿热灭菌杀灭微生物的速度要快五倍,热力杀灭. 70时，大多数微生物会死亡,10%,1%,0.1%,0.01%,灭菌柜总会有泄漏,压力,0.001%,门密封,垫圈,阀门,欧洲的泄漏率测试标准BD测试和泄漏测试-HTM2010-11.doc 保持10分钟： 13mB 真空低于 70mB(a) 温度稳定 注：1.3 mB 由 1mm Hg (原始标准)换算而得,灭菌柜总会有泄漏,生产前 工程设计及试车 开发灭菌程序/周期 验证 常规生产时 排放点温

15、度 腔室压力 记录时间,根据装载所有部分的热力学及 生物学数据,不能直接知道在装载内部 正发生什么情况,性能的监控,液体灭菌,最终灭菌的目标,无菌保证水平优于百万分之一 将每个接触面加热并使其及药液升至121，保持20分钟 产品不能损坏.,蒸汽引入,T,P,温度 .,液体装载的灭菌,你的待灭菌装载,要考虑哪些问题? 蒸汽能否穿透? 高密度包装的装载 滞留冷凝水? 这是否影响灭菌? 塑料 / 软包装容器 是否因灭菌损坏? 如何对灭菌周期监控? 怎么知道蒸汽已穿透到所有部位？,蒸汽能穿透吗?,验证将能证明，蒸汽能够穿透到所有装载 因此，装载必须和经验证的方式相同 会出什么问题呢?,冷凝水滞留,引入蒸汽后，它不只是充满腔室以及装载之间，它必须将所有地方升温，包括 产品 灭菌车 腔室 肯定会生成冷凝水! 必须控制冷凝水!,冷凝水滞留,在开始的低温度下，就会产生冷凝水了 如果让冷凝水积聚，它就成为积聚装载的绝热体. 在此情况下，是看不出来的. 这部分装载将达不到你所预期的灭菌效