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1、食物中毒微生物检验及副溶血弧菌的鉴定,汤丽霞制作,实验要求,食物中毒的微生物检验 掌握副溶血弧菌的生物特性、细菌形态、生化反应及鉴定方法。,材料,剩余可疑中毒食物、呕吐物、粪便 中国兰平板 血平板 双糖培养基 半固体培养基 弧菌微量生化反应编码鉴定管,细菌性食物中毒概述,中毒发生的原因 （三个环节） 1 食品被致病菌污染 2 食品中污染的致病菌有繁殖的机会 3 食用前未加热或未彻底加热,标本采集,可疑食物：采取中毒病人吃过的剩余可疑中毒食物，剩余中毒食物可用灭菌盛装容器盛装。也可采可疑食物接触过的工具、容器涂抹标本。原包装物和半成品或原料均可采样。做微生物检验样品要用灭菌容器，以无菌手续采样。
2、其样品数量为： 肉及肉制品:从不同部位取500克以上；桶装食品从上、中、下部取500克以上；腌渍食品采取100200ml液汁，放入另一容器 ；鱼500克以下，大鱼可从23个不同部位取样；流体、半流体食品在充分搅拌后取200ml； 洗涤水每份100200ml。,标本采集,排泄物：采取何种样品应根据病人的临床表现及初步可疑病因诊断检验项目而定。吐泄物每份取50100克，作微生物检验时样品量可为15克，或从肛门直肠采样；洗胃 液还要加大样品量.,标本采集,血液或尿液：怀疑为感染型细菌性食物中毒时，在急性期可采血进行致病菌检验，分离血清，再从恢复期同一中毒病人采血液分离血清，与检出可疑病原菌作血清凝集
3、试验。血样每份25 ml。可疑为化学性食物中毒时（为砷、汞、铅等）应采取病人的尿液送检。尿液每份100200ml；如了解一日排毒量，则应记录24小时排尿量。,标本采集,解剖标本：必要时，征得病人家属同意，对中毒死亡者作尸体解剖，采取内脏标本送检 ，进行病理、毒物及微生物检验。,标本采集,带菌者检查：对食品生产经营人员和直接接触食品的人员作可疑带菌检查，可取粪便、鼻咽 腔分泌物以及皮肤涂抹等。,标本采集样品送检,检样标明样品名称，送检目的、检验项目、送检材料要注明件数、样品量、采样条件、时间、容器灭菌及清洁方法，食物中毒发生情况及可疑原因等。填写送检单。检验室接到检样后，要检查样品及送检资料后签
4、字，注明接到时间，立即进行检验。检验人员根据检验中的发现，可进行送检项目外的项目的检验。,细菌性食物中毒： 致病菌检验：对中毒食物、病人排泄物、血液进行检验，作为确定诊断的依据，对环境、设备、工器具、包装材料等的检验，也是诊断的参考依据，以确定污染环节、原因、条件等。 致病菌计数检验：有些食物中毒原因菌的检验，需对可疑中毒食品中的活菌数做测定。 如腊样芽胞杆菌，只有食品中含菌量105个/克时，才能引起食物中毒，病原性大肠埃希氏菌也应做“MPN”测定；产气荚膜梭菌的重点是活菌计数及确证试验；葡萄球菌也应做菌 数检验。对国际上尚未被公认的食物中毒病原菌如变形杆菌属，更需要做计数检验。,标本采集样品
5、送检,病例,2010年10月16日下午4点10分，右江民族医学院附属医院急诊科接到右江矿务局出诊电话，现有60多人出现腹痛、呕吐、腹泻及水样便为主要症状 ，要求我院马上出诊，对病人进行就治。 经了解病人在食堂开饭，吃了大量的豆芽及冻鱼。 我院的治疗方案：洗胃，大量输液，重者血透。,第一天实验操作,食物中毒标本 血平板、SS平板/人 老师发下菌种： 1、观察细菌形态 2、氧化酶试验 3、双糖 4、半固体 5、弧菌微量生化反应管 2人,形态与染色,1、革兰氏阴性无芽胞多形态杆菌，单端鞭毛、两端浓染。杆状、棒状、甚至球状、丝状等,培养特性：,1、需氧或兼性厌氧：生长最好 2、在2%NaCL培养基中生
6、长最好，无盐或食盐10%不能生长。 3、最适温度36，PH7.57.8（7.7） 4、在专用选择性平板上，菌落呈圆形凸起，混浊不透明，表面光滑，较湿润，边缘不整齐。 5、血平板：可见溶血环。,（三）生化特性,1、分解GLU产酸不产气，不分解乳糖，蔗糖。 2、H2S（）、V-P（）、靛基质（）、 精氨酸（） 3、甲基红（）、赖氨酸（）、溶血/-,细菌运动试验,在新鲜的标本中，细菌游动活跃，呈流星样穿梭。 取新鲜的标本，压滴法观察细菌运动情况。,三、检验操作要点,采样样品处理增菌培养分离培养3.5%氯化钠双糖铁培养基嗜盐性试验生化鉴定动物试验结果报告,1、采样： 患者粪便、呕吐物、可凝食品。 从海
7、产品的体表面，肠内容物，鳃等取样 包装物，炊具用具。 快，不宜低温保存。 2、增菌培养：Nacl结晶紫增菌液，37 816小时。,3、分离培养： Nacl蔗糖平板：圆形，半透明或不透明，无粘性，(绿)兰色，直径24mm 嗜盐选择性平板：直径2.5mm，圆整或不齐，隆起混浊，无粘性，无色，湿润。 4、3.5%Nacl-TSI 培养37 24小时 5、镜检：应为革兰氏阴性，无芽胞多形态，两端浓染。,6、嗜盐性试验：,将可疑培养物接种于不同盐浓度的盐胨水中，37 24小时，观查生长情况。盐含量0、3、7、9、11% ， 在37 %生长良好。, 11,副溶血弧菌的生化特性,葡,V葡磷,I蛋水,蔗,甘,阿,肌,赖,赖 对,精,精 对,0%,3%,6%,8%,10%,/,/,A液B液,靛基质,实验报告,实验题目 实验目的 实验过程（接种平板、细菌菌落形态、细菌形态、生化项目及结果） 最后报告,思考题：,1、副溶血性弧菌的形态与染色有何特点。 2、副溶血性弧菌的生化特性中最有特点的是哪个项目，如何利用这个项目，诊断某细菌是否是副溶血性弧菌。,
