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1、人教版选修1,专题2 微生物的培养与应用 课题1 微生物的实验室培养,微生物包括哪五类：,病毒 细菌 放线菌 真菌 原生动物,原核生物界,原生生物界,真菌界,病毒界,微生物的实验室培养条件：,（1）合适的营养和环境条件,（2）确保其他微生物无法混入,一. 培养基,1. 概念：,按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。,1、培养基可以分为哪两类？,2、培养基一般都含有哪些营养物质，此外 还要满足哪些要求？,3、获得纯净培养物的关键是什么？,4、避免杂菌污染的方法主要包括哪四个方面,5、什么是消毒、灭菌，常用方法有哪些？,6、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的方法步骤,7、如何倒平
2、板？,（1）按物理状态来分：培养基可分为固体培养基和液体培养基。其中固体培养基用于菌种分离、鉴定菌落等。 （2）按功能来分，可分为选择培养基和鉴别培养基。 （3）按成分来分，可分为天然培养基和合成培养基。,1、培养基分类：,一、培养基,2、选择培养基,加入青霉素的培养基: 分离酵母菌、霉菌等真菌 加入高浓度食盐的培养基: 分离金黄色葡萄球菌 不加氮源的无氮培养基: 分离固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基: 分离自养型微生物 加入青霉素等抗生素的培养基: 分离导入了目的基因的受体细胞,思考1琼脂是从红藻中提取的 ，在配制培养基中用作为 。,多糖,凝固剂,不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、和氮源
3、、 无机盐等营养物质， 另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质,例如:生长因子(即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧气、二氧化碳、渗透压等的要求。,3、培养基的营养物质,（1）培养基一般都含有哪些营养物质，此外 还要满足哪些要求？,碳源：如CO2、糖类、脂肪酸等有机物，构成微生物的结构物质和分泌物，并提供能量。 氮源：如N2、氨盐、硝酸盐、牛肉膏、蛋白胨等，主要用来合成蛋白质、核酸及含氮代谢物等。含有C、H、O、N的化合物既可以作为碳源，又可以作为氮源，如氨基酸等。,牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供 糖 、 维生素 和 有机氮 等营养物质。 培养
4、乳酸杆菌时需要添加 维生素 ， 培养霉菌时需要将培养基pH调节为 酸性 ， 培养细菌时需要将pH调节为 中性或微碱性 。,（2）获得纯净培养物的关键是什么？,（3）避免杂菌污染的方法主要包括哪四个方面,（4）什么是消毒、灭菌，常用方法有哪些？,无菌技术包括： （1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行 清洁和消毒 ； （2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行 灭菌 ； （3）为避免周围微生物污染，实验操作应在 酒精灯火焰附近 旁进行； （4）避免已灭菌处理的材料用具与 周围物品 相接触。,消毒与灭菌,消毒：指使用较为温和的物理或化学方法 仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害 的微生物（不包
5、括芽孢和孢子）。 灭菌：指使用强烈的理化因素杀死物体内 外所有微生物，包括芽孢和孢子。,灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。,二、无菌技术,消毒的方法：,1、煮沸消毒法:100煮沸5-6min 2、巴氏消毒法：70-75 下煮30min或 80 下煮15min 3、化学药剂消毒法:用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源 4、紫外线或化学药物消毒,灭菌的方法：,1、灼烧灭菌 2、干热灭菌：160-170 下加热1-2h。 3、高压蒸汽灭菌：100kPa、 121 下维持15-30min.,6、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的方法步骤,7、如何倒平板？,培养基的配制原则
6、： 目的要明确：根据培养的微生物种类、培养的目的等确定培养基的类型和配制量。 营养要协调：培养基中各种营养物质的浓度和比例要适宜。例如：碳氮比41时，谷氨酸棒状杆菌大量繁殖而产生谷氨酸少；碳氮比为31时，菌体繁殖受抑制而谷氨酸合成量大增。 pH要适宜：细菌培养基pH中性或偏碱性，霉菌培养基呈酸性。,三、实验操作,计算：根据配方比例，计算100mL培养基各成分用量。 称量：准确称取各成分。称取牛肉膏和蛋白胨时动作要迅速，目的是防止牛肉膏吸收空气中水分。 溶化：加水加热熔化牛肉膏；加入蛋白胨和氯化钠继续加热；加入琼脂；用蒸馏水定容到100mL。整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破
7、裂。 调pH：用1mol/LNaOH溶液调节pH至偏碱性。 灭菌：将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加塞包扎后用高压蒸汽灭菌锅灭菌；所用培养皿用报纸包扎后用干热灭菌箱灭菌。 倒平板：待培养基冷却至50左右时在酒精灯火焰附近操作进行。,1、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,1、培养基灭菌后，需要冷却到50 左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？,答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。,2、为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？,答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。,问题讨论：,3、平板冷凝后，为什么要将平板倒置？,4、在倒平板
8、的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？,答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。,答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。,2、纯化大肠杆菌,接种方法有： 平板划线法和稀释涂布平板法,平板划线法:通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面. 在数次画线后,可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这就是菌落.,微生物的恒温培
9、养,1、为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？,答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。,问题讨论：,2、在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？,答：以免接种环温度太高，杀死菌种。,3、在作第二次以及其后的划线操作时，为什
10、么总是从上一次划线的末端开始划线？,答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。,稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。,涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？,应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。,问题讨论：,菌种的保存,1、临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4冰箱保存。 2、长期保存：甘油冷冻管藏法,
